羟基喜树碱诱导肺癌细胞凋亡的实验研究

通过设计不同浓度的羟基喜树碱（HCPT）处理体外培养的肺癌细胞,采用形态学与生化特征的观察及流式细胞仪进行检测.实验结果显示：羟基喜树碱（HCPT）能诱导肺癌细胞发生凋亡,且这种凋亡的作用与HCPT的浓度和作用时间有关.     

HPLC法测定喜树果中喜树碱和羟基喜树碱的含量

测定喜树果中喜树碱和10-羟基喜树碱的含量,采用高效液相色谱法,色谱柱为DiamonsilC18(5μm,200mm×4.5mm),乙腈:水(25:75)为流动相,检测波长254nm,流速1.0mL·min-1。结果:喜树碱在(0.0644～32.2)μg·mL-1、羟基喜树碱在(0.25～25)μg·mL-1范围内线性关系良好。说明方法分离效果好、专属性强、分析速度快、灵敏度高,可作为喜树果药材含量测定的方法。     

10-羟基喜树碱的合成

文中采用半合成法对10-羟基喜树碱的制备进行了研究，以喜树碱为原料，通过氧化和光化两步反应得到HPT初产品。通过对氧化反应的时间、温度、投料比以及光化反应的溶剂、催化剂的研究，得到了较佳的反应条件，HPT初产品总收率为47.06%，纯度92.07%。     

喜树果中喜树碱和羟基喜树碱的快速分离

采用碱法提取喜树果中的有效成分,提取液经酸化,氯仿、乙酸乙酯分别萃取后,浓缩重结晶,柱层析等步骤得到高纯度的喜树碱和羟基喜树碱。实验表明,此法提取率高,得到的产品收率、纯度高,原料利用度高,生产周期短,设备简单。     

羟基喜树碱联合丝裂霉素诱导人白血病K562细胞凋亡

观察羟基喜树碱与丝裂霉索联合应用对人白血病细胞K562的作用效果,并探讨其机制。不同浓度羟基喜树碱与丝裂霉素单独及联合作用于人白血病细胞K562后,应用台盼蓝拒染法检测细胞生长抑制率,计算合用指数（CI）,流式细胞仪（FCM）检测K562细胞凋亡率,吖啶橙（AO）荧光染色和透射电镜观察凋亡形态学变化。结果表明：单独应用时羟基喜树碱和丝裂霉素的IC50分别是8μ/mL和12．5μg/mL,联合应用时IC50下降为4μg/mL（HCPT）和3．6μg/mL（MMC）,CI=0．78,为协同效应。羟基喜树碱与丝裂霉素单独及联合应用均可诱导K562细胞凋亡。2种药物联合应用时的凋亡率高于各自单独用药。羟基喜树碱与丝裂霉素联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡。协同抑制人白血病细胞生长。     

当年生喜树不同发育阶段叶中喜树碱和10-羟基喜树碱含量变化

采用改变检测波长的反相高效液相色谱法,测定当年生苗不同发育阶段喜树叶中喜树碱和10-羟基喜树碱的含量.结果表明当年生喜树苗的喜树碱含量与喜树的发育阶段有关,6、7月份,喜树的各项生理活动旺盛,各种生态因素如光照、水分等适宜喜树生长时含量最高,此后逐渐减少,但在8～9月之间喜树碱含量略有增加,可能是成熟叶片对持续干旱天气的一种适应;不同高度喜树叶片中喜树碱含量从顶端到基部逐渐减少.而10-羟基喜树碱的含量一直保持在较低水平,表明其在成熟组织中受发育调控不明显.     

喜树叶中喜树碱和10-羟基喜树碱的HPLC分析(英文)

建立了同时测定喜树叶片中喜树碱含量的高效液相色谱分析方法.采用sinochrom ODS C18分析柱(250 mm×4.6 mm BP,5.0μm),以甲醇/水为流动相,检测波长为266 nm,梯度洗脱程序为:在前6 min流动相甲醇-水的体积比由40%线性增加至50%,并保持恒定2 min,在随后的32 min甲醇-水的体积比线性增至70%,在40 min时停止该程序.喜树碱在低、中、高3个量的平均加样回收率分别为99.66%,100.3%,99.97%。10-羟基喜树碱在低、中、高3个量的平均加样回收率分别为99.87%,99.88%,100.4%。对不同季节的喜树嫩叶和成熟叶进行了喜树碱和10-羟基喜树碱含量分析,结果表明喜树碱和10-羟基喜树碱的含量变化呈现明显的相关性。     

喜树生长过程中叶内喜树碱及10-羟基喜树碱的含量变化

建立了同时测定喜树叶片中喜树碱含量的高效液相色谱分析方法.对不同生长季节喜树嫩叶和成熟叶中喜树碱及10-羟基喜树碱含量的动态变化进行测定,结果表明：在一年的生长期内,喜树嫩叶中喜树碱的含量变化为一双峰曲线,分别在7月和9月达到峰值,其中7月的含量最高;成熟叶中喜树碱的含量持续下降;在生长过程中,喜树叶片中喜树碱和10-羟基喜树碱的含量变化呈现出明显的相关性.     

羟基喜树碱-聚乙二醇固体分散体的稳定性

为提高难溶药物羟基喜树碱(HCPT)的溶出度,研究了以聚乙二醇(PET)为载体的HCPT-PET固体分散体的稳定性。采用溶剂-熔融法制备了HCPT-PEG固体分散体。在相对湿度75%、温度25℃下,测定了溶出度、吸湿增重和晶体形态。结果表明:HCPT在快速冷却时以无定型态,缓慢冷却时以微晶态存在于载体中。相对分子质量6 000的PEG 6000的固体分散体的稳定性,比PEG 2000更好;高的载体/药物质量比也可提高稳定性。     

载羟基喜树碱叶酸-壳聚糖微球制备及其缓释性

以羟基喜树碱为药物模型,壳聚糖为药物载体,叶酸为肿瘤靶向配体,利用静电相互作用的原理,通过离子交联法合成载羟基喜树碱的叶酸-壳聚糖(FA-CTS/HCPT)微球.利用动态光散射、扫描电镜、以及红外等技术对微球的结构、平均粒径及粒径分布、形态特征、对药物的包封率及载药量、体外释放等特点进行了初步研究.结果表明,所制得的微球平均粒径为32.65μm.扫描电镜下观察其形态圆整,大小均匀,无粘连.对羟基喜树碱包封率最高为90.9%,载药量为20.9%.在人工胃液pH值1.2及人工小肠液pH值6.8条件下具有很好的缓释作用且无突释现象.     

光谱法研究5-羟基喜树碱与牛血清白蛋白的相互作用

在模拟生理环境下用光谱法研究了5-羟基喜树碱(5-HCPT)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.结果表明,5-HCPT能够猝灭BSA的荧光并形成结合物,热力学参数显示5-HCPT与BSA结合的作用力主要是疏水作用.在298 K下,它们的结合常数Ka、结合位点数n分别为1.867×105 L·mol-1和1.220.以华法林和布洛芬作为探针研究了5-HCPT在BSA上的结合部位,数据说明其作用位点处于BSA的Site I位.同步荧光光谱和圆二色光谱数据体现5-HCPT改变了BSA的二级结构.     

10-羟基喜树碱单体制备方法的研究

随着中药开发研究的不断深入和有效成分研究的专一化，对天然产物提取物的分离纯化、纯度鉴定已成为一个重要课题．从中草药植物中提取出来的样品，由于其成分及各组分结构复杂，生物学特性各异，很难通过常规的化学方法进行分离纯化．在使用高效液相色谱法对一些天然产物及其提取物作定性、定量分析时，往往因一时难购得适量的标准物质而无法开展工作，     

羟基喜树碱半乳糖化十六酰壳聚糖胶束的制备及表征

制备羟基喜树碱半乳糖化十六酰壳聚糖胶束(HCPT-GHCM),并考察其包封情况.方法:以半乳糖化十六酰壳聚糖(GHC)为载体材料,采用乳化溶剂挥发法制备羟基喜树碱聚合物胶束,应用正交试验考察药物/载体比例、油/水相体积比、超声时间对载药聚合物胶束包封率的影响并进行优化.结果:超声时间对胶束的包封率影响最大,其次依次为药物/载体比例和油/水相体积比.最佳条件为:药物/载体比例0.2:1,油/水相体积比1:7,超声时间40min.制备的载药胶束拉径为250nm～300nm,zeta电位约为10mV,包封率为75.96%.结论:所制备的HCPT-GHCM包封率较高,粒径分布均匀,对羟基喜树碱有增溶效果.     

紫杉醇联合顺铂治疗晚期恶性肿瘤8例

我们自2002年3月～2002年12月应用紫杉醇(四川太极制药有限公司)联合顺铂治疗8例晚期恶性肿瘤患者取得了满意的疗效,现报告如下。 1.资料与方法 1.1一般资料 本组8例患者,年龄35—65岁,平均年龄57岁。其中男2例。女6例,均经临床、病理等证实为恶性肿瘤,按全国恶性肿瘤     

透析法制备载羟基喜树碱-聚乳酸纳米粒及其理化性质研究

采用直接透析法制备载羟基喜树碱-聚乳酸(HCPT-PLA)纳米粒并研究其理化性质、体外释放和细胞毒性.以HCPT-PLA纳米粒的载药率为评价标准,通过正交设计考察PLA浓度、HCPT与PLA的质量比和不同截留分子质量透析袋对其指标的影响.利用Malvern nano-zs粒度测定仪、XRD、DSC和激光共聚焦显微镜(CLSM)对HCPT-PLA纳米粒的理化性质进行表征.薄膜透析法考察体外释药特性;MTT试验检测细胞毒作用.在优化条件下制备的载药纳米粒为实心球形,平均粒径为226.8 nm,多分散系数为0.270,载药率为7.49%.HCPT是以晶体状态均匀分布于PLA纳米粒中.药物体外释药符合Higuchi方程Q=2.000 6X1/2-2.593 4,r=0.989 2.MTT试验显示HCPT-PLA纳米粒呈现明显细胞毒作用.透析法制备HCPT-PLA纳米粒,粒径小且分布均匀,具有较好的缓释特性;细胞毒性试验表明HCPT-PLA纳米粒具有较强的抑瘤作用且抑瘤效果优于HCPT.     

喜树内生真菌的分离及产10-羟基喜树碱菌的鉴定

从喜树（Camptotheca acuminate Decne）树皮中分离、纯化得到6株内生真菌,经摇瓶培养后,采用TLC法与HPLC法对其菌丝体提取物进行分析,结果表明其中1株内生真菌(XK002)产10-羟基喜树碱（10-hydroxycamptothecin,HCPT）,将此菌株命名为XK002,其10-羟基喜树碱产量为410 μg/L.对菌株XK002菌落、菌丝体和孢子的有无进行了研究,表明菌株XK002属于无孢菌群(Mycelia sterlia).     

紫杉醇联合奈达铂治疗晚期食管癌24例

目的:观察紫杉醇(PTX)联合奈达铂(NDP)治疗晚期食管癌的近期疗效和不良反应.方法:晚期食管鳞癌患者24例,紫杉醇135～150 mg/m2,静脉滴注,第1天;奈达铂80～100 mg/m2,加入生理盐水500ml中静滴2h,第2天,21天为1周期,连用2个周期后评价疗效.结果:全组24例均可评价疗效及不良反应,总有效率54.1%(13/24).完全缓解2例,部分缓解11例.中位缓解时间为4.6个月(3～7个月),中位生存期9.7个月(3.5～22个月),主要不良反应为骨髓抑制所致的血小板及白细胞减少,骨骼酸痛.消化道反应轻,未发现肝肾功能损害.结论:奈达铂联合紫杉醇治疗晚期食管癌近期疗效较高,毒副反应较轻,主要不良反应是骨髓抑制及骨骼酸痛.     

10-羟基喜树碱纳米微球的制备及表征

采用溶剂-反溶剂重结晶法进行了10-羟基喜树碱纳米化的研究。考察了以水为反溶剂,不同溶剂对10-羟基喜树碱纳米化的影响,以及不同溶剂反溶剂体积比和表面活性剂用量对其颗粒形貌和大小的影响。实验结果表明选择二甲基亚砜为溶剂,水为反溶剂的溶剂反溶剂效果最好,体系重结晶后形成的10-羟基喜树碱颗粒形貌为球形,粒径均一,约为95nm,添加聚乙烯吡咯烷酮增加了纳米化10-羟基喜树碱悬浮液的稳定性。XRD、FT-IR分析测试结果表明,纳米化颗粒为结晶型,结晶度比原料药低,但其化学结构和组分都与原料药相同;纳米化10-羟基喜树碱溶出速率远远大于原料药的溶出速率,在第30min时,纳米化10-羟基喜树碱的溶出累积量已近于100%,而原料药的溶出量仅为11.6%。     

羟基喜树碱10,20位双取代衍生物的合成及活性评价

根据喜树碱类药物的构效关系和前药设计理念,设计和合成了一系列新的10,20位双氨基甲酸酯取代的羟基喜树碱衍生物,且均为新化合物.体外细胞活性测试结果表明:这些化合物的细胞毒作用比喜树碱明显降低,可作为前药先导物进行更深入研究.     

紫杉醇注射液抗肿瘤作用的研究

实验结果表明，体外试验中紫杉醇注射液能明显杀伤卵巢ＡＯ１０／１７细胞及肺癌Ａ５４９细胞，在一定范围内有明显的量效关系，ＩＣ５０约为１１．７２μｇ／ｍＬ；体内试验中能明显抑制Ｓ１８０实体瘤的生长，能明显提高ＡＲＳ腹水瘤小鼠的生命延长率，研究结果证实紫杉醇注射液确有抗癌作用