脐静脉内皮细胞的提取与形态学观察

目的 获取胶原酶灌注法提取脐静脉内皮细胞的有效方法.探讨内皮细胞培养过程中生长因子的添加浓度,并对内皮细胞进行形态学观察及鉴定.方法 采用血球计数法对在不同时间和不同胶原酶浓度下提取的脐静脉内皮细胞进行计数.同时采用MTT法探讨了生长因子(Endothe-lia Cells Growth Supplement,ECGS)的浓度对脐静脉内皮细胞生长的作用,并用倒置显微镜和HE染色法观察了脐静脉内皮细胞的形态,Ⅷ因子免疫组化对获取的脐静脉内皮细胞进行鉴定.结果 当提取时间为10～30 min时,随着时间的增加,内皮细胞的提取数量增加;当胶原酶的浓度为0.1%～0.3%时,消化的脐静脉内皮细胞数量逐渐增加.ECGS的浓度为30μg/mL时,促进脐静脉内皮细胞的生长,种植4天后细胞进入平台期.脐静脉内皮细胞体外培养形态为"铺路石"状.Ⅷ因子免疫组化鉴定为阳性.结论 胶原酶灌注法是一种快速而有效的获取血管内皮细胞的方法,可以为组织工程血管内皮化提供充足的种子细胞.     

人脐静脉内皮细胞原代培养方法的建立

目的：探索并建立人脐静脉内皮细胞（删Ⅶc）体外稳定培养的方法。方法：以1％Ⅱ型胶原酶消化收集人脐静脉内皮细胞，用嘲加10％的胎牛血清进行培养，免疫细胞化学方法鉴定内皮细胞。结果：原代培养的内皮细胞镜下呈典型的铺路石或者鹅卵石样排列，3～4d时生长最快。5d左右融合；免疫细胞化学染色显示内皮细胞Ⅷ因子相关抗原表达阳性。结论：酶消化法获得的原代血管内皮细胞有较高的存活率，可以作为基础和临床研究的良好模型。     

人脐静脉内皮细胞培养液的选择

目的:筛选出人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代、传代最适培养液.方法:0.02%II型胶原酶灌注脐静脉消化15min获得细胞,用不同的培养液培养.24h后观察细胞贴壁状况,细胞计数法得到贴壁细胞数量;内皮细胞标志性蛋白vWF进行细胞鉴定.传代培养后,用MTT法比较不同培养液对HUVECs活力的影响.结果:用含ECGS、20%FBS的ECM组进行原代培养,可获得贴壁细胞数量最多的HUVECs,且与其他组间有显著差异;用含30ng·mL-1 VEGF165、10%FBS的M199进行传代培养,HUVECs活力较ECM组无明显差异.结论:HUVECs原代、传代培养分别选用优化后的培养液,既保证原代HUVECs的质量和数量,又使传代培养成本降低60.8%.     

“去细胞”羊膜基质与人脐静脉内皮细胞相容性的实验研究

测定“去细胞”羊膜基质（human acellular amniotic membrane，HAAM）与人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endotholica lcell，HUVEC）的相容性，为提高内皮细胞在血管支架上的粘附率提供新的途径。     

黄原胶分子形貌的原子力显微镜研究

通过溶胶凝胶的方法制备了黄原胶水溶液,并采用轻敲模式原子力显微镜(AFM)对不同浓度的黄原胶分子溶液的表面微观结构形态进行了观察.实验结果表明,轻敲模式下的AFM能够观测到黄原胶分子的微观结构,浓度为0.1g/L时分子类似于球状体的颗粒,以多聚体形式存在.浓度达到0.01g/L时能够形成稳定的网状结构,当浓度达到0.001g/L的情况下形成单个纤维分子.利用AFM截面软件对网状结构和单个纤维进行分析,发现了云母表面出现的黄原胶分子分别为双链和单链.本文中提出了黄原胶分子从网状结构到单个纤维形成过程的假设模型,很好地解释了实验观察结果,对以后的实验研究有很大意义.     

鱼腥草素钠对人脐静脉内皮细胞NO合成及NOS活力的影响

目的:研究鱼腥草素钠对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)NO合成及一氧化氮合酶(NOS)活力的影响.方法:采用15μg/ml LPS作用于HUVECs,共同孵育12h建立炎性损伤细胞模型.考察不同剂量鱼腥草素钠对各组HUVECs细胞存活率、培养上清液中LDH活力、NO含量、内皮型NOS(eNOS)及诱导型NOS(iNOS)表达的影响.结果:鱼腥草素钠可明显提高HUVECs细胞存活率,增加NO的分泌与释放,提高eNOS与降低iNOS活力,从而保护脂多糖诱导的HUVECs炎性损伤.结论:鱼腥草素钠对脂多糖诱导损伤的内皮细胞具有保护作用,其机制与其促进内皮细胞NO分泌与释放,增强eNOS活性和表达,改善血管内皮功能状态相关.     

结直肠癌细胞过表达tricellulin促进人脐静脉内皮细胞侵袭转移

三细胞间紧密连接蛋白tricellulin在结直肠癌组织中高表达,且与结直肠癌的不良预后相关。血管生成是肿瘤侵袭转移的重要因素之一,血管内皮细胞在血管新生过程中起决定作用。研究tricellulin与内皮细胞的关系对探索肿瘤侵袭转移机制具有重要意义。本研究通过western blot观察结直肠癌细胞株与正常结肠上皮细胞株中tricellulin的差异表达,通过基因工程技术调控结直肠癌细胞HCT116中tricellulin的表达,transwell小室检测过表达tricellulin前后结直肠癌细胞侵袭能力变化及其上清液对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）侵袭能力的影响,ELISA实验检测过表达tricellulin前后MMP2、MMP7的表达变化。结果显示：过表达tricellulin可增强HCT116细胞的侵袭能力,并且其上清液可增强HUVEC细胞的侵袭能力;过表达tricellulin可增加MMP2、MMP7的表达。说明人结直肠癌细胞过表达tricellulin可促进结直肠癌细胞侵袭迁移,并通过影响MMP2、MMP7的表达调控HUVEC细胞的侵袭转移。     

原子力显微镜实验教学设计

本文结合研究生实验课程教学的特点,就如何将原子力显微镜用于实验教学进行课程内容和教学方案设计进行了阐述,并应用于实验教学,取得了较好的效果,可以为同类实验课程的开设提供有益的参考。     

原子力显微镜形貌像成像质量的研究

基于针尖和样品之问的各种相互作用力,原子力显微镜可用于样品表面形貌、摩擦力等各种物理特性的研究。仪器参数的设定和干扰的排除是提高样品表面形貌像成像质量的关键。通过实验发现由原子力显微镜扫描得到的材料表面形貌像中常出现拖曳、条纹,影响了形貌像的成像质量。针对特定工艺条件下的纳米电子功能薄膜样品,着重研究了振幅参数（Amplitude reference）、积分增益（Integral gain）、比例增益（Proportiong ain）、衰减增益（Attenuation gain）和速度增益（Speed gain）对形貌像成像质量的影响。根据这些规律找出消除或减轻样品表面形貌像中出现拖曳、条纹的方法。     

中空介孔硅球对血管内皮细胞的细胞毒性

通过细胞增殖实验和乳酸脱氢酶释放实验,流式细胞术,透射电镜及电感耦合等离子体发射光谱仪检测等方法,证实HMSN在浓度超过62.5 μg/mL时,会对人脐静脉血管内皮细胞产生毒性,半抑制浓度约为150 μg/mL.高浓度下HMSN导致细胞增殖抑制和乳酸脱氢酶释放,使细胞周期阻滞在G1期,并最终诱导细胞坏死.同时发现HMS...     

聚丙烯酸纳米微凝胶的表征

利用原子力显微镜（AFM）对聚丙烯酸纳米微凝胶的形态、结构进行了表征,单体浓度、交 联剂与单体摩尔比对聚丙烯酸微凝胶的粒径都有一定影响,在实验条件下均可得到粒径为20 ～60nm的微凝胶。加入夺氢型光引发剂BP-4进行二次聚合,可以得到大分子纳米凝胶引发剂,其粒径比一次聚合所得微凝胶增大10～20nm;二次聚合时加入N-异丙基丙烯酰胺（NIPAM）可得到50～90nm、表面包覆PNIPAM的纳米凝胶。     

利用原子力显微镜表征页岩孔隙结构特征

页岩储层孔隙结构复杂,非均质性强,矿物组分多样,这些储层特性加大了页岩油的开采难度。为了更好地表征页岩孔隙结构,利用原子力显微镜(atomic force microscope, AFM)技术,结合Gwyddion软件对大港、吉木萨尔和松辽盆地页岩的孔隙结构以及表面粗糙度进行了表征。结合快速傅里叶变换(fast Fourier transform, FFT)分析页岩的非均质性,采用分水岭法识别孔隙分布特征,分析不同地区页岩储层的孔隙结构差异。原子力显微镜可以对页岩的表面形貌进行表征,通过平均粗糙度、均方粗糙度、表面偏度和峰度系数等参数对表面粗糙度进行评价,可以准确表征页岩纳米级的孔隙结构,包括孔隙数量、孔隙大小、孔隙面积、孔隙体积和孔隙度等。结果表明：大港和吉木萨尔页岩的表面高度较高,松辽盆地页岩表面高度较低,大港页岩非均质性较强,孔隙主要以微孔为主,吉木萨尔页岩和松辽盆地页岩非均质性较弱,中孔和宏孔数量较多,孔隙发育较好。     

红枣多糖微结构的原子力显微镜观测

应用原子力显微镜，对红枣多糖的微观形貌进行了观测研究，给出最佳观察方法．发现其单个分子链及其多个侧枝、聚合物链分子间互相缠绕，链间通过糖单元间不同的连接方式衍生出许多聚集体，大小在150-300nm范围内，从而直接证实了多糖大分子具有高度分枝的化学结构．同时发现红枣多糖两股糖链呈螺旋型紧密排列、多个糖链缠绕成股的情况，提示多糖在结构上可能存在类似蛋白质的自组装现象．     

Transmission electron microscopy and atomic force microscopy characterization of nickel deposition on bacterial cells

Recently bacterial cells have become attractive biological templates for the fabrication of metal nano- structures or nanomaterials due to their inherent small size, various standard geometrical shapes and abundant source. In this paper, nickel-coated bacterial cells (gram-negative bacteria of Escherichia coli) were fabricated via electroless chemical plating. Atomic force microscopy (AFM) and transmission electron microscopy (TEM) characterization results reveal evident morphological difference between bacterial cells before and after deposition with nickel. The bare cells with smooth surface presented transverse outspreading effect at mica surface. Great changes took place in surface roughness for those bacterial cells after metallization. A large number of nickel nanoparticles were observed to be equably distributed at bacterial surface after activation and subsequent metallization. Furthermore, ultra thin section analytic results validated the presence and uniformity of thin nickel coating at bacte- rial surface after metallization.     

利用原子力显微镜研究晶体缺陷

首次利用原子力显微镜研究晶体表面缺陷，给出了经腐蚀后的KTiOAsO4晶体表面铁电畴和位错蚀坑的清晰照片和定量信息。对实验结果和方法进行了讨论。指出这种实验方法具有放大倍数高，分辨率可达原子量级，可以给出物质表面结构的定量信息和立体图像等特点，并且具体探讨了利用原子力显微镜研究晶体表面缺陷的一些实验技术问题。     

Dynamic evolution of adhesion force between protein films studied by atomic force microscope

The approaching of two hydrophobic surfaces in water will lead to the combination of air bubbles adsorbed on the surfaces, thus additional long-range attraction is induced due to the bridging capillary force. Theoretical analysis shows that the process is a first-order phase transition, while no direct experiment supports the predication. The interaction between protein modified tip of atomic force microscope and protein film on mica was studied. The results demonstrate that the adhesion force between them increases to a stable value during the calibration process and the evolution clearly indicates the character of first-order transition.     

Investigation of stress corrosion-enhanced plastic deformation using atomic force microscope

Atomic force microscope (AFM) was used to study in situ the change in slip bands during stress corrosion of brass in the ammonia solution prior to initiation of stress corrosion crack. The result showed that additive slip bands appeared ahead of a loaded notch tip during stress corrosion prior to initiation of stress corrosion crack after the constant deflection specimen was precrept for 48 h and then polished. The average height and spacing of slip bands generated during stress corrosion were about three times less or larger, respectively, than those during loading in air.     

Elimination of bistability in constant-phase mode in atomic force microscopy

By presenting the phase properties of bistability in amplitude-modulation atomic force microscopy, we put forward a technique, the constant-phase mode, which may eliminate bistability. Using this approach, we keep the phase shift between driving and oscillation constant, slightly above -90°. In addition to the adjustment of the free amplitude, we add to amplitude-modulation atomic force microscopy another feedback so that the tip always oscillates in the high-amplitude state. A numerical simulation is carried out to demonstrate that the algorithm prevents bistability effectively.