重组大肠杆菌DH5α生产rhTum-5-NGR培养条件的优化

目的提高重组大肠杆菌DH5α生产rhTum-5-NGR的能力。方法在摇瓶中研究了种子菌龄、接种量和诱导时机等因素对菌体生长及rhTum-5-NGR表达量的影响。结果最佳条件为接种量2%,初始pH为7.2,装液量30%,37℃培养至OD_(600)为2.3左右时加入0.5mmol/L IPTG,诱导表达4h。在此条件下,摇瓶中rhTum-5-NGR的表达量占菌体总蛋白的40.1%,光密度为5.94,生产能力为2.38,较优化前(0.82)提高了1.9倍。结论构建的工程菌发酵的稳定性和重复性良好,为肿瘤新药rhTum-5-NGR的工业化生产奠定基础。     

微生物多糖的生物合成及代谢工程研究进展

综述了微生物多糖的生物合成途径、基因簇结构与功能和代谢工程的研究进展。真菌多糖的合成途径主要包括:前体核苷酸糖(单糖的活化形式)的合成、合成的起始反应、重复单元的延伸、翻转和聚合、多糖的输出。多糖合成过程中涉及大量的基因,大多数基因存在多糖合成基因簇中,随着基因测序技术的发展,大量的多糖合成基因簇被发现和研究。研究表明:通过调控涉及糖核苷酸合成途径的酶水平可提高胞外多糖的产量,而增加多糖合成基因簇基因在微生物中的表达,可产生更高的多糖合成代谢流。     

关于5色K4问题的两个充要条件

设KN是具有n个顶点的完全图,f（n）是满足下列条件的最小正整数：对于任意的正整数m≥f（n）,存在Kn的一个m边着色,使得Kn中的任一个巧至少含5种颜色．Erdoes和Gyarfas给出了f（n）的上下界：2/3n〈f（n）〈n;并且证明了f（9）=8．唐明元证明了f（10）=9;并且改进了f（n）的下界：f（n）〉2/3n＋1．作者进一步改进了f（n）的下界：当n≥20时,f（n）〉1/8（6n-5）．给出了关于5色K4问题的两个充要条件．     

红曲霉液态发酵多糖工艺条件的优化

研究了红曲霉产多糖的液态发酵条件,得出优化后的培养基组成为:蔗糖45 g/L,酵母粉4.5 g/L,KH2PO4·3H2O 3.5 g/L,MgSO4·7H2O 0.85 g/L.通过单因素实验和正交试验,得到红曲霉N产多糖的优化发酵工艺条件为:种龄30 h,接种量7.5%,发酵培养基初始pH 5.75,装液量162.5mL/1 000 mL三角瓶,发酵时间84 h.在此条件下,红曲霉液态发酵的多糖质量浓度达999.8 mg/L,比优化前的684.2 mg/L提高46.1%。     

大肠杆菌K12碱性磷酸酶基因的克隆表达

大肠杆菌碱性磷酸酶是同二聚体金属酶，被phoA基因编码．采用PCR方法从大肠杆菌K12中扩增到碱性磷酸酶基因（phoA）．用限制性内切酶BamHI和HindⅢ将片段插入克隆载体pETBlue-2．该基因被重组、转化后在大肠杆菌中经IPTG诱导表达，而后进行SDS-PAGE检测及紫外吸收分析测OD410．克隆得到了phoA基因并实现了蛋白表达，碱性磷酸酶的活性提高了18，3倍，为进行组织化学、免疫印迹、突变分析等工作打下了坚实的基础．     

关于5色K4问题的两个新的结果

设Kn是具有n个顶点的完全图,f(n)是满足下列条件的最小正整数对于任意的正整数m≥(fn),存在Kn的一个m边着色,使得Kn中的任一个K4至少含5种颜色.Erd(o)s和Gyárfás给出了f(n)的上下界2/3n＜f(n)＜n;并且证明了f(9)=8.唐明元曾经证明了f(10)=9.作者曾经证明了f(11)=10,在此文中作者又进一步证明了f(12)=11,f(13)=12.     

蕴含K5-Z5可图序列的刻划

对于给定的图H,称π是蕴含H可图的,如果π有一个实现包含H作为子图.K k,C k,Pk分别表示k阶完全图,圈长为k的圈和路长为k的路.Z 5是由一个公共顶点的C3和P2组成的图,K 5-Z5表示从5阶完全图中删去Z 5的5条边.Luo Rong[13]考虑了蕴含C k可图序列的刻划问题,并刻划了当k=3,4,5时,蕴含C k的可图序列.此外,Luo等人[14]刻划了蕴含K 4的可图序列.Eschen和Niu[15]刻划了蕴含K 4-e的可图序列.Yin Jianhua等人[20]刻划了当r=2,s=3和r=2,s=4时,蕴含K r,s的可图序列,其中K r,s是r×s完全二部图.Hu Lili等人[3-5]刻划了蕴含K 5-C4,K 5-Z4,K 5-E3的可图序列,徐正华等人[16]刻划了K1,4 e的可图序列.本文刻划了当n≥5时,蕴含K 5-Z5的可图序列.     

响应面法优化大肠杆菌表达Hyperthermus butylicus耐热醛缩酶诱导条件的研究

为了提高重组耐热2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶的表达水平,该文基于中心组合实验的响应面分析方法,对基因工程E.coli的诱导条件进行了优化,具体考察因素包括诱导剂(异丙基-β-D-硫代半乳糖,IPTG)浓度和诱导时机.实验结果表明该方法可以提高目标蛋白的表达量,依据回归分析确定了最佳诱导条件为:IPTG浓度0.57 mM,诱导时机OD600为0.76,理论最佳DERA的比活力为1.124 u/mg,而实际平均比活力达到1.178 u/mg,两者几乎相等,说明该模型与实际情况基本相符.     

响应面法优化大肠杆菌表达Hyperthermus butylicus耐热醛缩酶诱导条件的研究

为了提高重组耐热2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶的表达水平,该文基于中心组合实验的响应面分析方法,对基因工程E.coli的诱导条件进行了优化,具体考察因素包括诱导剂(异丙基-β-D-硫代半乳糖,IPTG)浓度和诱导时机.实验结果表明该方法可以提高目标蛋白的表达量,依据回归分析确定了最佳诱导条件为:IPTG浓度0.57 mM...     

大蓟多糖提取条件优化

本文研究温度、时间、液固比3项因素对中药大蓟中提取多糖的影响,并利用正交实验对该提取工艺进行了优化,结果表明:提取温度95 ℃,提取时间2 h,液固比20:1为最佳提取工艺.     

Biosynthesis of hepatitis B virus surface antigen in Escherichia coli

Hepatitis B is a widespread viral disease. In the absence of cell cultures capable of propagating the virus (HBV) an efficient vaccine has been prepared from viral envelopes isolated from the plasma of chronic carriers. The major polypeptide of the envelope is one of molecular weight 25,000 which carries the surface antigen (HBsAg). Therefore, the biosynthesis of this polypeptide in Escherichia coli may offer an alternative procedure to produce HbsAg free from human proteins. Recently, the HBV genome has been cloned in E.coli. Determination of its primary structure allowed the localization of the gene (called gene S) coding for HBsAg and the synthesis of the core antigen in E.coli has been reported. We have constructed a derivative of bacteriophage lambda carrying a fusion between the beta-galactosidase gene (lacZ) and the HBsAg coding sequence (lambdalacHBs-1). Infection of E.coli with lambdalacHBs-1 leads to the biosynthesis of a polypeptide of molecular weitht 138,000 carrying antigenic determinants of HBV surface antigen.     

Antibodies from Escherichia coli

Use of Escherichia coli as an expression host has opened up new possibilities in antibody research and its applications. It greatly facilitates rational engineering and random mutagenesis.     

山茱萸多糖提取过程研究

通过单因素实验及正交实验对提取液中多糖含量的各种影响因素进行了研究，确定了山茱萸多糖最佳提取工艺条件：提取温度 80℃，提取时间 2h，料液比1∶16，原材料粒度 300～450μm，提取次数4次，脱蛋白次数 6次。在此条件下提取并用DEAE-cellulose柱层析分离得到白色多糖PFCAⅢ，经IR检测为含有α糖苷键的多糖。     

大肠杆菌核苷磷酸化酶的重组表达和活性

将大肠杆菌K-12菌株来源的嘌呤核苷磷酸化酶、尿苷磷酸化酶和胸苷磷酸化酶基因分别克隆到pET-11a载体并转化大肠杆菌BL21（DE3）宿主菌表达,通过SDS-PAGE分析和酶的活性测定,重组菌诱导表达后目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的37%以上,与产核苷磷酸化酶的野生菌比较,酶的活性也有显著提高。在特异反应条件下,构建的工程菌可以用来高效催化核苷的转糖基反应。