正交设计法在白三叶组织培养中的应用

以白三叶的叶片为外植体,采用正交设计法,对愈伤组织生长和细胞悬浮培养的培养基进行了优化筛选。实验结果表明,白三叶叶片愈伤组织生长的最佳培养基配方为ＭＢ＋０．５ｍｇ／Ｌ ２,４－Ｄ＋０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋２ｍｇ／Ｌ甘氨酸＋１００ｍｇ／Ｌ肌醇＋３％蔗糖＋０．７％琼脂;细胞悬浮培养的最佳培养基的配方为ＭＢ＋４ｍｇ／Ｌ ２,４－Ｄ＋０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ ＢＡ＋２ｍｇ／     

红三叶和白三叶愈伤组织的诱导和胚性细胞悬浮系的建立

以红三叶（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍｐｒａｔｅｎｓｅ）野生品种巴东红三叶的叶片为外植体,在ＭＢ－１至ＭＢ－９的固体培养基上诱导愈伤组织,筛选出最佳培养基是ＭＢ－９培养基．以白三叶（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍｒｅｐｅｎｓｅ）裁培品种“路易斯安娜”和“Ｈｕｃａ”的叶片为外植体,接种在ＭＢ－９固体培养基上诱导愈伤组织．愈伤组织形成以后,均在ＭＢ－９固体培养上继代培养３～４次后,获得胚性愈伤组织,然后转至ＭＢ＋３ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋０７ｍｇ／ＬＢＡ＋０２ｍｇ／ＬＮＡＡ＋２ｍｇ／Ｌ甘氨酸＋５００ｍｇ／ＬＣＨ＋３％蔗糖的液体培养基中,经强化培养,２个月后,获得胚性细胞悬浮系．实验结果表明,缩短换液时间,即每隔３～４ｄ换一次,可加快胚性细胞悬浮系的建立．     

大叶相思体细胞胚胎发生的初步研究

以种子萌发的无菌苗下胚轴为外植体，在Ｂ５＋２，４－Ｄ（１０－４ｍｏｌ／Ｌ）＋ＢＡ（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）＋ＣＨ０．５ｇ／Ｌ的固体培养基上培养４周，获得了胚性愈伤组织．该愈伤组织经Ｂ５＋２．４－Ｄ（１０－４ｍｏｌ／Ｌ）的液体培养基７ｄ的诱导在Ｂ５＋Ｌ－谷氨酰胺（２００ｍｇ／Ｌ）＋ＣＨ（０．５ｇ／Ｌ）的液体培养基上培养１４ｄ产生了球形胚．球形胚具有明显的两极，但只是根端发育，苗端并没有发育     

高蛋白籼稻品系H28胚培养力的初步研究

以籼稻Ｈ２８优良品系为材料，通过胚培养诱发愈伤组织并继代培养，最适的诱导培养基为ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ，在此培养基上产生的愈伤组织具有较强的分化能力，将愈伤组织转移到分化培养基，光照培养１７ｄ后，在ＭＳ＋０．２５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１ｍｇ／Ｌ ＢＡ的分化培养基上，愈伤组织的芽分化率可达４０％。在分化培养基上培养１０ｄ后，将愈伤组织转移到无激素或低浓度激素的培养基上，其分化出苗率有明显的提高。     

荞麦组织培养中的植株再生

用荞麦无菌苗的幼茎和幼叶作外植体分别接种在ＭＳ补加不同激素组合的培养基上培养获得再生植株。实验结果表明,适宜诱导愈伤组织的激素组合为２．４－Ｄ４．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ,适宜愈伤组织生长的激素组合为２．４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ１．０ｍｇ／Ｌ。诱导芽的较适宜的组合为６－ＢＡ３．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ,不定芽接种到含ＭＳ＋ＩＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上就能生     

茴香原生质体培养研究

以茴香（ＦｏｅｎｉｃｕｌｕｍｖｕｌｇａｒｅＬ．）幼苗茎切段在ＭＳ附近２，４－Ｄ１ｍｇ／Ｌ、６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上诱导产生愈伤组织，经４～５次继代后形成胚性愈伤组织。将胚性愈伤组织转至ＭＳ＋ＮＡＡ１ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．２５ｍｇ／Ｌ的液体培养基中培养，形成胚性细胞悬浮系。悬浮细胞在含有１．５％纤维素酶、１％果胶酶、０．５％蜗牛酶的混合酶液中酶解得到大量的原生质体，原生质体用修改的ＫＭ８Ｐ培养基中做液体浅层培养。２天后细胞发生一裂，两个月后形成０．５～１ｍｍ大小的小愈伤组织，转入含琼脂糖的固体培养基中３周后形成２～３ｍｍ的愈伤组织     

荔枝（Litchi chinensis）细胞培养的初步研究

用荔枝无菌苗作为外植体，在添加了ＡｇＮＯ３呈蜂王浆的含１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ和１ｍｇ２，４－Ｄ的ＭＳ培养基中诱导出愈伤组织，在同样培养基中继代培养，得到了的２细胞系，这种细胞在含１ｍｇ／Ｌ－６－ＢＡ＋２ｍｇ／Ｌ，２，４－Ｄ的ＭＳ培养基中悬浮培养，培养周期２５ｄ，结果表明，维生素Ｃ和ＮａＣｌ在悬浮２中有良好的防褐作用。     

杜仲细胞的悬浮培养

杜仲外植体在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ的培养基上可诱导出生长速度快、离散性好、适合于悬浮培养的愈伤组织；愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的液体培养基上进行振荡培养，经３～４次继代，即可建立起悬浮细胞系；悬浮细胞的形状为长形、椭圆形、圆形和“月牙”形。     

莜麦组织培养及再生植株

以莜麦（Ａｖｅｎａｎｕｄａ）成熟种子为材料，研究了培养基成分对愈伤组织的诱导、分化和继代保持的影响。通过对ＭＳ为基本培养基附加２，４－Ｄ、６－ＢＡ、ＫＴ、ＺＴ等成分的各种培养基上诱导产生的愈伤组织观察比较，发现在２，４－Ｄ浓度为２ｍｇ／Ｌ时，诱导产生的愈伤组织量最多，随着２，４－Ｄ浓度降低，愈伤组织形成的量也减少；在２，４－Ｄ１ｍｇ／Ｌ、ＫＴ０．２５ｍｇ／Ｌ的培养基中愈伤组织能分化出芽，产生大量苗，进而再生植株。实验结果表明，在继代培养基中加入一定量的ＡＢＡ和ＺＴ，能有效地促使褐化的愈伤组织恢复正常，使之保持良好的生长状态和分化能力。     

金桔不同外植体的离体培养研究

用金桔无菌苗的下胚轴、子叶、幼叶及幼根为外植体，在含不同激素的培养基上诱导愈伤组织发生，结果表明：以ＢＡ１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ为最适宜培养基，下胚轴为最适宜材料；２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ不适合金桔愈伤组织的诱导。     

三叶半夏细胞悬浮培养和植株再生的研究

三叶半夏幼嫩叶片在MS+2,4-D2.0mg/L+BA0.5mg/L培养基上一个月内可以诱导出愈伤组织.取颜色鲜黄的愈伤组织进行悬浮振荡培养,经3～4次继代培养得到分散性好的细胞悬浮系.悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养12～16d达对数生长期,细胞鲜重在第18d达到最大值.悬浮液pH值的变化在对数生长期同生长曲线一致.将细胞悬浮液过滤得到的小细胞团接种于MS+NAA0.2mg/L+BA1.0mg/L分化培养基上,40d分化出小植株.     

丹参嫩茎组织培养及无性系建立的研究

为保护濒危植物丹参,实现人工栽培,以嫩茎为材料,进行了愈伤组织诱导与分化、试管苗生根、继代、移栽和定植研究.结果证明:MS+6-BA0.3 mg.L-1+2,4-D2.0 mg.L-1+NAA0.8 mg.L-1是丹参嫩茎愈伤组织诱导培养和继代培养的理想培养基;1/2MS+AgNO30.2 mg.L-1和1/2MS+AgNO30.2 mg.L-1+6-BA 0.1 mg.L-12种培养基是丹参颗粒状愈伤组织块分化培养的理想培养基;以经过浓度为10mg.L-1的NAA溶液处理3 m in的不定芽为材料、以1/3MS+IAA0.4 mg.L-1为培养基的方法是丹参不定芽生根培养的理想方法.试管苗移栽成活率为92.7%,定植成活率为99.2%.定植的试管苗保持了野生丹参的所有生物性,建立起丹参的无性系.     

水稻悬浮系细胞的建立及植株再生

水稻（辽盐9）种子在LS＋2,4－D（2,4-二氯苯氧乙酸）2．0～3．0mg/L的培养基上进行诱导培养,经3～4次继代后,即可得到淡黄色颗粒性愈伤组织;将该种愈伤组织在LS＋2,4－D2．0～3．0mg／L＋LH（水解乳蛋白）300mg/L的液体培养基上进行振荡培养,经4～5次继代后,即可建立起良好的细胞悬浮系;培养基中附加2．0～2．5mg／LKT,使愈伤组织和悬浮细胞均可再生,其再生率分别为15．9％～17．9％和18．1％～20．8％。     

台湾相思的组织培养

以种子萌发无菌苗研究台湾相思的组织培养,结果发现子叶、下胚轴是诱导愈伤组织的理想外植体,最适培养基为MS BA2 2,4-D0.2 3%蔗糖,子叶及下胚轴诱导的愈伤组织在MS BA4 NAA0.2-0.4培养基中的出芽效果较好,子叶直接在MS 4-PU0.5培养基中诱导丛生芽效果最好,出芽率达90%,根诱导培养基为MS IBA2 NAA1,生根率为27.8%。     

湘西辣椒花药离体培养及其再生植株染色体数目的变异

利用辣椒花药诱导单倍体研究表明：NTH,MS培养基均能诱导产生愈伤组织和胚状体,但NTH培养基比MS培养基培养效果好,以NTH+6-BA 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+KT 1.2mg/L+AgNO₃ 5.0 mg/L为愈伤组织和胚状体诱导的适宜培养基。通过花药培养获得的辣椒植株中,具有丰富的倍性变异,经染色体计数鉴定,单倍体( n=12 )约14%,二倍体(2n=24 )约46%,四倍体(4n=48 ) 约4%,各种混倍体约36%.     

贴梗海棠组培快繁技术研究

对贴梗海棠的外植体进行了愈伤组织和植株再生体系研究．结果表明,带芽茎段为最适外植体;诱导芽的最适培养基为Ms＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．2mg／L芽生长培养基为MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．2mg／L;在1／2MS＋NAA0.3mg／L培养基上,生根率为90％．     

Studies of Improving the Frequency of Indica Rice Transformation by Biolistic Bombardment

In order to improve the frequency of indica rice transformation by biolistic bombardment,suitable culture conditions for embryonic calli,an optimal selection scheme for resistant calli and seedling,and optimum bombardment parameters a investigated by using 14 commercially important indica rice cultivars.The main results show that the CC medium with 36g/L mannitol is a scheme subculture medium in which the browning of indica rice calli can be mitigated significantly;The concentration of 30-40mg/L Hyg or 150-200mg/L G418 or 10-20mg/L Basta is suitable for selection of resistant calli;The transformation parameters of 100μg gold powder absorbing 0.2μg DNA per shot and 900 psi helium pressure and 6 cm bombardment distance and bombarded twice for each plate give the best result;Keeping the target calli on osmotic medium containing 60g/L mannitol from 12-24h before bombardment to 24-48h after it can increase the efficiencies of transformation.Furthermore,some transgenic indica rice plants are obtained using this optimized transformation system.     

祁连龙胆愈伤组织和再生植株的生长及其两种药效成分分析

通过不同激素组合的培养基筛选出祁连龙胆（Gentiana Przewalskii Maxim.）的快速生长细胞系并获得再生植株. 采用反相高效液相色谱法测定愈伤组织及其再生植株中獐牙菜苦甙（Swertiamarin）、龙胆苦甙(Gentiopicroside)的含量. 结果表明：(1）祁连龙胆愈伤组织在不同培养基上诱导率和生长速度不同，在MS+2?mg/L 2,4 D +1?mg/L 6 BA +6?mg/L GA的培养基上诱导率最高，达78.0％. 在MS+3?mg/L 2,4 D +0.5?mg/L KT的培养基上生长最快，增殖倍数达到7.18； (2）祁连龙胆愈伤组织及其再生植株有效成分及含量与原植株相比均有差别，其中，愈伤组织含有0.265%的龙胆苦甙，低于原植株(4.225%)，再生植株含有0.279%的獐牙菜苦甙和1.579%的龙胆苦甙，前者高于原植株（0.260％），但后者略有下降. 按生长速度推算，愈伤组织及其再生植株积累的药效成分含量明显高于原植株，值得进一步开发利用.