人端粒酶逆转录酶核酶抑制端粒酶活性的实验研究

目的　为有效地切割端粒酶逆转录酶mRNA以降低端粒酶活性 ,从而使肿瘤细胞生长变慢 ,凋亡增加 .方法　设计并合成了 2个针对端粒酶逆转录酶mRNA的锤头状核酶基因htertRZ及htert 5’RZ ,构建了核酶基因的体外转录和真核表达质粒 ;并将核酶转染致肿瘤细胞中 ,检测其对肿瘤细胞端粒酶活性和生物学性状的影响 .结果　 2种核酶在细胞内均能明显地抑制端粒酶活性 ;核酶htertRZ稳定转染细胞后 ,使细胞生长变慢 ,倍增时间延长 ,但无明显促细胞凋亡作用 .结论　 2种核酶可望成为有效的端粒酶抑制剂 ,在抑制肿瘤生长中发挥作用 .     

全反式维甲酸对HL—60细胞hTERT基因表达和端粒酶活性的影响

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）诱导HL－60细胞分化过程中人类端粒酶逆转录酶（hTERT)蛋白表达和端粒酶活性的改变,方法：应用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量的变化;采用多聚酶链反应－酶联免疫反应（PCR－ELISA）方法检测ATRA处理HL－60细胞前后端粒酶活性的改变,用碘化丙锭染色经流式细胞仪检测细胞周期的变化,结果：ATRA作用于HL－60细胞后,细胞内hTERT蛋白含量逐渐降低,细胞的端粒酶活性相应受到抑制。结论：在IL－60细胞分化过程中,可以通过hTERT基因的表达下调而抑制端粒酶的活性。     

"突触引物"实时荧光PCR检测端粒酶活性

为建立一种简便的端粒酶测定方法，首先采用高灵敏的核酸染料SYBR Gold染色代替放射自显影，建立了简便可靠的扩增产物显示方法，进而合成了端粒酶扩增产物的模拟产物，考察了突触引物检测的可行性和灵敏度。在此基础上，建立了检测端粒酶活性实时荧光PCR。由于突触引物可以有效的降低非特异性扩增，有效解决了端粒酶活性检测中的非特异产物干扰，为定量检测端粒酶活性打下了基础。     

溴化乙锭—TRAP法检测端粒酶活性

端粒酶是一种核蛋白，在真核生物体内，通过将端粒重复顺序转移到染色体末端面维持染色体的稳定。端粒酶活性存在于生殖细胞和永生癌细胞，但在正常细胞中却极低乃至无法检测，我们使用ＥＢ染色简化了端粒酶活性检测的传统的ＴＲＡＰ法。     

端粒-端粒酶与消化系统恶性肿瘤

消化系统恶性肿瘤对人类健康危害极大 ,许多学者对此作了大量研究 .目前认为绝大多数恶性肿瘤中存在端粒酶活性 ,肿瘤的无限增殖与端粒酶的活化密切相关 .端粒酶活性的检测可作为消化系统恶性肿瘤早期诊断与预后判断的生物学指标 ,理论上可通过抑制端粒酶活性达到治疗恶性肿瘤的目的 .     

端粒酶与食管癌、胃癌相关性的研究

端粒是染色体DNA端部的特化部分，由高度重复的短序列DNA一蛋白质组成的特殊结构，能维持染色体的稳定和完整．端粒酶是由RNA与蛋白质亚基组成的核糖核蛋白酶，能以自身RNA为模板，合成端粒序列，是一种非常特殊的逆转录酶．端粒的长度和端粒酶的活性与细胞永生化，细胞衰老和癌变密切相关，在肿瘤发生发展中，端粒酶成为一种重要的肿瘤生物学标志物，有望作为诊断和治疗肿瘤的新靶点．本对端粒酶的结构与功能，端粒酶与食管癌、胃癌相关性的研究新进展及端粒酶活性的检测方法做一简要综述．     

Epithalon对人胎肝细胞端粒酶活性和端粒长度的影响

以松果体分泌物,"Epithalamin"缩氨酸为基础,人工合成多肽"Epithalon"。通过用细胞形态学观察用药后细胞的生长情况,MTT法检测Epithalon多肽对人肝细胞株L-02增殖与活力的影响,以及运用端粒酶重复序列扩增——焦磷酸根酶联发光技术检测人肝细胞株L-02端粒酶活性,流式荧光原位杂交法检测端粒长度。研究了多肽作用于人肝细胞L-02后对细胞的生长情况、细胞端粒长度以及细胞端粒酶活性所产生的影响。研究显示Epithalon多肽具有提高端粒酶活性,延缓端粒缩短的作用。     

三氧化二砷抑制肝癌细胞端粒酶活性的实验研究

目的：观察三氧化二砷对肝癌细胞株BEL-7402和SMMC-7721端粒酶活性的影响。方法：应用端粒酶多聚酶联反应一酶联免疫测定(PCR-ELISA)方法，检测三氧化二砷作用后，肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721细胞端粒酶活性的变化并比较两种细胞端粒酶对三氧化二砷敏感性的差异。结果：0．25～2．00μmol／L三氧化二砷(24～96h)可抑制肝癌细胞系BFL-7402的端粒酶活性，抑制作用与时间、剂量呈依赖性关系；0．25～0．50μmol／L三氧化二砷对SMMC-7721细胞端粒酶活性没有影响(96h以内)，1．00～2．00μmol/L三氧化二砷可抑制SMMC-7721细胞端粒酶活性(4H8～96h)，有时间、剂量依赖关系。结论：三氧化二砷可以抑制肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721细胞端粒酶的活性；BEL-7402细胞端粒酶对三氧化二砷的敏感性较SMMC-7721细胞端粒酶高。     

溴化乙锭-TRAP法检测端粒酶活性(英文)

端粒酶是一种核蛋白,在真核生物体内,通过将端粒重复顺序转移到染色体末端而维持染色体的稳定．端粒酶活性存在于生殖细胞和永生癌细胞,但在正常细胞中却极低乃至无法检测．我们使用ＥＢ染色简化了端粒酶活性检测的传统的ＴＲＡＰ（Ｔｅｌｏｍ ｅｒｉｃ Ｒｅｐｅａｔ Ａｍ ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ）法．结果表明,对粗抽提物而言,ＥＢ染色具有足够的可信度和灵敏度,同时又经济省时,便于推广使用     

端粒酶核酶抑制肿瘤细胞生长的研究

已证明有84.7%的人类恶性肿瘤组织细胞中端粒酶表达异常增高.端粒酶的作用是合成染色体末端端粒重复序列维持染色体稳定及细胞永生化的关键因素.因此,端粒酶在肿瘤发生发展中起重要作用,是目前最广泛的肿瘤标志物.核酶是一种具有内切酶活性的RNA分子,只要满足一定的空间结构就能定点切割RNA底物.切割端粒酶的核酶(简称为端粒酶核酶)主要针对端粒酶的两个亚单位hTR和hTERT抑制两基因的表达,降低端粒酶的活性,抑制肿瘤细胞的生长.     

永生细胞系,体细胞和生殖腺细胞中端粒酶活性检测

用TRAP法对来自人肺、乳腺和皮肤的恶性肿瘤永生细胞系．和该三种组织来源的正常体细胞,及正常卵巢和睾丸组织进行了端粒酶活性检测。结果发现,三种永生细胞系和卵巢与睾丸组织中均可测到端粒酶活性,而三种组织来源的体细胞不能测到;提示端粒酶可能对恶性肿瘤细胞永生化、生物种系正常繁衍,和正常体细胞的衰老与寿命起着重要的决定作用。     

Study on the Detection of Telomerase Activity by Combining DNA Sequence Analysis with TRAP

Telomeric repeat amplification protocol (TRAP) is now aconventional assay for detecting telomerase activity. However, this method presents problems owing to tedious quantitation, radioisotopic handling. In order to alleviate these inconveniences, a novel telomerase DNA sequencing assay together with TRAP to detect human telomerase activity was developed. It was used to detect telomerase activity in Hela, HLF, MCF, K562, SMMC-7721 cells, Leukocytes and RNase-pretreated or heat-treated cells as control. Telomerase activity assayed by this method was positive when the number of K562 cells examined was 102，103, and 104. The telomerase activity depended on the number of K562 cells used in the assay. Telomerase activity of Rnase-pretreated cells or heat-treated cells, and human normal peripheral blood leukocyte(Leu) were negative. The result of this method was available within a few hours and was handled without radioisotope. Further studies should be taken to detect telomerase activity in quantitation.     

DNA 稳定的银纳米簇用于检测端粒酶活性研究

摘要: 目的 建立利用 DNA 稳定的银纳米簇检测端粒酶活性的方法。方法 利用合成的寡核苷酸序列能稳定银纳米的特点,在强还原剂硼氢化钠存在下还原银离子得到具有良好荧光特性的银纳米簇。结果 利用端粒酶活性能够延伸 5' － ( TTAGGG) n － 3'的特性,以及含有 G 碱基的 DNA 序列靠近银纳米簇合成模板时,合成的银纳米簇的荧光明显提升特性建立端粒酶活性检测的方法。结论 合成了以寡核苷酸为模板的银纳米簇并对其荧光特性进行表征,建立了 DNA 稳定的银纳米簇用于检测端粒酶活性的方法。     

端粒酶与肿瘤诊断

端粒酶是一种具有逆转录酶特性的DNA聚合酶,临床检测发现在很多恶性肿瘤中都能检测到端粒酶的活性,端粒酶可以作为诊断这些肿瘤的生物学标志.在某些肿瘤中,端粒酶表达会随着肿瘤的进展而上调,因此又可以作为肿瘤恶性程度评价的一个指标.而化疗后端粒酶的变化与临床疗效密切相关,因此也可作为临床疗效及预后判断的指标.