抗人Cx31第234位磷酸丝氨酸抗体的制备

利用磷酸化多肽合成技术合成Cx31羧基端磷酸多肽片段（CSPSSSApSRAST），经HPLC纯化、质谱证实后偶联到匙孔槭血蓝蛋白，免疫新西兰雄兔后采血检测、并经过特异性纯化、经Western blotting检测，证实得到的抗体为抗间隙连接蛋白31第234位丝氨酸的特异抗体．     

小鼠Connexin31蛋白磷酸化定位

间隙连接蛋白31(Connexin31,Cx31)是间隙连接蛋(Connexin)家族的一员,目前对于Cx31的功能及其调节方式知之甚少.本文通过免疫沉淀、SDS-PAGE分离、蛋白质条带回收、蛋白质胶块酶解、4-磺酸苯异硫氰酸酯修饰、PSD-MALDI-TOF质谱分析、数据分析、确定小鼠Cx31磷酸化位点.     

BrdU及其单克隆抗体的应用

5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入DNA后,可用荧光染料或被荧光染料标记的抗BrdU单克隆抗体进行定量和定性测定。抗BrdU单克隆抗体的应用为细胞动力学、肿瘤学和遗传学上区别DNA合成细胞,测定DNA合成速度、顺序和部位提供了一个快速、敏感和精确的方法。     

抗人乳腺癌糖蛋白单克隆抗体的研究

以人乳腺癌组织提取的糖蛋白免疫后的BALB/C小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0细胞融合,经筛选及克隆化培养,建立了1株稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株GP-1D_8。 McAb GP-1D_8与乳腺癌组织产生强阳性反应;与正常乳腺及一些其它肿瘤组织为阴性反应;与甲状腺癌及正常结肠组织出现弱交叉反应。 经Sepharcyl-S200 HR分子筛分离的抗原分子,分子量为66kd,与Western blot测出的分子量相符。抗原分子含糖量为16％。其抗原决定簇为一段耐70℃温度的多肽。与前人报导的乳癌相关抗原有区别,可能是一种新的乳腺癌相关抗原。     

抗人尿激酶单克隆抗体的制备

采用常规免疫和脾内免疫相结合的方法，利用杂交瘤技术得到两个能分泌抗人尿激酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株１０Ｈ１０，１０Ｄ１２。它们分泌的单克隆抗体主要识别Ｍｒ．５４，０００的高分子量尿激酶和Ｍｒ．１８，０００的尿激酶Ａ链。两种单克隆抗体与胰蛋白酶，胰蛋白酶原，胰凝乳蛋白酶和胰凝乳蛋白酶原等丝氨酸蛋白酶和酶原无交叉反应。     

抗人生长激素单克隆抗体的制备及鉴定

本文运用B淋巴细胞杂交瘤技术得到了4株稳定分泌抗hGH羊克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其特性进行了鉴定。其腹水滴度高达0.6～10×10~5,亲和常数在0.53～9×10~9 M~(-1)之间。4种单克隆抗体的相应抗原决定簇分属于 hGH 分子表面3个不同区域;除1种单克隆抗体与 hPL 有交叉反应外,其余与hPL和hPRL皆无交叉反应。另外,本文采用的微量免疫法也有一定的实用价值。     

抗人癌胚抗原单克隆抗体的研制及其在免疫组化中的应用

以高纯CEA为抗原,免疫BALB／c小鼠．取其脾细胞和小鼠SP2／0-Ag14骨髓瘤细胞融合．经2次亚克隆。建立3株稳定分泌抗CEA特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。应用经纯化的该单克隆抗体进行了结肠癌组织切片的免疫组织化学实验．结果显示全部3种抗CEA单克隆抗体对结肠癌亚细胞组分均呈现特异性结合。表明已筛选出适于制作癌胚抗原临床诊断试剂盒所需的特异性单克隆抗体。     

抗人骨桥蛋白单克隆抗体制备及其特异性研究

利用RT-PCR技术克隆人骨桥蛋白(hOPN)基因,构建OPN原核表达质粒pET-32a(+)-hOPN,转化BL21菌株,经IPTG诱导表达重组人骨桥蛋白(rhOPN).以纯化的rhOPN为免疫原,免疫BABL/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合.通过有限稀释法进行克隆和间接ELISA筛选,获得抗人OPN蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,以ELISA、Western blot对抗体特异性进行鉴定.通过竞争抑制试验对单克隆抗体识别抗原位点进行分析.结果共获得2株抗人OPN单克隆抗体,分别命名为8F1和2B5,亚型测定皆为IgG1.通过细胞侵袭抑制试验检测,2株抗人OPN mAb皆能很好地抑制细胞迁移.本研究成功获得了抗人骨桥蛋白的特异性单克隆抗体,为进一步研究OPN蛋白在自身免疫病和肿瘤中的功能提供了重要的工具.     

抗人脂肪酸结合蛋白的单克隆抗体的制备

Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓ (ＦＡＢＰｓ)ａｒｅｎｏｎ ｅｎｚｙｍａｔｉｃｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｌｏｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ ( 1 4～ 1 5ｋＤ)ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｆｏｕｎｄｉｎａｗｉｄｅｖａｒｉｅｔｙｏｆｍａｍｍａｌｉａｎｔｉｓｓｕｅｓ[1] .Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ,ｔｈｅＦＡＢＰｆａｍｉｌｙｉｓｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆａｔｌｅａｓｔｎｉｎｅｄｉｓｔｉｎｃｔｔｙｐｅｓｏｆＦＡＢＰ ,ｅａｃｈｔｙｐｅｓｈｏｗｉｎｇａｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｐａｔｔｅｒｎｏｆｔｉ…     

抗人FXYD3单克隆抗体的制备与初步鉴定

【摘要】目的 制备抗人FXYD3单克隆抗体（McAb）并鉴定其生物学特性。方法 以固相合成法获得的FXYD3合成多肽与载体蛋白KLH偶联后免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗人FXYD3 McAb。用ELISA 、Western Blot、免疫组化技术对抗人FXYD3 McAb的亚型、效价、亲和力及特异性进行鉴定。结果 筛选出两段较好的优势抗原表位,分别为NDLEDKNSPFY和KFGQKSGHHPGETPPLITPGSA获得四株可稳定分泌抗人FXYD3 McAb的杂交瘤细胞株02A12C4、02F1E8、02E6B10与03A10E11,亚型鉴定重链均为IgG1,轻链为kappa链。间接ELISA法测定效价均在为1∶104以上。其中02F1E8效价为1∶105以上,亲和常数为3.11?08 L / mol。免疫组化分析显示了FXYD3均匀分布于肝癌细胞与人胰腺癌Bxpc-3细胞系细胞的胞膜上。结论 成功制备了四株抗人FXYD3 McAb,其中02F1E8纯度好、效价高及特异性强。为进一步研究FXYD3在肿瘤组织及细胞系中的表达及临床意义奠定了基础。     

抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备研究

从影响融合率的2个主要因素探讨骨髓瘤细胞系Sp2/0细胞与黄曲霉毒素B_1免疫的脾细胞融合的最佳条件,使融合率达到100%.经筛选和克隆化,获得3株稳定分泌单克隆抗体的细胞株,分别命名为3B3、3H9、5G9.经过鉴定3株均为IgG_1亚类.其中3B3抗体与其他黄曲霉毒素几乎不发生交叉反应,腹水效价为1∶2×10~5,亲和力常数为3.1×10~7 L/mol,竞争性ELISA测出3B3抗体的最低反应浓度为0.05μg/L标准AFB_1样品的的回收率达96%.另外两株腹水抗体水平低,交叉反应强烈,腹水效价仅在1∶10~4数量级.     

人GrnE单克隆抗体的制备和鉴定

为了制备获得针对人Grn E单克隆抗体,将原核表达GST-Grn E蛋白作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,经过融合及初步筛选,获得5株针对Grn E的单克隆细胞株.选取其中3株(1D5、2E1和3F7)制备腹水,并通过western blot和免疫荧光染色对该3株单克隆抗体进行鉴定.在此基础上,进一步对1D5和3F7两株单克隆抗体是否可以用于免疫沉淀实验进行了检测.上述实验表明,本研究成功制备了针对Grn E结构域的单克隆抗体,而且所制备的单克隆抗体具有良好的特异性.     

磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶单克隆抗体的制备和鉴定

 为建立磺胺类药物残留的免疫化学分析方法,利用磺胺甲基嘧啶(SM)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)分子结构中的芳香氨基,采用重氮反应和戊二醛法将其与载体蛋白(牛血清白蛋白和鸡卵清蛋白)交联制备抗原,最终获得5株抗SM和18株抗SM2杂交瘤细胞株.对杂交瘤细胞株的核型、抗体的亚类和轻链型、抗体的异相包被ELISA反应性以及抗体的竞争反应性和交叉反应性进行了分析和评价.其中SM抗体11C8结合SM的竞争抑制质量浓度IC50为14.1μg/L,与类似物SD的交叉反应性接近20%,但与其他类似物低于10%.SM2抗体中的6株抗体的竞争抑制质量浓度IC50在38.8~70.0μg/L范围内,2B7,4D5,13C9,14C5和16C2抗体与类似物SM的交叉反应性达到73.5%~132.9%,而15D10抗体与SM的交叉反应性低于5%.因此,本研究所获得的磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶抗体,可用于SM和SM2残留的免疫分析方法研究和应用.     

粘附蛋白单抗对烧伤休克大鼠微循环的影响

探讨运用白细胞粘附分子ＬＦＡ－１单抗和血管内皮细胞粘附分子ＩＣＡＭ－１单抗防治烧伤休克、改善微循环的作用机理。方法：复帛蛎鼠烧伤休克模型,用红细胞跟踪相关仪和电视测微仪测量静脉血液流速、口径、流量;镜下观察细胞脉白细胞粘附数,并记录动物存活时间。     

硝基苯胺单克隆抗体的制备和效果评价

为了测定水中硝基苯胺类化合物,进而开发酶联免疫分析法(EL ISA)快速检测方法,制备了抗硝基苯胺单克隆抗体。以合成的硝基苯胺完全抗原,作为免疫原免疫B a lb/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、筛选和克隆等,得到了抗硝基苯胺单克隆抗体。该抗体亚类为IgG1,制备的单克隆抗体腹水效果评价达10-7,与其他硝基苯胺结构类似物无交叉反应。实验结果表明,用本间接竞争EL ISA方法可以精确地检测不同水样中硝基苯胺残留。     

烟草花叶病毒单克隆抗体的制备和鉴定

经工程菌表达与纯化,得到了纯度95%以上的TMV-CP-F重组蛋白,配合提取的TMV天然病毒颗粒作为免疫原.通过杂交瘤技术获得了14株能分泌特异针对TMV外壳蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株.经鉴定14株细胞所分泌的抗体亚类为IgG1型,抗体轻链均为κ型.经ProteinA一步法亲和层析纯化所得抗体经鉴定相对分子质量在149.36～157.23 ku之间,抗体纯度在80%以上.经间接ELISA测定,14株抗体均与TMV-CP重组蛋白和TMV病毒有良好特异性反应.所制备的抗TMV抗体的特异性高,可用于与其相关的免疫检测研究和应用.     

抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定

 以重氮反应将盐酸克伦特罗与牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白偶联制备免疫原和检测原,通过杂交瘤技术获得了3株能分泌特异结合CL小分子的抗体杂交瘤细胞株.经竞争法ELISA分析,9E3抗体的IC50质量浓度为19.85μg/L,14C5抗体为1.65μg/L,16F4抗体为0.84μg/L.在与类似物的交叉性反应中,16F4抗体与沙丁胺醇的交叉反应性为0.26%,特布他林为0.04%,与非诺特罗、肾上腺素、去甲肾上腺素的交叉反应性都小于0.02%.因此,所制备的抗盐酸克伦特罗的抗体的特异性高,可用于与其相关的免疫检测研究和应用.     

黏着斑蛋白Supervillin的抗体制备及纯化

黏着斑蛋白Supervillin（SVIL）是一个细胞膜结合蛋白分子,定位于细胞与细胞外基质接触面的黏着斑。为了进一步研究 SVIL蛋白分子在细胞内的功能,应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒 ｐＧＥＸＫＧ ＳＶＩＬＣ３０２和ｐＨＩＳ８ ＳＶＩＬＣ３０２,并在细菌 ＢＬ ２１（ＤＥ３）中用 ＩＰＴＧ分别诱导表达 ＧＳＴ ＳＶＩＬＣ３０２和 ＨＩＳ ＳＶＩＬＣ３０２融合蛋白。用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化 ＧＳＴ ＳＶＩＬＣ３０２蛋白,然后免疫新西兰大白兔制备 ＳＶＩＬ多克隆抗体,并用 Ｎｉ ＮＴＡ柱子结合 ＨＩＳ ＳＶＩＬＣ３０２蛋白,对其进行交联,纯化抗体。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ（ＷＢ）和 Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＩＦ）实验证明该抗体可以识别外源的 ＧＦＰ ＳＶＩＬ和内源的 ＳＶＩＬ蛋白,并且可以用于蛋白免疫沉淀实验。表明此ＳＶＩＬ多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度,为进一步研究黏着斑蛋白 ＳＶＩＬ在细胞内的功能奠定了坚实的基础。     

褪黑素单克隆抗体的制备及鉴定

为了获得抗褪黑素(MT)高效价的单克隆抗体,用甲醛将MT连结到BSA上,然后用连结物背部皮下多点免疫Balb／c小鼠,用PEG诱导免疫鼠脾细胞与Sp2／0细胞融合,经ELISA法筛选阳性克隆株及测定效价,用抗体与同类物之间的交叉反应进行特异性鉴定．最后获得5株(4C9D7、3E12C7H11E7、3E12A9D7、6A6A3A2C3、1E1E2H2H6)能稳定分泌高效价抗MT的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞。     

Preparation of an anti-diethylstilbestrol monoclonal antibody and development of an indirect competitive ELISA to detect diethylstilbestrol in biological samples

Based on the preparation of an anti-diethylstilbestrol(DES) monoclonal antibody,a simple and convenient indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay(E...