α-淀粉酶高产菌株D_(28)的选育及产酶条件的研究

从枯草杆菌Bacillus subtilis 209出发,选育出D_(28)变异株,在摇瓶条件下进行了产酶条件的研究.结果表明,该菌种发酵培养基的碳氮比为1.3:1,最适pH为6.5,通气量的变化极大地影响到产酶能力,在最适产酶条件下,酶活性平均达749.6u/ml.     

重组耐高温α-淀粉酶的分离纯化及其性质研究

基因工程菌所产生的重组耐高温α-淀粉酶,通过超滤浓缩、脱盐和聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯化,得到电泳纯的耐高温α-淀粉酶.并测得该酶的分子量为63 KD,等电点pI(室温)为5.5,最适pH为6.0~6.5,稳定pH范围为4~11.5.耐高温α-淀粉酶的最适作用温度为90℃,95℃以上活力下降明显,100℃保温30 min仍保留22%的酶活力;金属离子Cu2 、Fe2 、Fe3 、Zn2 及金属鏊合剂EDTA和柠檬酸盐离子对酶活有显著抑制作用,Mn2 、Mg2 有微弱的抑制作用,K 、Ca2 和表面活性剂SDS有微弱的激活作用,而其他一些离子如Na 、Li 则对酶活影响不大.     

苎麻/棉牛仔布淀粉酶退浆工艺的研究

通过正交实验研究苎麻/棉牛仔布酶退浆工艺.探讨了淀粉酶的浓度、处理温度、pH值、处理时间等因素对退浆效果的影响.得出苎麻/棉牛仔布淀粉酶退浆的优化工艺,即淀粉酶浓度4g/L,温度60℃,时间75min,pH值7,JFC 1g/L.     

枯草杆菌BF7658高产菌株HIB22的选育

我们以枯草杆菌(Bacillus subtilis)BF—7658为出发菌株,通过自然分离,从1200株菌株中获得一株高产菌株HIB22,摇瓶酶活为440u/ml,经6次传代后仍保持原有性状。用7500立升和10000立升发酵罐进行21批扩大试验,平均酶活355u/ml,其中8批稳产试验平均酶活397u/ml。单罐最高酶活520u/ml。     

莲子浆的酶解条件探索研究

通过α-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、胰蛋白酶处理莲子浆,探索出了酶解莲子浆的最佳工艺条件.实验表明,在pH值为6.5,温度95℃下α-淀粉酶水解的最佳条件为酶与底物之比为24U/g莲子、底物浓度5%、水解时间为30min;在pH值为4.0,温度60℃下葡萄糖淀粉酶糖化的最佳条件为酶与底物之比为10000U/g莲子,底物浓度为11%,时间为11hr;在pH值为7.5,温度40℃下胰蛋白酶水解的最佳条件为酶与底物之比为16 000U/g莲子、底物浓度5%、水解时间为5hr.水解率可达56.25%,可得澄清透明的莲子原液.     

地衣芽孢杆菌A.4041耐高温α-淀粉酶的纯化及性质

地衣芽孢杆菌A.4041（Bacillus，licheniformisA．4041）耐高温α-淀粉酶，经硫铁沉淀和垂直板制备凝胶电泳纯化，得到三种电泳均一的组分，α－Ⅰ，α－Ⅱ和α－Ⅲ．其相对质量分数分别为14.7％，32.2％和52.9％；等电点为5．2，5．4和5．5；相对分子质量为48000，55000和60000．酶作用于可溶性淀粉的米氏常数分别为4.5mg／mL，3．4mg／mL和2．6mg／mL．最适作用温度皆为90℃；最适pH为6.0～6.5；稳定pH范围皆为4～11．5在温度高于70℃，保温30min条件下，三组分的活力开始下降，但α－Ⅱ和α－Ⅲ在100℃，保温30min时仍分别保持15％和20％的残余活力，表明该酶的热稳定性良好．Ca2+，Mg2+，K+对酶明显激活；Cu2+，Fe3+，Zn2+，Al3+，EDTA、甲醛、戊二醛对酶强烈抑制．     

高产新型淀粉酶菌株MS5.1的选育\=及最适产酶条件

从原筛选的产酶菌株芽 孢杆菌 (Bacillus Stearophilus) BS3.232出发, 经亚硝基胍多次诱变、 初筛和复筛后 , 获得了产酶水平明显提高的变异菌株MS5.1, 其产酶水平为原株的 153.8%. 薄层分析证 明, 该酶能催化淀粉的水解和转苷, 产物为异麦芽低聚糖, 包括异麦芽糖、 潘糖、 异 麦芽三糖和异麦芽四糖. 表明MS5.1产生的新型淀粉酶能有效地转化淀粉产生异麦芽低聚糖. 用正交法确定了MS5.1菌株的最适产酶条件： 通气量在60%以上, 55 ℃培养24 h. 实验结果表明, 培养温度是影响产酶水平的最主要因素.     

一株产淀粉酶的克雷伯氏菌株的分离鉴定及其产酶条件优化

从酒酿、酒曲样品中,采用透明圈法对淀粉酶产生菌株进行初筛,并通过测定酶活对其进行复筛.对所筛选出的产淀粉酶能力较高的菌株进行形态特征观察、生理生化鉴定及16S rDNA序列测定.经鉴定是克雷伯氏菌属,将其命名为Klebsiella sp.ZSY-I.通过正交实验对该菌株产酶的影响因素进行优化,结果表明：对菌株产酶影响较大的因素依次为KNO3、温度、淀粉和pH.该菌株在淀粉含量为2.5%,KNO3含量为1.25%的培养基上,30℃和初始pH为7.5,培养24 h后,酶活力达到最高为14.66 U/mL.     

一株α-淀粉酶产生菌株的分离鉴定及其产酶条件优化

从湖南省长沙县养殖场牛胃秸秆发酵物中筛选获得了一株高产α-淀粉酶的菌株,命名为SCUEC8.通过对其形态学观察和生理生化特性,结合16S rDNA序列对比分析,初步鉴定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).探讨了不同碳源、氮源、培养条件等因素对枯草芽孢杆菌SCUEC8菌株产酶的影响,结果表明：在培养时间为16 h、pH为6.0、培养温度为37℃、碳源为20.0 g·L^-1的麦芽糖、氮源为15.0 g·L^-1的胰蛋白胨、金属离子为1.0 g·L^-1的Mn²⁺时,枯草芽孢杆菌SCUEC8菌株生长量和α-淀粉酶的活性较高.     

多菌灵降解菌的分离、鉴定及其降解特性研究

从长期施用多菌灵的葡萄园土壤中分离纯化得到一株对多菌灵降解较好的菌株djl-11,经生理生化鉴定和16S rDNA序列比对分析,鉴定该菌株为红平红球菌（Rhodococcus erythropolis）。试验研究表明,添加少量氮源可促进菌株djl-11对多菌灵的降解作用。该菌能够以多菌灵为唯一碳源,在多菌灵浓度达到1000 μg/mL的无机盐培养基中,28℃摇床培养48 h降解率达到了99.15%。在pH值4~9之间均能降解多菌灵,最适温度在20~30℃。     

一株煤矿地下水硫酸盐还原细菌的分离、鉴定及性质研究

从煤矿井下700 m深处含水层的钻孔涌水中分离获得一株硫酸盐还原细菌GY-2,该菌株革兰氏反应阴性,有芽孢,菌体棒状,能运动,氧化酶阴性;通过16S rRNA系统发育学分析,确定菌株GY-2为滴状脱硫肠状菌(Desul fotomaculum guttoideum).GY-2菌株为兼性厌氧菌,在含有Fe2+的条件下生长...     

1株脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其脂肪酶基因的克隆表达

从武汉市郊蓖麻地土壤中分离到1株产脂肪酶菌株,结合形态观察和生理生化鉴定,扩增16S rDNA并测序,运用Blast比对构建了进化树,发现该菌与粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的同源性高达99％,初步鉴定该菌属于沙雷氏菌属(Serratia),命名为Serratia sp.HS-L5.克隆了脂肪酶...     

一株耐盐苯酚降解菌的分离、鉴定及特性研究

从污水处理厂活性污泥中筛选到一株高效的耐盐苯酚降解菌,经形态观察及26SrRNA序列分析鉴定为假丝酵母菌Candida sp.,命名为W3.该菌株可以在1%～10%NaCl环境中生长,并可以利用苯酚为唯一碳源和能源.苯酚降解的最优条件为pH=7.0,温度30℃,NaCl质量分数5%.在NaCl质量分数为5%.苯酚浓度为...     

苯酚降解菌株GXY-1分离鉴定、降解及其粗酶特性研究

从处理石化废水的活性污泥样品中分离得到一株能以苯酚为唯一碳源生长的菌株GXY-1.通过形态特征、生理生化及16S rDNA序列分析,初步鉴定菌株GXY-1属于布鲁氏杆菌属(Brucella sp.).实验结果表明,菌株GXY-1对土霉素和四环素不敏感,其降解苯酚的最佳条件为温度30℃,pH7.0.在最佳条件下,GXY-1对600mg/L苯酚的降解率在60h时达99%以上.同时GXY-1还可以利用苯胺、萘、氯苯等芳香化合物为唯一碳源生长.测定了降解途径中相关酶的活性,表明菌株GXY-1是通过邻苯二酚1,2双加氧酶催化开环来降解苯酚.该菌株粗酶的最适反应pH为7.8,最适反应温度为40℃.     

一株堆肥高效解磷菌的筛选、鉴定及其溶磷特性

磷是植物必需的营养元素之一,但大多数耕地土壤中磷素易与Ca²⁺、Fe³⁺、Fe²⁺、Al³⁺等结合成无效态磷,植物难以直接吸收利用。解磷微生物可活化难溶性磷,将其接种于堆肥,有助于提高堆肥产品磷素植物可利用程度。从鸡粪好氧堆肥中筛选获得高效解磷细菌,为生物强化富磷堆肥的制备提供菌种。利用NBRIY培养基初筛获得解磷菌,利用蒙金娜(PVK)培养基复筛获得高效解磷菌株,对其进行16S rDNA分子生物学鉴定,并研究不同碳源、氮源、初始pH、难溶性磷种类、难溶性磷添加量、可溶性磷浓度对菌株溶磷能力的影响。初筛获得7株解磷细菌,分别命名为PSB1～PSB7;复筛后,PSB6的溶磷量最大(126.37 mg/L);其余菌株的溶磷量在50.12～109.56 mg/L。PSB6经16S rDNA初步鉴定为Bacillus sp.(MW513386)。PSB6最适碳源为葡萄糖,最适N源为硫酸铵,最适生长初始pH为7.0,不同难溶性磷中,PSB6对磷酸三钙溶解效果最好,溶磷量为126.37 mg/L。当磷酸三钙添加...     

胺菊酯降解菌的筛选鉴定及其降解特性

从杭州农药厂的活性污泥中获得一系列菌株,经分离纯化后,得到一株能够降解胺菊酯的菌株,命名为Tet-1.将菌株Tet-1测得的16SrDNA序列在GenBank和RDP数据库中进行BLAST比对分析,将其鉴定为Ancylobacter属(Ancylobactersp.).根据Tet-1生长特性和胺菊酯降解实验结果表明:Tet-1能以胺菊酯为唯一碳源生长,培养7d后,Tet-1菌株对50mg/L的胺菊酯的降解率为54.0±0.9％.降解胺菊酯在30℃左右时降解效果较好,最适pH为7.0左右.     

Cu^2＋和Zn^2＋抗性真菌的分离、鉴定及其富集特性

从湖南省岳阳市临湘铜锌尾砂坝士壤内分离、纯化得到1株抗铜和锌的菌株CTB430-1,分析该菌株形态和测定菌株ITS基因序列鉴定菌种,研究不同pH值、金属离子初始浓度和金属离子共存对菌体生长量和富集重金属的影响;分别采用考马斯亮兰法和碘量法测定菌体内可溶性蛋白和还原性谷胱甘肽含量.研究结果表明:鉴定该菌株为Aspergillus flavus,其对Cu2+和Zn2+的最低抑菌质量浓度分别为400和800 mg/L,菌株的生长和富集受溶液pH值、金属离子初始质量浓度和金属离子共存的影响,Cu2+和Zn2+的富集量分别在其质量浓度为200和250 mg/L时达到最大,为30.82和40.37 mg/g;菌体内可溶性蛋白和还原性谷胱甘肽含量发生变化,表明菌株对Zn2+具有较强的适应能力和抗性,还原性谷胱甘肽能缓解Cu2+和Zn2+对CTB430-1的氧化损伤.     

Acidiphilium属菌DX-A的分离鉴定及其浸矿功能

从江西德兴铜矿酸性矿坑水中分离得到1株嗜酸细菌(命名为DX-A),该菌株为革兰氏阴性菌,短杆状,菌体宽×长为(0.45~0.55)μm×(1.1~2.1)μm,最适生长pH为3.5,最适生长温度为30℃。该菌能利用FeCl3及多种硫化矿和葡萄糖等多种有机物进行生长,但是不能利用FeSO4进行生长,因而该菌为兼性异养型细菌。构建该菌的系统发育树,研究表明:菌株DX-A与Acidiphilium sp.PK46(AY765995)位于系统发育树的同一分支中,相似度为99%;菌株DX-A分别浸出黄铁矿和铁闪锌矿28 d后,含菌摇瓶中Fe2+与Zn2+的质量浓度分别可达到2.36g/L和2.47 g/L,而对照组中Fe2+与Zn2+的质量浓度分别为0.60 g/L和0.39 g/L;菌株DX-A和A.ferrooxidansATCC23270混菌分别浸出黄铁矿和铁闪锌矿比A.ferrooxidans ATCC23270单菌浸出效果分别高2.7%和10.3%,表明该菌能够浸出黄铁矿和铁闪锌矿并能促进自养菌的浸矿,为进一步研究异养菌促进自养菌浸矿提供了依据。     

产聚羟基烷酸的菌株分离及初步鉴定

为给今后构建产PHA的重组大肠杆菌提供PHA合成基因,从中国石化集团公司武汉石油化工厂的气浮池附近长期被石油污染的土壤中,经细菌的富集及分离纯化,筛选出两个产PHA的菌株。通过菌株的个体形态观察,发现这两株菌是可以在细胞中间产生不膨胀的椭圆形芽孢的革兰氏阳性杆菌,且相互成链,这与伯杰氏手册中对蜡状芽孢杆菌的描述相似,另外对这两株菌的培养特征、生理生化特征的研究,也表明这两株菌符合蜡状芽孢杆菌的特性,故初步鉴定这两株菌为蜡状芽孢杆菌。