壳聚糖-卵透明带DNA纳米微囊的制备及其体外表达

目的：发展壳聚糖-卵透明带口服DNA粘膜免疫避孕疫苗。方法：首先利用基因工程技术构建含卵透明带特异抗原pZP3α DNA的真核质粒表达载体pVAX1-pZP3α，然后用壳聚糖C390包被pVAX1-pZP3α重组质粒制备免疫微囊，测定免疫微囊对质粒DNA的包裹率，用原子力显微镜(AFM)观察壳聚糖-DNA微囊的形态结构，并体外转染HeLa细胞，用间接免疫荧光法(IIF)检测pZP3α的瞬时表达。结果：pZP30αDNA正确插入到载体pVAX1中并与壳聚糖C390形成纳米免疫微囊，对重组质粒pVAX1-pZP3a的包裹率达90％以上，AFM成像技术显示这些微囊的直径为100nm到300nm不等，平均为224.6nm，形状为球形、椭圆形等。体外转染HeLa细胞用IIF法检测到了抗原pZP3α在细胞内的表达。结论：壳聚糖-卵透明带口服DNA纳米免疫微囊制备成功，为进一步发展更安全、方便、有效的卵透明带DNA避孕疫苗打下了基础。     

纳米谷氨酸壳聚糖制备及其体外质粒转染研究

采用表面修饰方法制备出谷氨酸修饰的壳聚糖纳米基因载体。对样品进行红外分析、粒度分析、zeta电位分析、生物相容性、凝胶阻滞分析、DNA保护性试验、体外细胞转染研究。结果显示所制得的谷氨酸修饰的壳聚糖纳米颗粒平均粒径为170nm,其zeta电位为 4.7mV。红外分析显示谷氨酸已通过酰胺键结合在壳聚糖上。MTT实验结果显示纳米颗粒与细胞有良好的生物相容性。凝胶阻滞分析和DNA保护试验结果表明纳米载体可与DNA通过电性结合作用而结合,并可以有效保护DNA,防止核酸酶对其的降解作用。而体外细胞转染的结果表明,谷氨酸修饰的纳米粒能介导pEGFP-N1质粒转染HepG2细胞并在细胞中表达绿色荧光蛋白。因此,谷氨酸修饰的壳聚糖纳米颗粒可作为一种新型非病毒基因载体介导核酸类生物大分子进入细胞内。     

大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒载体pSUGV4的构建

作者用DNA重组技术,构建了大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒载体pSUGV4,它是以大肠杆菌(Es-cherichiacoli)质粒载体pUC18为骨架,与来自穿梭质粒表达载体pREP9含有革兰氏阳性菌复制起点(on     

新型可注射温敏水凝胶的制备及其释药性能

采用改性壳聚糖作为药物载体制备了一种可注射温敏水凝胶。将单甲氧基醚聚乙二醇2000（mPEG2000）接枝到壳聚糖(CS)上制备壳聚糖接枝产物（mPEG-g-CS）;将接枝产物在一定浓度下配制成凝胶溶液,测定其温敏性能;以温敏水凝胶为载体,以布洛芬为模型药物进行体外释放研究。结果表明,mPEG-g-CS水凝胶在体温37℃附近发生溶胶到凝胶的转变,具有良好的温敏性能,在一定的浓度范围内提高mPEG-g-CS浓度可降低相变温度,缩短胶凝时间。体外释药结果表明mPEG-g-CS水凝胶对模型药物具有缓释作用,有望用作可注射温敏型药物控释载体。     

O-硬脂酰化壳聚糖作为DNA的递送载体材料

以邻苯二甲酰基预先保护壳聚糖分子中-NH_2,以硬脂酰氯进行可控酯化,制备O-硬脂酰化壳聚糖.通过超声振荡与溶剂结合制备O-硬脂酰化壳聚糖/λDNA复合物,采用动态激光散射及原子力显微镜分析复合物的粒径分布及形态.凝胶电泳考察该载体与λDNA的结合能力.L929细胞培养对O-硬脂酰化壳聚糖进行细胞毒性评估.FT-IR和~1H NMR结果表明,可以成功制备不同酯化度的O-硬脂酰壳聚糖;O-硬脂酰化壳聚糖与λDNA结合可形成不规则球形复合物,平均粒径可达到86 nm,并且对DNase显示高稳定性.同时O-硬脂酰化壳聚糖具有促L929细胞增殖能力,安全性较高,可作为一种新型的非病毒型基因载体.     

质粒DNA纯化及内毒素去除策略研究进展

质粒DNA(plasmid DNA)是最常用的基因工程和基因疫苗载体,近年来在生物医学和环境科学等领域得到了广泛应用。质粒DNA纯化是分子生物学研究中常用的实验技术,纳米磁性粒子等固相载体技术和色谱技术优化了DNA纯化方法。对大肠杆菌质粒DNA常用纯化方法、内毒素去除策略以及自动化纯化设备进行综述,为质粒DNA的应用研究提供支持。     

基因克隆中常用的一些载体及其特征

以大肠杆菌菌株为受体的基因克隆载体通常是由质粒、噬菌体DNA及柯斯质粒DNA纯化和构建的,近年来由这三类DNA构建的大量载体已广泛地应用于基因重组、克隆及表达系统中,在理论研究和生产实践上取得了重大突破和可观的效益,本文就近年来的一些进展做一代表性的介绍。1 噬菌体载体1.1 λgt10由λDNA纯化出来, 这种载体在λ抑制基因(CI)内含有一个EcoRI位点,能接受长     

新型纳米复合材料作为非病毒基因载体的研究

为了制备理想的非病毒基因载体,合成了甲壳三糖-g-壳聚糖(TCS),并与钙基累托石(REC)插层复合制备纳米复合材料,采用X射线衍射和透射电镜方法对产物进行了表征,考察了其细胞相容性,将REC、TCS和纳米复合材料分别与质粒DNA复合形成复合物,并考察了其体外基因转染效果.结果表明:TCS、REC及纳米复合材料的细胞相容性良好,当N/P比为3时,TCS/DNA复合物粒径大小都在75 nm左右,REC加入后,其粒径不同程度地增大,最大达到191 nm;相对分子质量高的TCS所得DNA复合物较相对分子质量低的TCS所得DNA复合物稳定,而REC的加入降低了TCS/DNA复合物的稳定性;TCS/REC-DNA复合物能介入肝癌细胞中并表达荧光.说明该纳米复合材料可作为潜在的非病毒基因载体.     

壳聚糖与端羧基PLGA接枝共聚物的制备与表征

壳聚糖与聚乳酸是具有良好生物相容性的高分子材料,已被广泛应用于生物材料,特别是作为组织工程支架.采用三甲基硅烷基(vMs)改性壳聚糖,4-二甲氨基吡啶(DMAP)催化,制备壳聚糖与端羧基PLGA的接枝共聚物.傅立叶变换红外光谱、核磁共振氢谱证实了共聚物的形成.热分析测试表明,共聚物具有不同于聚乳酸的热特性.接触角测试表明共聚物具有较好的亲水性.壳聚糖与端羧基PLGA的接枝共聚物具有较壳聚糖及聚乳酸更为优良的性能,可作为组织工程支架材料.     

人参DNA限制片段在酵母菌中的转化

用YRp7质粒作载体,AH_(22)作受体株,将YRp7质粒和人参DNA限制片段构成的重组体转入AH_(22)中,并由大量培养的AH_(22)细胞中回收到YR_(p7)质粒和人参DNA限制片段,表明人参DNA限制片段可转入酵母菌中。     

PLA大分子单体与NVP接枝共聚物的初步研究

以辛酸亚锡为催化剂,甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)为共引发剂引发消旋-丙交酯(D,L-LA)开环聚合,制备了末端双键功能化的聚乳酸大分子单体(PLA-HEMA);在此基础上,考察了大分子单体与N-乙烯基吡咯烷酮(NVP)的溶液自由基共聚合反应,并初步研究了共聚单体摩尔比和PLA支链长度对合成的两亲性接枝共聚物性能的影响.结果表明,随大分子单体投料量和PLA支链长度增大,共聚物膜的拉伸强度和模量增大,而亲水性有所下降.     

生物降解材料--聚丙交酯合成的研究

以丙交脂为原料,在辛酸亚锡催化下通过开环聚合反应制得了聚左旋丙交脂（ＰＬＬＡ）。应用差示扫描热分析（ＤＳＣ）、红外光谱（ＩＲ）、核磁共振（＾１Ｈ－ＮＭＲ）、Ｘ－射线衍射和扫描电镜（ＳＥＭ）等手段分析了聚合物的结构与性能。并详细论述了丙交酯的纯度、催化剂用量、聚合温度和聚合时间对ＰＬＬＡ的相对分子质量的影响。     

壳聚糖膜的制备及膜性能

以相对分子质量分别为220000,350000,500000,680000道尔顿的壳聚糖以及脱乙酰度分别为90%,94%,95%,97%的680000道尔顿壳聚糖制备壳聚糖膜,研究各膜的结晶性、力学特性、溶胀性、纯水通量及截流率等性能.结果表明壳聚糖膜的各种特性大多与壳聚糖的相对分子质量相关,高分子量的壳聚糖膜力学特性、截流率较好;低相对分子质量的壳聚糖膜力学特性及截留率较差.在本研究范围内,相对分子质量对壳聚糖膜的影响相对于脱乙酰度对膜性质的影响要大.膜的结晶性和超微结构决定不同相对分子质量壳聚糖膜具有不同的性质.     

羧甲基壳聚糖制备新工艺研究

介绍了一种可有效提高羧甲基壳聚糖取代度的制备工艺, 并对试剂用量、反应温度、反应时间等工艺条件以及产品的分离纯化条件进行了优化。同时, 还测定了产品的理化性质。所得产品的取代度高达1.09,得率达到88.24%。     

吗啉二酮衍生物与丙交酯的共聚

以辛酸亚锡为催化剂，对含β-苄酯保护天冬氨酸的吗啉二酮单体（BMD）和丙交酯（LLA）的共聚反应进行了研究，并用NMR、GPC等分析方法对共聚物进行表征。结果表明，多官能团氨基酸被成功引入到聚乳酸主链中，且引入量与投料量基本一致。     

壳聚糖/累托石纳米复合材料的结构与性能

采用溶液插层法制备了不同累托石含量的壳聚糖/累托石纳米复合材料,研究了累托石含量、层间距对复合材料性能的影响及不同累托石含量的复合材料的热稳定性和抗菌性能.结果表明:壳聚糖分子链插层进入了累托石层间,累托石均匀地分布在壳聚糖基体中;纳米复合材料的性能与累托石的含量和层间距密切相关,当壳聚糖与累托石的质量比为12∶1时插层效果最好;壳聚糖/累托石纳米复合材料的抗菌能力比单一壳聚糖优异,尤其是对革兰氏阳性菌,其抑菌的最小浓度为单一壳聚糖的1/4～1/2,抑菌时间是单一壳聚糖的3～5倍;复合材料对革兰氏阳性菌的抑制作用比对革兰氏阴性菌的强,且随着累托石含量的增加及层间距的增大,抗菌性能越来越强;纳米复合材料的热稳定性优于壳聚糖.     

壳聚糖/酸化蛭石纳米复合材料的制备与表征

以可生物降解材料壳聚糖为基体,制备了一系列不同比例的壳聚糖/酸化蛭石(HVMT)纳米复合材料.WAXD和TEM试验结果表明HVMT可以有效剥离并分散在壳聚糖基体中形成剥离型纳米复合材料.与壳聚糖相比,纳米复合材料的热性能随着酸化蛭石含量的增加有明显提高,在蛭石含量仅为2%的情况下,材料的T<,-10%>增加了141℃.     

Effect of molecular weight and structure on antitumor activity of oxidized chitosan

Various low molecular weight chitosans were prepared by oxidative degradation with H₂O₂, and characterized by IR,¹³C-NMR and gel permeation chromatography. Their carboxylic contents increased with decrease in molecular weight (M _w ). The antitumor test of the samples against sarcoma 180 tumors suggested that the water-soluble chitosan with higherM _w have higher inhibitory ratioin vivo. The introduction of carboxylic group is advantage to water-solubility of chitosan, but more acidic groups might decrease the function of amino groups of chitosan against sarcoma 180 tumor. Foundation item: Supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 29977014) Biography: Qin Cai-qin (1965-), male, Ph. D candidate, Associate professor, research direction: biopolymers.     

壳聚糖衍生物的制备及其对Cr(Ⅵ)离子的吸附

采用化学法对壳聚糖进行改性,分别制备了交联壳聚糖、丁烷基壳聚糖和O-羧甲基壳聚糖,用γ射线辐照降解制备了低摩尔质量的壳聚糖,研究了它们对废水中较难处理的污染物Cr(Ⅵ)的吸附情况,壳聚糖对Cr(Ⅵ)吸附的最佳pH值范围为5.0～6.0,最佳吸附时间大约为2h,每克壳聚糖可吸附约3mg Cr(Ⅵ),吸附率最大可达90%以上。交联壳聚糖、丁烷基壳聚糖和低摩尔质量壳聚糖对Cr(Ⅵ)的吸附效果都比壳聚糖本身要好得多：交联壳聚糖吸附1h即可达到吸附饱和;丁烷基壳聚糖吸附Cr(Ⅵ)的最佳pH值出现在5.0附近,更能适应酸性环境;辐照降解后,壳聚糖在(0.4～0.8)×10⁵g/mol的范围内存在一个吸附最大值。     

Effects of chitosan inhibitor on the electrochemical corrosion behavior of 2205 duplex stainless steel

The effects of chitosan inhibitor on the corrosion behavior of 2205 duplex stainless steel were studied by electrochemical measurements, immersion tests, and stereology microscopy. The influences of immersion time, temperature, and chitosan concentration on the corrosion inhibition performance of chitosan were investigated. The optimum parameters of water-soluble chitosan on the corrosion inhibition performance of 2205 duplex stainless steel were also determined. The water-soluble chitosan showed excellent corrosion inhibition performance on the 2205 duplex stainless steel. Polarization curves demonstrated that chitosan acted as a mixed-type inhibitor. When the stainless steel specimen was immersed in the 0.2 g/L chitosan solution for 4 h, a dense and uniform adsorption film covered the sample surface and the inhibition efficiency (IE) reached its maximum value. Moreover, temperature was found to strongly influence the corrosion inhibition of chitosan; the inhibition efficiency gradually decreased with increasing temperature. The 2205 duplex stainless steel specimen immersed in 0.4 g/L water-soluble chitosan at 30℃ displayed the best corrosion inhibition among the investigated specimens. Moreover, chitosan decreased the corrosion rate of the 2205 duplex stainless steel in an FeCl₃ solution.