高等植物的第三类杂交——染色体杂交

本文综述了高等植物的三种类型的杂交,并着重介绍了第三类杂交--染色体杂交的基本原理、技术路线和笔者得到的一些成果,及其与花粉传粉杂交、原生质体融合杂交和基因工程的区别与联系.     

青鲫(♀)×兴国红鲤(♂)杂交F1代染色体数目及组型分析

采用肾细胞染色体直接制片法及Levan提出的标准,对青鲫(♀)×兴国红鲤(♂)杂交F1代染色体数目及组型分析表明:此杂交F1代鱼的肾细胞染色体数目为150条.染色体组型按着丝点位置可分为四组,其中中部着丝粒染色体9条,亚中部着丝粒染色体15条,亚端部着丝粒染色体78条,端部着丝粒染色体48条.每个染色体小组均由3条同源染色体组成,表明此杂交鱼为三倍体,核型公式为3n=9m 15sm 78st 48t.臂数NF=174.     

应用基因组原位杂交鉴定杂交后代中的簇毛麦染色体

用地高辛（Digoxigenin-11-dTup)标记的簇毛麦染色体组DNA为探针，以普通小麦“中国春”总DNA作封阻进行基因组荧光原位杂交，对小麦和簇毛麦杂交和回交后代进行检测。结果显示，在杂交后代的28条染色体中有7条簇毛麦染色体，在发生部分染色体加倍的回交代后鉴定出含7条簇毛麦染色体重的易位系。GISH的准确鉴定以及易位系的获得为向小麦导入簇志麦的有用基因提供了宝贵材料。     

45S rDNA在多种植物中期染色体上的定位

应用荧光原位杂交技术首次确定了日本小檗（Berberis tkunbergii DC）、车前（Plantago major L．）、野芹菜（Sanicula lamelligera Hance）、荔枝（Litchi chinensis Sonn．）、械树（Acer buergerianum Miq．）、天目琼花（Viburnum sargentii Koehne．）、丹参（Salvia miltorrhiza Bunge．）、榆树（Ulmus pumila L．）中45S rDNA在中期染色体上的位置．根据rDNA的位点数和位置的变化,分为四种类型：①在日本小檗、车前和野芹菜中,荧光信号正好位于随体染色体的次缢痕或端部;②荔枝和械树,分别有1对和3对染色体具随体,但荧光原位杂交却检测到3对和5对染色体上具有杂交信号;③天日琼花,具有4对随体染色体,但仅住其中一对随体上显示了杂交信号;④在丹参和榆树中,有的杂交信号位于着丝粒部位或长臂的末端,杂交信号的数目成奇数．黄瓜（Cucumis sativus L．）的染色体45S rDNA信号正好位于6条染色体的着丝粒部位,这与Dal-Hoe和Hoshi等人的结果是一致的．上述结果表明：45S rDNA可以作为染色体的一个识别指标,对识别染色体的个体性具有一定的参考价值．另外还对45S rDNA位点分布的多态性进行了讨论．     

利用小麦5B效应引入外源基因的研究：2.易位系1032…

本文对易位系１０３２进行了细胞遗传学分析，通过Ｃ分染显带分析，鉴别出易位染色体为２Ｂ染色体。易位系１０３２与易位系１００４的不同组合的杂交结果也证明了两个易位系中的染色体易位均发生在同一染色体上，但易位系１０３２的易位位置是在２Ｂ染色体的长臂末端。．     

青鲫（♀）×兴国红鲤（♂）杂交F1代染色体数目及组型分析

采用肾细胞染色体直接制片法及Levan提出的标准，对青鲫（♀）×兴国红鲤（♂）杂交F1代染色体数目及组型分析表明：此杂交F1代鱼的肾细胞染色体数目为150条．染色体组型按着丝点位置可分为四组，其中中部着丝粒染色体9条，亚中部着丝粒染色体15条，亚端部着丝粒染色体78条，端部着丝粒染色体48条．每个染色体小组均由3条同源染色体组成，表明此杂交鱼为三倍体，核型公式为3n=9m＋15sm＋78st＋48t．臂数NF=174．     

供水稻原位杂交的染色体标本制备方法的研究

为了制备出供水稻染色体位杂交用的染色体标要，以水稻根尖为材料，对８－羟基喹啉的预处理时间、纤维素酶和果胶酶的酶解时间以及后低渗时间进行了研究。并将传统的去壁低渗火焰干燥法进行了改进。结果表明：２ｍｍｏｌ／Ｌ ８－羟基喹啉预处理１ｈ，５５纤维素酶＋５％果胶酶在３０℃条件下处理５ｈ，后低渗３０ｍｉｎ。可获得数量较多，形态较好的供原位杂交用的有丝分裂早中期染色体制片。     

杂交鲍染色体GISH的优化

基因组荧光原位杂交(GISH)是分析远缘杂交染色体组结构的有力工具。为了提高杂交鲍GISH的信号强度,以皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)和杂色鲍(H.diversicolor)杂交子代为研究对象,研究了杂交缓冲液中探针质量浓度、封阻DNA质量浓度,以及去离子甲酰胺、硫酸葡聚糖或聚乙二醇6000的含量对GISH信号强度的影响。结果表明,杂交缓冲液中,探针质量浓度应大于6.25 ng/μL,封阻DNA(鲑精DNA)的适宜质量浓度约为探针的10倍,去离子甲酰胺的适宜体积分数约为30%,硫酸葡聚糖的适宜体积分数为12.5%～17.5%。此外,用7.5%的聚乙二醇6000替代硫酸葡聚糖可以提高杂交信号,但存在信号噪点多等问题。     

大黄鱼与黄姑鱼杂交F_1及其双亲的核型分析

研究了大黄鱼与黄姑鱼正反交F1原肠早期胚胎细胞及其亲本头肾细胞的染色体核型,为深入剖析大黄鱼与黄姑鱼杂交后代的基因组构成提供了细胞遗传学证据.大黄鱼与黄姑鱼染色体组均含有48条端部着丝粒染色体,染色体组型公式均为2n=48 t,染色体臂数均为NF=48,组内染色体长度分布连续.两亲本物种间核型很相似,未找到鉴别两物种的细胞遗传标志.正反交F1原肠期胚胎细胞的染色体众数也均为48,均可较好地配为24对.结合前期AFLP分析结果可以推断,正反交胚胎细胞均同时含有一个大黄鱼染色体组和一个黄姑鱼染色体组.此外,杂交F1中的非整倍体比例与两亲本没有明显区别,初步表明杂交胚胎细胞未发生明显的染色体丢失.在黄姑鱼♀与大黄鱼♂杂交F1中出现4对非t-染色体,原因尚待查明.     

激素对小麦和小黑素杂交后代花药培养和染色体加倍的影响

用不同培养基对小麦和小黑麦杂交后代进行花培养,发现含２．４－Ｄ和６ＢＡ（Ｖ（２．４－Ｄ）：Ｖ（６ＢＡ）＝２：１）的培养基上形成的愈伤组织,其再分化苗的绿苗率和染色体加倍率远高于其他培养在。