中草药提取工艺优化及其体外抑菌的研究

对大黄、山楂、苦参、薄荷、黄芩和黄柏采用水煮法和乙醇回流法进行提取,用两倍稀释法测定金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的体外最小抑菌浓度(MIC),研究不同中草药提取物的抑菌能力.结果表明:6种中草药对金黄色葡萄球菌呈现不同程度的抑菌作用,MIC值在1.56～50 mg/mL之间,其中大黄和黄芩的提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果...     

三种中草药提取物对大肠杆菌的抑制作用

文章以大肠杆菌为实验对象,用地榆、大黄、苦参三种中草药的乙醇提取液研究对该菌的抑制作用.通过培养法测定三种中草药的抑菌率、最小抑菌浓度,大黄、苦参最小抑菌浓度为1000 mg/mL;地榆最小抑菌浓度为500 mg/mL,抑菌率达100%,用此最小抑菌浓度经比浊法测出大肠杆菌的生长曲线,与对照组对比得出:地榆乙醇提取液作用下的大肠杆菌对数生长期缩短,衰亡期延长,且吸光度值(OD)均低于对照组,说明地榆对大肠杆菌的抑制作用较强,而大黄和苦参前期吸光度值(OD)低于对照组,但在22 h后,两者曲线呈上升状态,说明此阶段抑制作用在减弱.因此,大黄和苦参的乙醇提取液对大肠杆菌抑制作用较地榆弱.     

不同加工处理中草药对鳗鲡主要致病菌的抗菌效果

采用琼脂稀释法,测定了3种不同加工处理后的大黄(Pheum officinale B.)、黄连(Coptis chinensis F.)、黄芩(Scutellaria baicalensis G.)、五倍子(Rhus chinensis M.)、连翘(Forsyrhia suspense V.)、知母(Anemarrhena asphodeloides B.)等6种中草药对16株鳗鲡致病菌的MIC和MBC.结果表明:6种中草药通过不同的加工处理,其抑菌效果存在显著差异.6种中草药通过两种粉碎方法处理后的抑菌效果明显好于水煎煮法,而且药物粉碎颗粒的大小与药物抑菌效果也有一定的关系.     

富硒中草药复方对猪大肠杆菌和沙门氏菌的体外抑菌试验

采用平皿二倍稀释法研究了三种富硒中草药复方煎剂对仔猪腹泻主要致病菌株——大肠杆菌和沙门氏菌的体外抑菌作用.试验结果表明,复方Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对大肠杆菌的最低抑菌浓度(M IC)分别的为0.04、0.02和0.04g/mL,说明复方Ⅱ对大肠杆菌的体外抑菌作用优于复方Ⅰ和复方Ⅲ;复方Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对沙门氏菌的最小抑菌浓度分别为0.04、0.02和0.02 g/mL,说明复方Ⅱ、复方Ⅲ对沙门氏菌的体外抑菌作用相近,并且优于复方Ⅰ;复方Ⅲ对沙门氏菌的抑菌效果优于大肠杆菌,复方Ⅰ和复方Ⅱ对这两种菌抑菌效果相近.     

10种中草药乙醇提取物抗真菌作用研究

以白色念珠菌为指示菌,测定了黄连等10种中草药的抗真菌作用.实验结果显示,不同的中草药其抗真菌作用不同,其中黄连和黄芩2种药物对白色念珠菌的抑制作用效果最好,其次是五蓓子和知母,而甘草对白色念珠菌抑菌作用较差.在一定质量浓度范围内,黄连提取物的抗真菌作用随药液浓度的增大而增强,呈剂量依赖性.其最低抑菌质量浓度为1mg/mL.将抑菌成分不同的中草药进行两两配伍,考察其对白色念珠菌的协同抑制作用,实验结果显示,除五蓓子和丹参的混合药液对白色念珠菌具有协同抑制作用外,其余3组中草药的配伍,并无协同抑制作用.     

复合中草药成膜喷剂的研制及抗菌消炎镇痛效果

【目的】研制一种辅助创伤伤口愈合的复合中草药成膜喷剂并评价它的抗菌、消炎和镇痛效果。【方法】以大肠杆菌(Escherichia coli)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)和铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas aeruginosa)为受试菌，采用药敏片抑菌圈试验、悬液定量试验，确定该复合中草药成膜喷剂的配方；采用小鼠醋酸扭体法、小鼠耳廓肿胀法和眼部过敏性试验评价该复合中草药成膜喷剂的消炎和镇痛效果。【结果】以山银花(Lonicerae flos)煎煮液、木香(Aucklandiae lappa)挥发油、酢浆草(Oxalis corniculata)煎煮液和仙鹤草(Agrimonia pilosa)煎煮液的最佳抑菌药液相对密度分别为0.5，0.5，1和1作为最佳配方制作复合中草药成膜喷剂；该喷剂对大肠杆菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌的抑菌圈直径分别为22.80，26.70和11.10 mm，最低抑菌浓度分别为0.10，0.25和0.25 μg·mL-1，对上述3种细菌作用2 min后的杀灭率达到98%以上；复合中草药成膜喷剂对小鼠眼黏膜无刺激性作用，对小鼠内脏疼痛显示出较强的镇痛作用，且能明显降低小鼠右耳肿胀程度。【结论】研制出的复合中草药成膜喷剂具有较好的抗菌、消炎和镇痛效果。     

十种中草药对雏沙门氏菌的体外抑菌试验

采用琼脂平板打孔法、牛津杯法和药敏片法,检测鸡矢藤、地骨皮、白头翁、大青叶、蒲公英、五味子、乌梅、艾叶、黄连、丹参10种中草药对雏沙门氏菌的体外抑菌效果,并从中筛选具有较好体外抑菌作用的单味中草药。结果表明,五味子和乌梅对雏沙门氏菌的抑菌效果敏感性较强,丹参和黄连的敏感性一般,其他6种中草药均不敏感。试验结果表明,五味子和乌梅等对雏沙门氏菌具有一定的抗菌作用,且不同的中草药抑菌效果不同。该研究为临床治疗鸡白痢以及开发中草药制剂提供了依据。     

五种中草药提取液对细菌作用效果初探

选取银杏、厚朴、野菊花、苦参、石菖蒲五种中草药,利用95%酒精提取其活性成分,进行抑菌、杀菌活性测定.结果表明,在供试质量浓度0.05g/mL时,此五种中草药对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌率均在86%以上;在供试质量浓度0.01g/mL时,作用时间为5min,五种中草药对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀菌率均在94.5%以上,杀菌效果显著.不同中草药对同一细菌的抑制作用有一定差异,同一中草药对不同细菌的抑制作用亦存在着较大差异.中草药的杀菌率随着浓度增大、着用时间延长,杀菌率随之增大.但五种中草药对枯草杆菌均无杀菌效果,其原因有待进一步探讨.     

中草药提取物体外止血效果评价模型

【目的】建立体外综合止血评价模型,筛选止血效果良好的中草药。【方法】选择凝血酶时间(Thrombin time,TT)、血小板聚集率(Platelet aggregation rate,PAgR)和黏附率(Platelet adhesion rate,PAdR)、抗凝血酶Ⅲ(Anti-thrombinⅢactivity,AT-Ⅲ)活性、血浆复钙时间(Recovery calcium time,RT)、最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)7项指标,应用层次分析法建立分析评价模型,对侧柏叶、三七、两面针、止血环酸进行体外止血活性评价,并通过小鼠出血与凝血实验验证模型的可行性。【结果】模型分析表明止血效果好的为侧柏叶、三七、止血环酸;效果较好的为两面针;效果差的为生理盐水。模型分析结果与动物实验结果相吻合。【结论】该模型对中草药止血效果评价方法的建立有一定的参考价值。     

黄连水提物对卵形鲳鲹源溶藻弧菌的抑菌作用

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)是一种生长快速且肉质鲜美的经济型海水养殖鱼类,但是近些年为满足人们的日常需求,在不断扩大养殖的同时病菌也逐渐泛滥。溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是华南沿海地区海水养殖鱼类细菌性鱼病的主要致病菌之一,给水产养殖业带来巨大损失。本研究对黄连(Coptis chinensis Franch)的抗菌作用进行系统研究,目的是为由溶藻弧菌引起的爆发性细菌性鱼病的高效防治提供科学的用药依据。本研究采用二倍稀释法测定黄连水提物对卵形鲳鲹源溶藻弧菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)和半数致死量(LD50),并使用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定细菌超声破碎上清液中可溶性蛋白含量。结果表明,黄连水提物对溶藻弧菌具有明显的抑制作用,其对溶藻弧菌的MIC、MBC和LD50的值分别为7.800mg/mL、31.250mg/mL和15.625mg/mL。胞内可溶性蛋白含量变化的结果提示:黄连发挥抑菌作用的机制可能是通过损伤细菌的细胞壁导致细菌内容物的释放并引起菌体裂解死亡。黄连具有发展成为一种高效抗水产病害中草药制剂的潜力。     

基于核酸适配体吸附检测技术的卵形鲳鲹源溶藻弧菌的快速检测

溶藻弧菌是引起广西等华南沿海地区海水养殖鱼类发生细菌性鱼病的主要致病菌之一,其引起的鱼病具有发病迅速、死亡率高、流行面广等特点,严重威胁着华南地区水产养殖业的健康可持续发展。着力发展操作便捷、成本低、耗时短、准确度高的水产致病菌快速检测技术,对于及早发现、确定病原,进而有的放矢地制定治疗方案来控制病原扩散、降低损失意义重大。在先前研究中,我们基于指数富集的配基系统进化技术(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment technology,SELEX)筛选获得特异性识别卵形鲳鲹源溶藻弧菌的核酸适配体,本研究中我们基于核酸适配体VA8开展溶藻弧菌的快速检测诊断技术的研究,开发出一种新型的能够快速检测溶藻弧菌的核酸适配体吸附检测技术(Aptamer VA8-based enzyme-linked aptasorbent assay,VA8-ELASA),并对VA8-ELASA技术检测溶藻弧菌的特异性和灵敏性进行分析研究。VA8-ELASA技术可以用于溶藻弧菌的快速检测,具有特异性强、灵敏度高的特点。本研究基于核酸适配体VA8建立的新型核酸适配体吸附技术(VA8-ELASA),有望实现对广西卵形鲳鲹养殖中溶藻弧菌病的快速诊断、实时监控和有效预防。     

基于高通量测序的不同养殖系统下凡纳滨对虾肠道和水体中微生物的多样性

【目的】研究不同养殖系统对凡纳滨对虾肠道及水体微生物多样性的影响。【方法】以循环养殖系统和非养殖系统下凡纳滨对虾养殖水体及其肠道为研究对象,在养殖30d后采集样品,采用Illumina MiSeq高通量测序样品细菌16SrRNA基因V3+V4区,通过RDP11.3、Greengenes13.8、NCBI 16S Microbial和Customized batabase等数据库进行分析,阐述循环养殖系统的意义和微生物在其中的作用。【结果】养殖期间,不同养殖系统凡纳滨对虾均正常存活。将原始序列优化后对Clean序列进行分析,非循环系统下水体优质序列百分比约81%,肠道中约89%;循环系统下水体优质序列百分比为92%,肠道中为94%。两种养殖系统下水体和肠道细菌在纲水平占绝对优势的是变形菌纲,但各菌群丰度不同;不同的Alpha指数显示出物种间的差异性;通过系统发育树可以看出,不同养殖系统改变了凡纳滨对虾生境中的物种及发育关系,间接阐述微生物在养殖生境中的作用和意义。【结论】通过高通量测序揭示不同养殖系统中微生物菌群的差异以及多样性,对于凡纳滨对虾实际养殖具有指导作用,对阐述养殖过程中微生物和相关疾病的关系具有重要意义。     

卵形鲳鲹源创伤弧菌导致宿主细胞凋亡的作用机制

弧菌是自然界菌群中的一部分,作为一种有害菌不仅可以感染常见的水产品,有些弧菌更是对人体有一定的致病性。随着近些年水产养殖的不断扩大,由创伤弧菌(Vibrio vulnificus)引起的鱼病不胜枚举,不仅给养殖行业造成巨大的损失,同时对人类生命安全也存在着巨大威胁。本文对卵形鲳鲹源创伤弧菌感染宿主细胞的机制进行研究,目的是阐明创伤弧菌对宿主细胞的致死机理,为未来研发抗病菌功能产品提供理论依据。本文通过确定创伤弧菌胞外产物(Extracellular products,ECPs)的蛋白浓度,以不同的蛋白浓度为基准,利用光镜观察和细胞活力CCK检测技术测定创伤弧菌ECPs对细胞的毒性。然后使用Hoechst 33342染核观察及DNA ladder来进一步确定其致死机制。根据细胞毒性结果,卵形鲳鲹源创伤弧菌ECPs对宿主细胞有很强的细胞毒性。Hoechst 33342染核结果发现实验组出现了凋亡小体,这与STS处理的阳性对照组中细胞变化相一致。但是ECPs处理后的宿主细胞未出现明显的DNA ladder。卵形鲳鲹源创伤弧菌对宿主细胞具有明显的毒性,再通过理化性质的检测,可以初步确定创伤弧菌导致卵形鲳鲹细胞死亡是通过凋亡途径发生的。未来将针对凋亡途径的具体通路进行深入研究,为控制病菌的感染提供理论依据。     

陆英不同部位水提液抗炎镇痛作用的比较研究

目的比较陆英不同部位水提液的抗炎镇痛作用。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀炎症模型,研究陆英不同部位水提液灌胃给药对急性炎症的作用。采用热板法和醋酸扭体法致痛,研究陆英不同部位水提液灌胃给药的镇痛作用。结果与模型组相比,陆英根与茎叶水提液高、低剂量(10.0、5.0 g生药/kg)组显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀(P0.01)。陆英根与茎叶水提液高、低剂量(10.0、5.0 g生药/kg)组给药后明显延长热板所致小鼠的痛阈值,与模型组和自身给药前比较差异极显著(P0.01);陆英根与茎叶水提液高、低剂量(10.0、5.0 g生药/kg)组明显减少醋酸所致小鼠扭体反应次数,与模型组比较差异极显著(P0.01)。陆英根水提液高、低剂量组给药后与相同剂量的茎叶水提液相比,差异显著(P0.05、P0.01)。结论陆英根与茎叶水提液灌胃给药均具有抗炎、镇痛作用,且根水提液抗炎镇痛作用强于茎叶水提液。     

陆英有效部位抗菌活性研究

本实验利用陆英全草为研究对象,采用甲醇超声法和乙醇回流法对陆英干燥全草的有效成分进行提取,并将提取物分别用石油醚、乙酸乙酯和水萃取得到不同极性的萃取物组分.通过比较粗提物和萃取相的抑菌活性初步确定陆英的抗菌有效部位.结果显示乙醇回流法的提取率较高,但甲醇超声法提取物活性更好.其中甲醇超声法石油醚萃取物活性最优,对大多数...     

瑶药石柑子药材质量分析的初步研究

目的建立石柑子的质量分析方法。方法根据2015版《中国药典》的实验方法对石柑子药材的水分、总灰分及醇浸出物进行测定。结果广西13批不同采集时间和不同地域的石柑子药材均具有相同的植物形态和药材性状,实验测定结果为水分为9.54%～11.39%,总灰分为7.21%～9.58%,酸不溶性灰分为0.94%～2.08%,浸出物为7.96%～10.83%。结论本研究的石柑子鉴别方法,可用于该药材的质量控制分析,该实验研究结果可为建立石柑子药材的质量标准提供科学依据,以便更好的开发利用其药材。     

广西北部湾大宗海水养殖鱼类卵形鲳鲹感染溶藻弧菌及其致病性研究

【目的】2016年广西钦州湾近海网箱养殖的卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)发生以体表皮肤溃烂、皮下出血、内脏器官病变为典型症状的细菌性疾病,通过对患病卵形鲳鲹中病原菌进行分离、鉴定与保存,为后续开展病原菌快速检测技术和防控技术等研究,以及控制相关病原菌在海水养殖中的暴发和流行奠定基础。【方法】利用LB平板和TCBS平板从患病卵形鲳鲹体表溃烂病灶、肾脏、肝脏组织中分离纯化疑似病原菌,并对其进行常规形态特征和生理生化反应的生物学检验,通过16SrDNA基因测序对疑似病原菌株进行分子生物学鉴定,在细胞和鱼体水平开展病原菌的致病性研究,同时进行人工感染的回接试验。【结果】分离得到4株疑似病原菌(TOQZ01,TOQZ02,TOQZ03,TOQZ04),基于其表型、分子生物学特征和进化关系,判定4株菌株均为弧菌属的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus),且细胞毒性试验和回归试验证实,分离得到的溶藻弧菌为此次卵形鲳鲹发病的病原菌。【结论】溶藻弧菌是引起广西沿海地区海水养殖鱼类发生细菌性鱼病的主要致病菌之一,未来将基于本研究中分离得到的溶藻弧菌开展病害快速检测技术和防控技术等现代海水生态健康养殖关键技术研究,以实现对广西海水养殖溶藻弧菌病的快速诊断、实时监控和有效预防。     

九香虫提取物的抗疲劳和补肾壮阳活性评价

目的:评价九香虫提取物的抗疲劳和补肾壮阳活性.方法:以九香虫水提取物低、高剂量组(1.4,7.0 g·kg~(-1))小鼠灌胃给药15 d后,测定了小鼠的力竭游泳时间、血清尿素氮和血乳酸含量等.皮下注射氢化可的松建立了小鼠的肾阳虚模型,九香虫提取物低、高剂量组连续灌胃30 d,检测了小鼠胸腺、脾脏、肾上腺、睾丸、精囊腺等脏器系数,以及交配能力(捕捉潜伏期、捕捉率、交配潜伏期、交配率等).结果:九香虫提取物高剂量组能显著降低小鼠血清乳酸和尿素含量,延长力竭游泳时间,具有明显的抗疲劳作用.高剂量组还能显著增加肾阳虚小鼠的免疫器官、睾丸和附性器官的脏器系数,提高交配能力,具有明显的补肾壮阳作用.结论:九香虫提取物具有明显的抗疲劳和补肾壮阳作用.     

艾草抑菌抗炎作用研究

研究艾草(Artemisia argyi)水煎液的抑菌抗炎作用.用试管二倍稀释法和牛津杯法测定艾草水煎液的最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)、最低杀菌浓度(Minimum Bactericidal Concentration,MBC)和抑菌直径;用乙酸致小白鼠毛细血...