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高等真核细胞受极低频磁场作用后特异反应基因的克隆及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
极低频磁场(ELF MF)生物学效应的机理研究是当前生物电磁学中迫切需要解决的问题.为探索 ELF MF的特异反应基因及这些基因的结构与功能,用 mRNA差异显示技术(differentialdisplay, DD)对受ELF MF辐照与假辐照的Daudi细胞内的mRNA进行了检测,筛选到一个受ELF MF诱导表达的DD片段(>1kb),反向Northern及Northern鉴定进一步证实系磁场诱导所致.经克隆测序及与GeneBank同源性比较表明该基因片段(MF-CA)是人细胞中新发现的受磁场诱导的反应基因。 相似文献
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沙冬青抗冻蛋白的分离、纯化及其理化特性分析 总被引:18,自引:0,他引:18
用DEAE-纤维素DE-52,丙烯葡聚糖S300柱层析,热处理及等速电泳技术分离纯化了热稳定的冬季沙冬青叶片抗冻蛋白(AFP),获得了电泳纯的分子量约为50ku的AFP,经Shiff试剂检验为含糖的AFGP,显微镜观察冰点熔点差异技术和差示扫描量热法(DSC)测定了该蛋白热滞活性(THA),用DSC测定THA在5mg/mL时约为0.35℃.圆二色性(CD)分析表明,该AFGP中a-螺旋为11%,反 相似文献
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极低频磁场(ELFMF)生物学效应的机理研究是当前生物电磁学中迫切需要解决的问题,为探索ELFMF的特异反应基因及这些基因的结构与功能,用mRNA差异显示技术对受ELFMF辐照与假辐照的Daudi细胞内的mRNA进行了检测,筛选到一个受ELFMF诱牵DD片段,反向Northern及Northern鉴定进一步证实系磁场导所致,经克隆测序及与GeneBank同源性比较表明该基因片段(MF-CA)是人细 相似文献
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人肝癌细胞系BEL-7404 和正常肝细胞系L-02表达的蛋白质组双向凝胶电泳分析 总被引:4,自引:1,他引:3
蛋白质组分析已在生物科学各领域被广泛应用,也是功能基因研究的重要组成部分,通过对人BEL-7404肝癌细胞系和L-02正常肝细胞系表达的蛋白质组IPG-DALT双向凝胶电泳和图象分析,发现7个蛋白点只在检测到表达,14个点只在肝细胞中检测到表达,78个蛋白点在两种细胞中表达量上有显著变化,两种细胞蛋白质组表达反映在差异表达谱上,双向电泳重复性分析表明IEF方向平均位置偏差为0.73mm,SDS-P 相似文献
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人肝癌细胞系BEL-7404和正常肝细胞系L-02表达的蛋白质组双向凝胶电泳分析 总被引:6,自引:0,他引:6
蛋白质组分析技术已在生物科学各领域被广泛应用,也是功能基因组研究的重要组成部分.通过对人BEL-7404肝癌细胞系和L-02正常肝细胞系表达的蛋白质组IPG-DALT双向凝胶电泳和图象分析,发现7个蛋白点只在肝癌细胞中检测到表达,14个点只在肝细胞中检测到表达,78个蛋白点在两种细胞中表达量上有显著变化(P<0.01).两种细胞蛋白质组表达反映在差异表达谱上.双向电泳重复性分析表明 IEF方向平均位置偏差为0.73 mm, SDS-PAGE方向为0.44mm,量的变异为17.6%一19.2%.双向电泳的重复性已适合于蛋白质组差异表达的研究,蛋白质组差异表达谱可成为疾病诊断、药物作用分析和生命过程等研究的有用工具. 相似文献
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水稻抗光破坏能力与D1蛋白和叶黄素循环的关系 总被引:8,自引:0,他引:8
以耐光抑制粳亚种品种02428,029和对光抑制敏感的籼亚种品种3037,Palghar及其正反交F1杂种为材料,研究了水稻籼粳亚种抗光破坏能力的差异与D1蛋白和叶黄素循环的关系。用链霉素(SM)处理证明,当D1蛋白合成受到抑制时,PSⅡ光化学效率(Fv/Fm)的降低,而叶黄素循环受到促进、非光化学猝灭(qN)增加;用二硫功糖醇(DTT)的处理证明,当叶黄素循环受到抑制时,qN下降并导致D1蛋白更 相似文献
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将衣灌(Chlamydomonas reinhardtii)肌动蛋白(actin)基因(cDNA)与绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因融合后,分别构建到原核和植物表达载体中,并在BL21plus细菌和烟草悬浮细胞(BY-2)中进行表达。通过荧光显微镜观测到重组后的融合蛋白在菌体和烟草悬浮细胞中得到正确表达。肌动蛋白-绿色荧光蛋白 的融合蛋白主要分布在烟草悬浮细胞细胞膜周围,参与膜骨架的组成,另外还大量分布于细胞核周围和细胞板的位置,同时也在细胞内形成丝状结构,参与F-actin的组成。将肌动蛋白-绿色荧光蛋白融合基因的原核表达产物经过硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和疏水柱层析后,得以纯化,并在纯化产物中加入肌动蛋白聚合缓冲液,纯化的肌动蛋白能聚合成为丝状结构即F-actin,这表明低等藻类的肌动蛋白具有同高等植物和动物相似的性质和功能。 相似文献
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白芷细胞外ECBP21全长cDNA克隆 总被引:4,自引:0,他引:4
ECBP21是从白芷悬浮培养细胞外检测并纯化的一种依赖钙的钙调素结合蛋白。利用RT-PCR和5‘-RACE方法,获得其cDNA全长。ECBP21 cDNA全长947bp,编码216个氨基酸,其中N端1-25氨基酸为信号肽,26-216氨基酸为成熟蛋白肽段,而且26-45氨基酸序列与纯化ECBP21N末端测序结果完全一致。将此cDNA成熟蛋白编码区核苷酸片段导入pET-28b( )表达载体中,并在大肠杆菌表达系统中诱导表达,经CaM-Gel overlay检测证实表达蛋白具有Ca^2 依赖的钙调素结合特征,从而进一步证实了cDNA克隆的正确性。这为进一步用分子生物学方法研究植物细胞外多肽ECBP21的生物学功能奠定了基础。 相似文献
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以小鼠乳清酸蛋白基因(mWAP)调控区与人促红细胞生成素基因(hEPO)构建晤基因,经动物个体暂态表达方法确证hEPO可在乳特异表达后,用显微注射方法将融合基因导入小鼠受精卵,再将受精移植到假孕小鼠,获得86只G0代小鼠,经PCR-Southernblot及Southernblot证实,有58只整合阳性小鼠,整合率为67%,ELISAkit,dotELISA等方法检测小鼠39只,有16只表达阳性, 相似文献
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锌指蛋白是一类参与基因表达调控的重要调节蛋白,这些蛋白可与DNA/RNA相互作用,从而参与基因的表达调控.迄今已克隆的人类锌指蛋白基因近200个.根据保守结构域的差异,锌指蛋白可分为数种类型,其中C2H2型锌指蛋白占绝大多数,这种蛋白质的锌指基序由28个氨基酸组成,常为YECX2CX3FX5LX2HX3HTGEKP,其序列是非常保守的,特别是各个锌指之间的毗邻区(TGEKP)极其保守[1].近期研究表明,锌指蛋白基因结构的变异与肿瘤发生、胚胎发育和分化等密切相关,如人体锌指基因WT1和LAZ3的易位可分别导致Wilm’s瘤[2]和… 相似文献
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为了探讨CD2分子的信号传递功能,以编码CD2胞内区(Th4211-Gln336)肽段的cDNA为“钓饵”,采用酵母双杂交系统从激活的人T淋巴细胞cDNA文库中筛选与之相互作用蛋白cDNA序列,并采用免疫共沉淀法鉴定该蛋白在体内CD2胞内区结合的特异性,克隆并鉴定了一个与CD2胞内区特异性结合的胸内蛋白分子与v-fos转化效应蛋白(Fte-l)同源,Fte-1参与细胞转化、生长、蛋白合成及向线粒体 相似文献
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RGD序列普遍存在于细胞外基质蛋白中,并能为许多整合素蛋白所识别.利用 ELISA,SPR等技术,对表面固定的人工合成生物素-含 RGD环六肽[cyclo(-Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys-Gly-)]与人血小板整合素蛋白α_(Ⅱb)β_3的结合能力进行了检测结果表明,含RGD环六肽与生物素基团之间的间臂长度在 1.48~2.2 nm时, RGD序列才能有效进入α_(Ⅱb)β_3以头部的反应中心并发生结合反应;反应的平衡解离常数为 1.1μmol/L.为在固体表面研究整合素蛋白介导的细胞吸附过程提供了一个理想的模型系统. 相似文献