肿瘤基因治疗载体的研究进展

对在肿瘤基因治疗中较常见的载体--病毒载体(痘苗病毒载体、腺病毒与腺病毒相关载体、单纯疱疹病毒和逆转录病毒)和非病毒载体(脂质体和稳定质粒--脂质颗粒)进行了介绍,同时对其存在的问题作了简要阐述,并对该研究前景进行了展望.     

动物腺病毒载体的研究进展

腺病毒载体是目前基因治疗中应用最广泛的一种病毒载体,与其他病毒载体不同,腺病毒载体的诸多优点决定了腺病毒载体在基因治疗领域中具有广阔的应用前景．文章综述了腺病毒载体的结构、研发过程、构建及应用前景等,为进一步优化和利用腺病毒表达载体提供参考．     

腺病毒介导的BmK CT基因抑制神经胶质瘤U251细胞迁移及诱导凋亡的研究

以腺病毒为载体介导东亚钳蝎氯离子通道神经毒素(BmK CT)感染人脑神经胶质瘤细胞株U251,研究其对细胞迁移及凋亡的影响,并探讨可能的作用机制.首先以含BmK CT基因的腺病毒Ad-BmK CT及对应的腺病毒空载体转染U251细胞筛选出最佳感染浓度,随后利用Boyden Chamber实验和划痕实验检测了BmK CT对U251细胞迁移能力的影响,MTT检测了细胞存活能力,用Annexin V-Cy5和PI双标记流式检测分析细胞凋亡情况,并通过Western-blot检测凋亡相关蛋白分析可能的凋亡机制.结果显示,U251细胞感染Ad-BmK CT 48h后,迁移能力受到明显抑制;细胞变圆漂浮,Western-blot检测发现细胞色素c开始释放,caspase-3表达上调.     

腺病毒介导的DPP6过表达载体的构建及其在大鼠心肌细胞内表达的鉴定

目的:构建腺病毒介导的DPP6过表达载体并验证其在大鼠心肌细胞内的表达.方法:应用PCR技术扩增目的基因DPP6,经酶切、连接等反应将目的基因插入穿梭载体p Shuttle-CMV中,进而转化至含有Ad Easy质粒的大肠杆菌中,进行重组;所产生的腺病毒载体转染在HEK-293细胞中,进行腺病毒的包装、分泌和扩增,所得病毒感染大鼠心肌细胞,进行荧光及实时定量PCR(q PCR)鉴定.结果:DPP6过表达腺病毒载体构建成功,经HEK293细胞包装、扩增后,所得病毒可成功感染初生大鼠心肌细胞,观测到腺病毒携带的绿色荧光蛋白表达,q PCR检测DPP6 mRNA表达明显升高.结论:成功构建了腺病毒介导的DPP6过表达载体,并在大鼠心肌细胞内成功表达,为进一步研究DPP6在心肌细胞内的功能奠定了基础.     

用于骨移植的hCbfa1重组腺病毒载体的构建

克隆hCbfa1的cDNA基因,构建其重组腺病毒载体,以用于研究hCbfa1腺病毒载体在人造骨移植中的作用.将hCbfa1的cDNA目的片段插入腺病毒柯氏质粒PAxCAwt中,再将此质粒与腺病毒DNA末端蛋白复合物共转染293个细胞,通过同源重组构建hCbfa1重组腺病毒载体.重组得到的阳性克隆经酶切、测序鉴定正确,包装纯化后,检测得病毒滴度为2×109PFU/mL,从而成功地构建了hCbfa1重组腺病毒载体,为下一步应用到人造骨移植的转基因治疗打下了基础.     

携带p53基因重组腺病毒载体的构建

将pCMVp53重组转移载体经BamHI和NheI酶切,得到p53基因cDNA,然后将cDNA片段克隆到转移载体pCMV5GFP,使其受CMV5启动子的调控,获得pCMV5p53重组转移载体.用该线状重组转移载体与腺病毒右臂DNA经磷酸钙共转染293细胞获得重组腺病毒,经酶联免疫吸附法(ELISA)测定p53蛋白含量,证明外源p53基因在含重组腺病毒的293细胞中得到表达.     

腺病毒相关病毒载体及基因治疗的研究进展

<正>自1990年首例ADA缺乏症患者施行基因治疗成功以来,该领域的基础和临床实验研究发展十分迅速。基因治疗的主要目的是将外源基因有效地导入宿主细胞内,并使之稳定表达,以达到治疗人类疾病的目的。 为了方便和有效地将此项技术应用于临床治疗,动物病毒载体介导外源基因的转移是目前应用的主要技术。早期研究和使用较多的是逆转录病毒载体。目前由于其存在着只能感染分裂复制期靶细胞;病毒滴度相对较低以及可能因同源重组产生野生型病毒而引起靶细胞恶性转化的潜在性等缺点,其应用相对受到限制。近年来,应用腺病毒(AV)或腺病毒相关病毒(AAV)作为载体的研究不断增加,尤其是     

GDNF家族及其受体

胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对多巴胺能神经元、运动神经元、感觉神经元等多种神经元均具有营养及损伤后修护作用.GDNF的神经营养作用主要是通过胶质细胞源性神经营养因子受体-α(glial cell line-derived neurotrophic factor receptors-α,GFRα)亚基和受体酪氨酸激酶Ret亚基两类受体亚基介导.     

慢病毒载体研究进展

慢病毒作为一种特殊的逆转录病毒,与通常使用的逆转录病毒载体和腺病毒载体比较,具有可感染分裂细胞及非分裂细胞、转移基因片段容量较大、目的基因表达时间长、不易诱发宿主免疫反应等优点,已成为当前基因治疗和转基因动物中载体研究的热点。近年来对其基础生物学特性、载体改造及其应用等研究均取得了较大进展。本文就慢病毒载体及应用方面的研究进展作一综述。     

腺病毒-腺相关病毒嵌合载体的研发趋势

分析腺病毒-腺相关病毒(Ad/AAV)嵌合载体母体中,3代Ad载体及AAV载体所具有的优势和存在的缺点.阐述Ad/AAV嵌合载体的制备方法、生产工艺,以及其在稳定转染造血干细胞、Duchenne型肌营养不良症(DMD)的基因治疗和人内啡肽基因的表达研究等方面的最新研究进展.同时指出,Ad/AAV嵌合载体是近年发展起来的嵌合病毒载体,它融合了Ad和AAV两种常用的病毒载体的优点,理论上接近理想临床应用的载体,但还需要通过大量的,特别是动物体内的应用研究去检验其优越性,以满足临床治疗需要.     

Fuel cell development for New Energy Vehicles (NEVs) and clean air in China

This paper reviews the background to New Energy Vehicles (NEV) policies in China, and the key scientific and market challenges that need to be addressed to accelerate fuel cells (FCs) in the rapidly developing NEV market. The global significance of the Chinese market, key players, core FC technologies and future research priorities are discussed.     

Power-Effective in the Cell Sectorization Using Wide-Beam and Narrow-Beam for Multi-hop Relay Network

Multi-hop relay is a significant topic in the wireless communication and it is provisioned in the 802.16j standards.At present,the major research on multi-hop relay is focused on the capacity,coverage,coordination,throughput,etc.But in this paper,a new concept about power-effective was discussed.Then,two power-effective coverage extension methods using two sectorized cellular approaches were introduced,i.e.,the widebeam three sector cell(WBTC) and the narrow-beam three sector cell(NBTC).Under such topologie...     

我国FMS现状与发展对策

本文将我国FMS的现状归纳为四种类型,并从三个方面分析了 FMS 现状存在的原因,同时在分析国情的基础上,探讨了我国发展 FMS 的对策.     

间二硝基苯对小鼠睾丸生殖细胞DNA损伤作用的SCGE研究

采用小鼠睾丸支持细胞/ 生殖细胞共培养法以及单细胞凝胶电泳技术,研究了间二硝基苯对小鼠睾丸生殖细胞DNA的损伤作用.结果表明:间二硝基苯能够导致生殖细胞DNA链断裂,而且其受损率与剂量具有明显的剂量效应关系,与对照组相比均具有显著性差异(P＜0.01,P＜0.05);间二硝基苯可以引起离体小鼠睾丸生殖细胞DNA损伤,具有生殖毒性.     

抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备研究

从影响融合率的2个主要因素探讨骨髓瘤细胞系Sp2/0细胞与黄曲霉毒素B_1免疫的脾细胞融合的最佳条件,使融合率达到100%.经筛选和克隆化,获得3株稳定分泌单克隆抗体的细胞株,分别命名为3B3、3H9、5G9.经过鉴定3株均为IgG_1亚类.其中3B3抗体与其他黄曲霉毒素几乎不发生交叉反应,腹水效价为1∶2×10~5,亲和力常数为3.1×10~7 L/mol,竞争性ELISA测出3B3抗体的最低反应浓度为0.05μg/L标准AFB_1样品的的回收率达96%.另外两株腹水抗体水平低,交叉反应强烈,腹水效价仅在1∶10~4数量级.     

ATM 网络物理层信元插入的 CDV 及其容限

源流量点和ＵＰＣ控制点间的信元延迟变化（ＣＤＶ）对ＡＴＭ网络的资源分配、ＣＡＣ和ＵＰＣ控制都有着重要的影响．在文献基础上，进一步讨论了基于信元接口的ＡＴＭ网络物理层（ＰＬ）信元插入的情况，研究了信元时隙映射和ＰＬ信元插入联合作用下的ＣＤＶ，提出了不同序列不同信元的ＣＤＶ计算公式，并确定了ＣＤＶ容限．示例表明：公式计算与定义结果是一致的．     

呋喃骈呋喃木脂素的体外抗肿瘤活性

利用ＭＴＴ快速比色法，以长春新碱（ＶｉｎｃｒｉｓｔｉｎＳｕｌｆａｓ）为阳性对照，研究了从玄参科（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅ）兰石草属兰石草（Ｌａｎｃｅａ ｔｉｂｅｔｉｃａ Ｈｏｏｋ Ｆｅｔ Ｔｈｏｍｓ）中提取的呋喃骈呋喃木脂素对人肝癌细胞（ＳＭＭＣ－７７２１），人宫颈癌细胞（Ｈｅｌａ），中国仓鼠肺成纤维细胞（Ｖ７９）及小鼠黑色素肉瘤细胞（Ｂ１６）的体外抗肿瘤活性，结果显示，呋喃骈呋喃木脂素Ｌ     

人非小细胞肺癌rasP^21和CD44的表达及意义

用免疫组化ＬＳＡＢ法检测４６例非小细胞肺癌ｒａｓＰ２１和ＣＤ４４的表达。结果：ｒａｓＰ２１的阳性率鳞癌为５９％,腺癌６３％;ＣＤ４４的阳性率鳞癌为４１％,腺癌６３％。统计学分析证明：不同临床分期的ｒａｓＰ２１表达强度有显著性差异（Ｐ＜００１）;有淋巴结转移与无淋巴结转移的ＣＤ４４表达程度有显著性差异（鳞癌Ｐ＜００１,腺癌Ｐ＜００２５）;ｒａｓＰ２１与ＣＤ４４表达强度两者无相关性（Ｐ＜００５）。结论：ｒａｓＰ２１的表达与预后不良有关,ＣＤ４４的表达与淋巴结转移有关。     

Prostate cancer targeted MRI nanoprobe based on superparamagnetic iron oxide and copolymer of poly（ethylene glycol） and polyethyleneimin

Methoxyl poly （ethylene glycol） （mPEG-OH） was successfully grafted onto branched polyethyleneimine （hy-PEI） to yield a water soluble graft copolymer mPEG-g-PEI. This copolymer may package superparamagnetic iron oxide （SPIO） by ligand exchange. The SPIO weight percentage in the polymer coated nanoparticles was determined to be 55%, the size and zeta potential of nanoparticles was 50 nm and 12 mV respectively. Antibody fixation onto the complex （mPEI-g-PEG-SPIO） surface layer was achieved by activated single chain monoclonal antibody against prostate stem cell antigen （PSCA）. Our study showed that the single chain antibody functionalized nanoprobe （scAbpscA-PEI-g-PEG-SPIO） with a small size can specifically enter the prostate cancer cells, decreasing MRI T2-weighted signal intensity of prostate cancer cells to 44.76%, Our results revealed that the potential of this magnetic nanoparticulate system promised as a novel MRI nanoprobe for early diagnosis of prostate cancer （PCa）.     

对虾一种新病毒病的细胞超微病变及其诊断

应用电镜超薄切片技术，研究ＬＮＢＶ引起的对虾细胞超微病理变化的结果表明，ＬＮＢＶ的靶细胞依次为淋巴样细胞、表皮细胞、肌样细胞和组织细胞．病虾主要症状是甲壳上有呈放射状或菊花状白斑．在病理切片上可见巨大细胞核，依病程发展，有的核无结构化，有的有各种异物积聚，有的遍布囊泡，有的密集着大量ＬＮＢＶ粒子，并造成核固缩或者核膜极度扩张、破裂而崩解．这些病理过程、病变特点和具有特殊构型的ＬＮＢＶ粒子的存在，可作为该病毒病的特征性诊断指标．膜性系统广泛髓样变性和肌原原纤维排列紊乱和肌节断裂，在其他杆状病毒病不多见，可作为诊断该病毒病的重要辅助性指标．而细菌继发感染对评估预后和指导捕捞是有价值的．文中讨论了ＬＮＢＶ作用机制．