畜禽产品沙门氏菌和大肠杆菌O157快速检测试剂盒:快速、敏感又特异

近日,由省微生物研究所和广东环凯微生物科技有限公司共同承担的广州市科技攻关项目———畜禽产品沙门氏菌和大肠杆菌O157快速检测试剂盒的研制与开发通过了由广州市科技局组织的验收。该项目建立的三种检测方法具有     

快速检验食品中沙门氏菌和O157:H7大肠杆菌

利用沙门氏菌快速检验装置(Oxoid公司出口）和可视免疫沉淀物（VIP）试剂盒（BioControlSystems公司出口）对广西桂林市的七星区某农贸市场的20种食品进行了沙门氏菌和O157：H7大肠杆菌的快速抽样检验，结果发现，其中的11种食品的沙门氏菌呈阳性反应，4种食品的O157：H7大肠杆菌也呈阳性反应，与目前国内普遍使用的传统检验方法相比，该方法具有快速、简便、高效、准确的特点。     

抗沙门氏菌O8因子单克隆抗体的研制及初步应用

制备抗沙门氏菌O8因子单克隆抗体,建立C2、C3亚群沙门氏菌酶联免疫吸附分析检测方法.用加热灭活的纽波特沙门氏菌免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合建立分泌抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA法检测及鉴定单克隆抗体,酶联免疫吸附分析法初步判断抗体应用于检测试剂的可能性.得到4株与沙门氏菌C2、C3亚群菌株发生反应的单克隆抗体细胞株,分别命名为6F2、7A2、8D8和8D9;4株抗体与肠道正常细菌和常见的致病细菌无交叉反应;单克隆抗体免疫球蛋白类型分别为小鼠IgG_1、IgG_3、IgG_(2b)、IgM,轻链均为kappa;用单克隆抗体7A2和8D8研制的酶联免疫吸附分析试剂盒,对沙门氏菌C2亚群的纽波特沙门氏菌、波那雷恩沙门氏菌和C3亚群的肯塔基沙门氏菌的最低检出值均可达到10~5cfu/m L.获得的单克隆抗体具有较高的特异性,有可能应用于生产检测C2和C3亚群沙门氏菌的酶联免疫吸附分析试剂盒.     

自制和进口试剂盒在犬细小病毒检测中的应用

用本研究室研制的犬细小病毒单克隆抗体和多克隆抗体，采用夹心ＥＬＩＳＡ原理，研制成功犬细小病毒快速诊断试剂盒。对８７份犬粪便样品进行检测，并与ＨＡ法和美国ＩＤＥＸＸ公司研制的ＥＬＩＳＡ试剂盒进行比较。结果表明，与ＨＡ法相比，自制试剂盒的敏感性为９３．３％，特异性为１００％，总符合率为９５．４％；与美国试剂盒相比，自制试剂盒的敏感性为１００％，特异性为８４．６％，总符合率为９５．０％，达到国外同类产品     

钙快速检测试剂盒

针对目前钙检测试剂盒使用不够简便快速。检测终点不易判断，测定不够精确的问题。本产品在设计原理和设计思路方面进行突破。吸收了现有试剂盒的优点，如功能细化、携带方便等；同时，克服了其精确度较低、操作步骤复杂、应用范围小等不足之处。另外，简化了检测装备和检测过程，降低了试剂盒成本。本产品设计独特，制作简单、精良，产品构成简单，易于生产与宣传。     

食品中沙门氏菌LAMP快速检测方法的建立

食品及其原料中沙门氏菌的快速、现场检测对食品安全控制具有重要意义.根据沙门氏菌invA基因核苷酸序列设计一组引物,应用环介导等温扩增技术（LAMP）,分别对7种不同血清型沙门氏菌和4种非沙门氏菌进行扩增,同时建立沙门氏菌人工污染的食品模型,比较了LAMP法与活菌计数检测的敏感性.结果表明,该方法仅对沙门氏菌产生特异性扩增,灵敏度高达336,mL-1,食品样品经细菌富集培养后,检测灵敏度高达8.25,g-1.所建立的检测沙门氏菌方法具有较高的特异性与灵敏性,操作简单、快速,可用于沙门氏菌污染食品的快速检测.     

夹心ELISA检测新冠病毒及其抗原方法的建立和验证

研究制备了快速检测新冠病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）及其表面刺突糖蛋白受体结合域（receptor-binding domain,RBD）的ELISA试剂盒.该试剂盒由一对RBD单克隆抗体作为捕获抗体与检测抗体，其中检测抗体进行辣根过氧化物酶（HRP）偶联，通过方阵滴定法确定双抗夹心ELISA的最适工作条件.另外，对检测试剂盒进行线性、特异性、准确度、精密度等进行了验证.结果表明，双抗夹心ELISA方法中捕获抗体和酶标检测抗体的效价分别为1∶160 000和1∶320 000，试剂盒的定量检测下限为31 ng/mL.经验证，组装的试剂盒精密度为0.71%～1.59%，平均准确度为96.53%，与其他的同种属灭活病毒无交叉反应.试剂盒各项参数均符合《中国药典》（三部）2020版标准，表明该试剂盒适用于新冠病毒以及RBD抗原的快速检测.     

梨树ASPV检测试剂盒研制及其应用

以库尔勒香梨为材料,利用SDS法提取总RNA,通过苹果茎痘病毒（apple stem pitting virus,ASPV）的基因组序列设计特异性寡核苷酸引物,利用RT-PCR技术研制梨树ASPV的RT-PCR检测试剂盒。该试剂盒的检出其痕量为2．88pg,整个检测过程只需6～8h。该试剂盒在常温下能保存l周以上,在4℃条件下可保存1年以上。试剂盒扩增ASGV病毒,不能得到特异性带。与用NASH方法检测病毒比较,结果表明,该ASPV试剂盒具有特异、灵敏等优点。利用此试剂盒能很好地对梨树ASPV病毒进行检测。     

我国科学家成功研制了维生素系列快速检测试剂盒

正在"十二五"国家科技支撑计划、"十三五"国家重点研发计划"食品安全关键技术研发"等国家科技计划的支持下,江南大学食品学院生物界面与生物检测研究团队成功研制了维生素免疫快速检测试剂盒(包括维生素B1、B2、B6、B12、D3、叶酸、生物素等)。通过产业孵化,维生素免疫快速检测试剂盒近日已成功投入市场,相关产品已被万孚生物技术股份有限公司(美国分公司)等采购。维生素是人体不可缺少的营养物质之一,也是评价食品和药品品质的重要标准。常规的色谱、质谱方法     

舞阳河水质微生物污染的初步研究

舞阳河系浞贵州著名的风景旅游区，随着城市人口的增长，河水水质的污染日趋严重，为了进一步摸清污染情况，对舞阳河城关段，水质作了取样检测，结果表明：河水含有大肠杆菌，副伤寒沙门氏菌，鼠伤寒沙门氏菌，乙种副伤寒沙门氏菌，伤寒杆菌，猪霍乱沙门氏菌，土味链霉菌，灰色链霉菌，并对大肠杆菌和猪霍乱沙门氏菌进行培养及细胞形态，培养物质征，生理特征等性状作了为详细的观测和描述。     

4-甲基伞形酮类显色底物的合成及在微生物检测中的应用研究

以简单原料葡醛内酯，经过3步反应，对伞形酮类显色底物4-甲基-7-氧香豆素-β-D-葡萄糖苷酸进行了合成，目标产物中涉及的各步中间体，均通过核磁（¹H-NMR、¹³C-NMR）等方法进行了分析表征，确定了合成工艺的可靠性。同时，通过病原微生物的荧光显色实验显示，4-甲基-7-氧香豆素-β-D-葡萄糖苷酸与大肠杆菌代谢酶结合反应后，显色效果较好，能够快速精准的检测出大肠杆菌。     

胭脂红酸ELISA检测试剂盒的制备及应用

为了快速高效检测肉类食品中胭脂红酸含量,制备了胭脂红酸ELISA检测试剂盒,检测了市售肉类样品中胭脂红酸含量,并通过高效液相色谱法进行了验证。结果显示试剂盒的检测限为1 ng/mL,线性范围7. 8～1 150 ng/mL,灵敏度IC50值为95. 2 ng/mL;该试剂盒中的检测抗体对胭脂红的交叉反应率为108. 7%,但与其他4种色素添加剂均未见交叉反应。检测市售肉类样品的批内回收率在79. 1%～103. 1%之间,批间回收率在81. 6%～98. 8%之间;批内、批间试验的相对标准偏差基本小于10%,且与HPLC方法具有良好的一致性(R2=0. 927),说明该试剂盒具有灵敏、准确、简便、快速的特点,为胭脂红酸免疫学快速检测方法的建立提供了技术基础。     

农产品微生物安全快速检测及控制技术：食品检验更快速、更安全

由省微生物研究所和广东环凯微生物科技有限公司承担的2007年农业科技成果转化资金项目“农产品微生物安全快速检测及控制技术的应用”通过了省科技厅组织的科技成果鉴定。该研究项目从四个方面入手进行科技攻关：食源性致病菌分子检测与显色生化检测技术研究、食源性病毒检测技术研究、     

电阻抗法检测低酸性罐头食品商业无菌的方法研究

应用电阻抗法检测低酸性罐头食品商业无菌中的大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、粪链球菌、生孢梭菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌等7种主要原因菌,建立一种低酸性罐头食品商业无菌的快速检测方法。电阻抗法全部检测过程可在3d内完成,检测结果快速、灵敏、准确可靠,适用于低酸性罐头食品商业无菌的快速检测。     

猴免疫缺陷病毒(SIV)双抗原夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用

目的研制灵敏、特异的检测血清中猴免疫缺陷病毒(Simian Immunodeficiency Virus,SIV)的双抗原夹心ELISA(dsELISA)诊断试剂盒并进行初步应用。方法采用原核表达系统表达并纯化的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)包膜蛋白(gp41)作为包被用抗原,建立dsELISA诊断方法。通过优化反应条件和筛选试剂,研制ELISA诊断试剂盒,经敏感性、特异性和重复性试验考核试剂盒的质量,并与美国BIORELIANCE公司试剂盒进行比较,将结果经美国VRL验证,判断本试剂盒与美国BIORELIANCE公司试剂盒两者之间的符合率。结果该试剂盒具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。4℃条件下能保存8个月,与其他血清无交叉反应,与美国BIORELIANCE公司试剂盒检测结果的符合率为96%。结论研制成功的实验猴SIV ELISA检测试剂盒可用于临床检测。     

“水性彩色喷墨打印机墨水的研制”通过成果鉴定

20 0 3年 12月 2 2日 ,华南理工大学材料学院夏成林教授等和广州珠江化工集团有限公司红云化工涂料厂共同承担的广州市重点科技攻关项目“水性彩色喷墨打印机墨水的研制”通过由广州市科技局主持的成果鉴定。该墨水采用水溶性树脂作为连接剂 ,加入颜料或者染料、分散剂、溶剂和助流剂、光稳定剂、表面活性剂、防霉剂及其他助剂 ;采用高分子化合物使墨水与吸收墨水的介质材料生成离子键 ,增强固色性 ,打印效果清晰 ,不产生洇色 ;墨水流畅性好 ,耐水性优异 ,不会堵塞喷头 ,快速干燥 ,用DataColor分析仪配色 ,色泽还原性好 ,色彩艳丽。该项目…     

多种沙门氏菌分离培养基效果比较及在实验动物和垫料检测中的应用

摘要: 目的改进实验动物沙门氏菌分离培养方法,建立垫料中沙门氏菌检测方法。方法参考国内外沙门氏菌检测方法,用不同分离培养基对沙门氏菌、大肠杆菌和变形杆菌进行培养。选用最佳筛选效果培养基对动物肠道和垫料样品进行检测。结果BPW 预增菌、MKTTn 选择性增菌转种XLT4 培养基分离沙门氏菌的效果优于其他培养基,在1015 份动物样品中检测出3 份沙门氏菌阳性,能够检测出垫料中1CFU/g 的沙门氏菌。结论改进的沙门氏菌分离培养方法检出率高于现有国标方法,结果准确,可用于实验动物沙门氏菌及垫料的检测。     

一种利用微波炉加热快速提取细菌DNA用于PCR扩增的方法

利用微波加热原理,探索一种快速、简单、高效提取细菌DNA用于常规PCR快速检测的方法。在微波炉额定功率800 W条件下分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、副溶血弧菌、沙门氏菌以及志贺氏菌6种常见食源性病原菌进行微波处理,离心取上清,获取细菌DNA,将样本DNA进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳进行验证。并进一步采用微波加热方法针对6种病原菌最低检出浓度和混合提取6种病原菌DNA的PCR检测进行分析。6种病原菌在微波炉中加热40-130 s的上清DNA样本均能用于常规PCR扩增。针对检出浓度的分析表明,副溶血弧菌的最低检出浓度为103 cfu/ml,金黄色葡萄球菌为104 cfu/ml,肠出血性大肠杆菌为105 cfu/ml,肠炎沙门氏菌和福氏志贺氏菌的最低检出浓度为106 cfu/ml,针对单核细胞增生李斯特氏杆菌的的最低检出浓度为107 cfu/ml。进行6种混合菌微波共提取时,其中5种病原菌的特异性基因都能扩出,并且条带很亮。该微波提取方法具有快速,简单,高效的特点,能满足大部分食源性病原菌的常规PCR检测需求,大大节约了时间和成本,具有广泛的适用性,为细菌快速分子检测提供了简便手段。     

一种采用微波炉加热快速提取细菌DNA用于PCR扩增的方法

利用微波加热原理,探索一种快速、简单、高效提取细菌DNA用于常规PCR快速检测的方法.在微波炉额定功率800 W条件下分别对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、副溶血弧菌、沙门氏菌以及志贺氏菌6种常见食源性病原菌进行微波处理,离心取上清,获取细菌DNA,将样本DNA进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳进行验证.并进一步采用微波加热方法针对6种病原菌最低检出浓度和混合提取6种病原菌DNA的PCR检测进行分析.6种病原菌在微波炉中加热40-130 s的上清DNA样本均能用于常规PCR扩增.针对检出浓度的分析表明,副溶血弧菌的最低检出浓度为103cfu/ml,金黄色葡萄球菌为104cfu/ml,肠出血性大肠杆菌为105cfu/ml,肠炎沙门氏菌和福氏志贺氏菌的最低检出浓度为106cfu/ml,针对单核细胞增生李斯特氏杆菌的的最低检出浓度为107cfu/ml.进行6种混合菌微波共提取时,其中5种病原菌的特异性基因都能扩出,并且条带很亮.该微波提取方法具有快速,简单,高效的特点,能满足大部分食源性病原菌的常规PCR检测需求,大大节约了时间和成本,具有广泛的适用性,为细菌快速分子检测提供了简便手段.     

建立实时荧光PCR快速鉴定鸡制品中鸡伤寒沙门氏菌的方法

建立基于Taqman探针实时荧光PCR检测鸡伤寒沙门氏菌(Salmonella gallinarum)的方法.根据GenBank公布的鸡伤寒沙门氏菌基因序列,设计引物和Taqman探针,采用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验.结果表明:特异性引物和探针可从34株鸡伤寒沙门氏菌菌株、26株其他血清型沙门氏菌和7株非沙门氏菌菌株中检测出全部的34株鸡伤寒沙门氏菌.以鸡伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.999,扩增效率为88.2%,最低检测浓度为5cfu/mL.对已接种鸡伤寒沙门氏菌的模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致.该方法特异性好、灵敏度高,是快速鉴定鸡伤寒沙门氏菌的有效方法.