小鼠肿瘤致死因子a诱导的TNFAIP1蛋白与DNA聚合酶6亚单位的相互作用

人类B12蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子a的诱导的蛋白，在小鼠中又称为TNFMP1，其功能尚未见报导．采用蛋白质pull-down、荧光定位和免疫共沉淀分析一系列实验证明小鼠TNFMP1蛋白与DNA聚合酶8的亚单位PSO发生直接相互作用．由此推测TNFAIP1蛋白参与DNA复制过程，并为研究人TNFAIP1基因的功能提供参考．     

TNFAIP1与RIN3相互作用的鉴定

TNFAIPI是第一个被鉴定能受TNF-α(tumor necrosis factor-α)诱导的蛋白.TNFAIP1基因是一个多功能基因,参与DNA的复制和修复,细胞周期的调控,细胞信号通路转导的调节等.采用酵母双杂交的方法以TN-FAIP1为靶蛋白筛选得到与其相互作用蛋白RIN3.RIN3含有RIN家族多个多功能的结构域,根据RIN3结构域对其分段,研究与TNFAIPI的相互作用.通过免疫共沉淀,荧光共定位一系列细胞证明TNFAIP1蛋白能直接与RIN3相互作用,提示TNFMP1可能参与细胞的胞吞胞吐.     

TNFAIP1基因通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡

将TNFAIP1基因成功克隆到真核表达载体pCMV—Myc中,研究TNFAIP1基因诱导细胞凋亡的机制．Hochest33258和流式细胞计数实验发现,过表达TNFAIP1能够诱导HeLa细胞凋亡．通过对凋亡相关基因的研究,发现过表达TNFAIP1能够抑制Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达,推测TNFAIP1基因可能通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡．     

TNFAIP1对肝癌细胞HepG2细胞增殖及凋亡的影响

为了深入探讨肝癌的发生机制并寻找肝癌的潜在治疗手段,研究了TNFAIP1基因对肝癌细胞HepG2的细胞增殖及细胞凋亡产生的影响.MTT实验发现过表达TNFAIP1基因或干扰TNFAIP1的表达可以显著地抑制或促进HepG2细胞的生长,这表明TNFAIP1基因对肝癌细胞的增殖具有抑制作用.而流式细胞技术则证实过表达TNFAIP1能显著地促进肝癌细胞HepG2的细胞凋亡.     

建立可诱导表达TNFAIP1的稳定细胞系

利用Tet-Off可诱导表达系统在HT1080细胞中建立可诱导表达TNFAIP1基因的稳定细胞系.首先将融合表达GFP的TNFAIP1片段克隆到反应质粒pTRE2hyg中,然后将该质粒转染到HT1080/Tet-off细胞中,使用潮霉素B筛选,挑取单克隆,得到稳定转染的细胞系,扩大培养后在荧光显微镜下观察克隆的诱导效率,得到了低背景,高效诱导表达GFP-TNFAIP1的稳定细胞系,便于研究TNFAIP1在细胞生长、细胞周期和细胞信号通路等方面的作用.     

TNFAIPl基因通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡

将TNFAIPl基凼成功克隆到真核表达载体pCMV-Myc中,研究TNFAIPl基因诱导细胞凋亡的机制.Hoehest33258和流式细胞计数实验发现,过表达TNFAIPl能够诱导HeLa细胞凋亡.通过对凋亡相关基因的研究,发现过表达TNFAIPI能够抑制Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达,推测TNFAIP1基因可能通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡.     

小鼠Shh蛋白N端基因的克隆与原核表达

从小鼠(C57BL/6)10.5d胚胎中提取总RNA经RT-PCR扩增出编码小鼠Shh基因N端cDNA序列,克隆到大肠杆菌表达载体pQEN3构建重组表达质粒pQEN3-Shh-N.重组质粒转化大肠杆菌BL21,经1.0mmol/L IPTG诱导,在SDS-PAGE上检测到20kDa目的蛋白带,与Shh N端蛋白预期大小一致,其蛋白表达量达到了全菌总蛋白的约30%.重组蛋白经Western blot鉴定结果显示,在20kDa处出现单一的显色条带,说明表达的重组蛋白为Shh N端蛋白,为研究Shh蛋白N端与毛发生长的功能奠定了基础.     

B12基因在小鼠部分肝切除后的表达差异分析

B12是一种受TNF-α诱导的蛋白．利用肝脏部分切除小鼠模型以及核酸酶保护反应研究了B12基因在肝脏部分切除后不同时间的表达差异，发现在受损后28h，B12的表达开始增强，到36h表达一直呈上升趋势，推测该基因可能与肝脏修复过程中DNA的复制有关，为B12基因的进一步的功能研究提供了理论基础．     

Lrrc10蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

Lrrc10是一个心脏特异表达基因.为了深入研究Lrrc10在心脏发育中的功能,需要获得Lrrc10蛋白并制备其抗体.以小鼠心脏cDNA文库为模板进行PCR扩增得到Lrrc10部分编码区序列,然后将其连接到pGEX-4T-1载体上获得原核表达载体.重组子经酶切及测序鉴定后,转化大肠杆菌(E.coli) BL21,并用I...     

血水草根蛋白质组学研究

为用蛋白质组学方法初步分析血水草根蛋白质的表达,提取血水草根的蛋白质,经双向凝胶电泳分离、考马斯亮蓝染色后,切取分离较好的蛋白质点,经基质辅助激光解吸/电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOFTOF)分析和数据库(IPI)检索,对蛋白质进行鉴定.成功鉴定了28个蛋白质点,其中具有明确功能的蛋白质17种,分别属于DNA复制酶、翻译调控蛋白、代谢酶、细胞结构蛋白;另外11种为未知功能蛋白.     

鳜鱼肌球蛋白重链基因的原核表达及多克隆抗体的制备

肌球蛋白重链(MyHC)是肌肉中的主要结构和功能蛋白,在肌肉收缩过程中起关键作用.根据鳜鱼肌球蛋白重链基因中高亲水性区域DNA设计一对特异性引物,将该基因片段亚克隆到pET-32a质粒,构建重组表达载体并转化入大肠杆菌BL21中.诱导条件优化实验结果显示,该菌株经0.8 mmol/L IPTG诱导3 h可大量表达融合蛋白.将经亲和层析纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.ELISA和免疫组化测试结果表明:此抗体有较好的特异性和抗原性.鳜鱼MyHC基因表达的研究为深入研究肌球蛋白重链的功能特性及其对肉质性状的影响奠定基础,为提高鱼类肉质提供理论基础和技术支持.     

竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶的表达载体的构建及重组蛋白抗肿瘤的研究

将经BamHⅠ和HindⅢ酶切的pMD18-T-LAAO和Pet28a(+)质粒的纯化回收产物进行连接,将产物Pet28a(+)-LAAO表达载体转化BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经Western-blot分析表明,重组蛋白能被兔抗竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)阳性血清所识别.将鼻咽癌CNE-2Z、人宫颈癌LYA01021和卵巢癌A2780MSC细胞悬液接种小鼠建立小鼠实体瘤模型,分别用不同浓度重组蛋白接种荷瘤小鼠,根据瘤重和小鼠存活时间计算抑瘤率和对荷瘤小鼠生命延长率.结果表明:重组蛋白对低、中和高剂量组荷瘤小鼠抑瘤率和生命延长率与阴性对照组均存在极显著差异(P<0.01).本研究为开发利用竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶提供依据,为进一步研制新型的抗肿瘤药物打基础.     

一个人类锌指蛋白家族新基因ZFP28的克隆及表达

Krupple型锌指蛋白是一类具有重要功能的转录调节因子，初步克隆了一个新的人类krupple型锌指蛋白基因，经国际基因命我委员会批准命名为ZFP28。此基因长4076个碱基，含8个外显子，在基因组DNA上长18kb。它编码的蛋白质全长868个氨基酸，含1个信号肽，2个KRAB框和14个C2H2型的锌指。Northem Bolt分析表明该基因在人类早期胚胎的各个组织中普遍表达，在肺和肝中的表达水平最强，其结构和表达特征预示着它编码的是一个具DNA结合功能的转录调控因子。     

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3的研究进展

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(Cyclin dependent kinase inhibitor 3,CDKN3)属于激酶抑制因子CIP/KIP基因家族成员,是一种细胞周期调控因子.在各个组织中,CDKN3作用的蛋白不同,进而发挥不同的作用.一方面,CDKN3可通过抑制P21转录,促进DNA复制与细胞增殖;另一方面,CDKN3能够将CDC2 Thr~(161)去磷酸化,来抑制有丝分裂间期G1期向S期的转化,进而影响细胞周期的发展,同时CDKN3可与Mps1结合调节中心体数量.越来越多的研究发现,CDKN3的异常表达和调节细胞周期的机制对癌症的发生有重要作用.在肝癌、前列腺癌、乳腺癌等细胞中CDKN3表达量高于正常水平,但在脑胶质细胞瘤、慢性粒细胞白血病等细胞中CDKN3呈低表达.主要针对CDKN3基因的结构及其编码蛋白的功能展开综述.     

酵母菌发酵人参药渣产物对肠道黏膜损伤小鼠肠道IgA分泌的影响

将40只BALB/c小鼠随机分成4组,阴性对照组、阳性对照组、发酵后的人参药渣组和模型组.利用环磷酰胺腹腔注射方法构建小鼠的肠道黏膜损伤模型.饲喂一周后,记录各组小鼠体重变化情况,酶联免疫法(ELISA)检测肠黏膜SIg A、免疫印迹法(Western blotting)检测小肠Ig A的蛋白表达量.结果表明:发酵药渣组的小鼠料重比相对阴性性对照组显著降低(P0.05),相对与模型组略低;发酵药渣可以显著促进肠道SIg A的分泌且Ig A蛋白表达量增加;药渣发酵后对可改善环磷酰胺诱导的小鼠肠黏膜损伤,并具有提高免疫能力的作用.     

核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum) arom基因3''''-末端的克隆与分析

根据五功能AROM蛋白保守区域设计简并引物,从核盘菌基因组中获得了一段大小为1626bp的DNA片段.结合Southern杂交结果,用反向PCR克隆了arom基因3'-末端4104bp的序列.序列分析结果表明,该DNA片段推测的氨基酸序列与烟曲霉、粗糙脉孢霉、构巢曲霉和粟酒裂殖酵母等的AROM蛋白同源,包含了部分5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSP合成酶)结构域、莽草酸激酶结构域、脱氢奎尼酸脱水酶(脱氢奎尼酸酶)结构域和脱氢莽草酸脱氢酶结构域,其中含有EPSP合成酶模式2(255-273)、莽草酸激酶模式(426-453)和Ⅰ型脱氢奎尼酸酶活性位点模式(659-687).     

α-L-岩藻糖甘酶1基因在小鼠不同组织中的表达分析

为了研究不同组织中α-L-岩藻糖苷酶1 (α-L-fucosidase1, FUCA1)特异性表达的调节机制,运用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)在mRNA水平和蛋白水平上分析了Fuca1基因在小鼠成体不同组织中的表达特点,还利用Clustal Omega分析了氨基酸序列在不同物种的同源性和系统进化树。qPCR检测结果显示,Fuca1基因在小鼠不同组织中存在表达差异,在睾丸中表达最高,其次是肾脏与卵巢;而Western Blot检测结果显示FUCA1主要在小鼠肾脏和卵巢高表达;对FUCA1氨基酸序列进行同源性分析,结果显示FUCA1保守性低。以上研究表明,FUCA1可能与小鼠的组织特异性表达调节有关,其在性腺中的具体表达机制还有待研究。     

RAGE敲除对AGEs-RAGE轴诱导血管平滑肌细胞线粒体动力学变化的影响机制研究

探讨晚期糖基化终产物受体(RAGE)表达对血管平滑肌细胞线粒体动力学变化的影响机制。细胞水平以小鼠RAGE基因mRNA序列作为干扰靶点,设计3组靶向RAGE的shRNA,转染离体培养的小鼠主动脉血管平滑肌细胞,并通过PCR和Western blot方法验证转染是否成功;采用CML-BSA分别干预正常血管平滑肌细胞(VSMCs)和转染的VSMCs,采用细胞免疫荧光检测血管平滑肌细胞线粒体动力相关蛋白(DRP1)分布和表达情况;Western blot分析VSMCs的双联RNA依赖蛋白激酶(PKR)、线粒体动力相关蛋白(DRP1)、线粒体融合蛋白(Mfn2)以及相关通路JAK2/STAT3磷酸化蛋白表达水平。动物水平上,通过高脂饲喂和腹腔STZ注射建立2型糖尿病模型;后经尾静脉注射RAGE基因敲降(RAGE^-/-)质粒,采用Western blot法测定RAGE基因敲除对糖尿病小鼠主动脉PKR、JAK2、STAT3磷酸化水平以及对线粒体动力学相关蛋白表达水平的影响;采用HE和油红O病理学染色观察敲降RAGE基因后AGEs-RAGE轴诱导糖尿病小鼠血管壁的厚度变化。细胞...     

新基因ZNF325在人类早期胚胎中的表达

锌指蛋白基因家族是人类最大的基因家族之一，目前已知的很多转录调控因子都是锌指蛋白成员^[1]。初步克隆了一个与RBAK基因有着高度同源性的人类C2H2型锌指蛋白新基因，经国际基因命名委员会批准命名为ZNF325，此基因位于染色体7p22，长2697个碱基，含5个外显子，在基因组DNA上长15kb。它编码的蛋白质全长462个氨基酸，含15个C2H2型的锌指。Northern Bolt分析表明该基因在人类早期胚胎的各个组织中普遍表达，在肺和脑中的表达水平最强，但在肝中的表达随着胚胎的发育而逐渐减少。它的结构和表达特征预示着它编码的是一个具DNA结合功能的转录调控因子。     

油菜素甾醇受体蛋白BRI1的研究进展

在生物体中很多信号的感知是由具有蛋白激酶功能的受体蛋白完成的.油菜素甾醇(Brassinosteroids,BR)是一种重要的植物激素,对植物的生长发育具有重要的作用.BRI1(protein brassinosteroid insensitive 1)是BR的受体蛋白,定位在细胞膜上,在BR信号被胞外结构感知到以后,...