EWS抑制TRIF和IKKε激活的IRF3的转录活性

为了研究EWS蛋白质对IRF3转录活性的影响,以及EWS蛋白对IRF3信号通路的调节,在真核细胞293T中表达Flag-EWS蛋白质,通过双荧光报告系统研究EWS对TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性的影响。结果显示Flag-EWS蛋白质能够在真核细胞293T中正确表达,过表达EWS能够抑制TRIF和IKKε激活的IRF3转录活性,而且能够直接抑制IRF3的转录活性。     

CUEDC1抑制TNFα激活的AP-1的转录活性

为了研究CUEDC1蛋白质是否参与了AP-1信号通路,首先在真核细胞中成功表达了Flag-CUEDC1蛋白质,通过双荧光报告系统,研究了CUEDC1对AP-1信号通路的影响.结果显示,过表达CUEDC1能够显著抑制TNFα激活的AP-1转录活性,而对IFNα激活STAT3的转录活性没有影响,并且CUEDC1抑制AP-1转录活性影响是发生在TRAF2分子或者上游水平.     

CUEDC1抑制TNFalpha激活的AP-1的转录活性

为了研究CUEDC1蛋白质是否参与了AP—1信号通路,首先在真核细胞中成功表达了Flag—CUEDC1蛋白质,通过双荧光报告系统,研究了CUEDC1对AP—1信号通路的影响。结果显示,过表达CUEDC1能够显著抑制TNFα激活的AP—1转录活性,而对IFNα激活STAT3的转录活性没有影响,并且CUEDC1抑制AP—1转录活性影响是发生在TRAF2分子或者上游水平。     

磷酸酶PPM1G与IKKi相互作用下调IRF的转录活性

为了研究磷酸酶PPM1G对IRF信号通路的影响,首先在真核细胞中成功表达了HA-PPM1G蛋白质。应用双荧光报告系统,研究了PPM1G对IRF信号通路的影响。结果显示,过表达PPM1G能够显著抑制IKKi激活的IRF转录活性。进一步免疫共沉淀的实验结果表明,PPM1G和IKKi在细胞内存在相互作用。     

MKP2和MKP3抑制TGF-beta /Smad转录活性

为了研究MKP2和MKP3是否影响TGF-beta/Smad信号通路的转录活性。在真核细胞转染Flag-MKP2和Flag-MKP3质粒,Western blot结果显示Flag-MKP2和Flag-MKP3质粒能正确表达。在HepG2细胞系、HACAT细胞系和293T细胞系中,通过双荧光报告系统测定过表达MKP2和MKP3对TGF-beta/Smad转录活性的影响。结果显示过表达MKP2和MKP3能够分别抑制TGF-beta的三种报告基因质粒的表达。MKP2和MKP3能够抑制TGF-beta/Smad的转录活性。     

不同亚型人SMYD3启动子转录活性比较

利用PCR方法克隆SMYD3两个亚型的启动子区域,并构建其荧光素酶报告质粒.转染COS-7细胞后,利用荧光素酶报告分析技术,对二者启动子的转录活性进行了检测和比较.结果显示:SMYD3亚型1启动子的转录活性要显著高于亚型2启动子,生物信息学分析提示其原因可能与含有转录因子E2F-1结合位点的串联重复序列有关.     

HMG单一成分对转录活性的影响

使用北京鸭嗜多染红细胞核和DNA的转录体系测定了HMG单一成分和组合成分对转录活性的影响。结果表明,HMG_1+HMG_(2a)+HMG_(2b)抑制核转录的活性,而单一的HMG_1或HMG_(2a)或HMG_(2b)没有这种抑制作用。在DNA转录体系中,DNA的转录活性可被单一的HMG_(2a)或HMG_(2b)所抑制。HMG_(14)或HMG_(17)对核和DNA的转录都没有明显的影响,但是在核转录体系中,HMG_(14)+HMG_(17)在加样量为20μg时有明显的促进作用。     

CUEDC1氨基酸保守性分析及抑制TGF-beta /Smad转录活性

为了分析CUEDC1氨基酸保守性和研究CUEDC1蛋白质影响TGF-beta/SMAD信号通路的转录活性,用软件分析比较CUEDC1的氨基酸序列和通过双荧光报告系统测定TGF-beta/SMAD转录活性。结果显示cue结构域在人、小鼠和大鼠之间相似性为100%和过表达CUEDC1能够抑制TGF-beta/SMAD转录活性。     

TIAR通过在DNA和RNA之间的穿梭机制调控DNA的转录活性

应用体外转录模型,即通过构建T7 及T7 TIAR 的碱基序列及部分退火的双链模型,合成了一段ODN,其包含单链的TIAR结合位点和1个T7的起始位点.通过进行RNA转录分析,TIAR的结合和替代实验,证明了TIAR可与富含T的单链DNA结合,并且TIAR与DNA的结合可因DNA的转录活性而解离.这一发现为TIAR可在DNA与RNA之间穿梭提供了证据.     

睾酮对大鼠再生肝细胞转录活性的影响

以血清睾酮(testosterone,T)和核仁组织区相关嗜银蛋白(argyrophil nucleolar organiting regions,AgNORs)为指标,探讨去睾丸大鼠部分肝切除(partial hepatectomy,PH)后,外源注射睾酮对其血清睾酮水平及再生肝细胞DNA转录活性的影响.结果显示:外源睾酮可使大鼠血清睾酮水平显著升高,呈明显剂量-时间效应.除低剂量睾酮(0.5mg/kg体重)处理外,其它各组再生肝细胞AgNORs颗粒数在PH后24h均明显下降,PH后24～72h又持续升高.PH后各时期,低剂量睾酮使AgNORs数目显著高于芝麻油组;而中、高剂量睾酮(2.5mg/kg和5mg/kg体重)使AgNORs数目减少,并呈现明显剂量-效应关系.结果表明:低剂量睾酮对肝细胞的转录活性起促进作用;中、高剂量则起抑制作用,且随着睾酮浓度升高,抑制作用增强.     

人NRAGE基因启动子转录活性的初步研究

利用生物信息学软件搜寻NRAGE启动子区域的转录因子结合位点,并根据这些位点利用PCR技术克隆NRAGE启动子不同区域的缺失突变体,分别插入Luciferase报告载体pG13-Basic载体中,构成8种缺失突变体的报告基因表达载体.通过双荧光素酶体系检测在HEK-293细胞中NRAGE启动子不同区域的转录活性,从而确...     

CUEDC1的克隆表达及其对PRB和ERα转录活性的影响

为了研究CUE Domain Containing 1 (CUEDC1)蛋白质功能,构建了pcDNA3.0-Flag-CUEDC1表达载体,并且成功表达Flag-CUEDC1蛋白质.通过双荧光报告系统,对比CUEDC1与CUEDC2对PRB和ERα转录活性的影响.其结果显示,CUEDC2能够抑制PRB和ERα转录活性,而CUEDC1对PRB和ERα转录活性的影响不显著.     

真核细胞基因转录抑制机制的研究

真核细胞的基因转录抑制受多方面的调节,目前的研究已经揭示了转录因子产生转录抑制的分子机制,蛋白之间的相互作用产生的转录抑制等几方面的作用机制.研究了全酶与基因的转录、染色质与真核基因转录抑制、干扰激活因子活性等,在真核细胞基因转录抑制中起的作用.     

模板甲基化水平对鼠肝RNA聚合酶体外转录活性的影响

利用３Ｈ－ＵＴＰ同位素参入法，研究了大鼠肝细胞ＲＮＡ聚合酶在核内外的转录活性，结果表明：在细胞核内的转录活性明显低于在无核抽提物中的转录活性。利用自身的ＤＮＡ模板，优于利用外加的ＤＮＡ模板。并比较了不同ＤＮＡ甲基化水平的模板对ＲＮＡ聚合酶体外转录活性的影响，发现模板的甲基化水平与其体外转录水平呈反相关。     

PIAS3与转录调控的研究进展

PIAS3（ protein inhibitor of activated STAT3）是PIAS蛋白家族中的一员,此蛋白家族最初是作为活化的STAT的转录活性抑制蛋白被发现的.PIAS3具有特殊的功能和结构域,因此影响了许多转录因子的活性.随着对PIAS3研究的增多,更多的PIAS3对转录因子的作用机制被发现.现对PIAS3的转录调控方面的研究进展做一综述.     

水稻转录因子WRKY39的克隆表达及DNA结合活性分析

根据水稻转录因子WRKY39的cDNA基因序列设计引物,克隆水稻日本晴(Oryza sativa L.)WRKY类转录因子的cDNA基因并进行原核表达,通过凝胶阻滞实验分析融合蛋白与DNA的结合活性。结果克隆了1个新的WRKY基因OsWRKY39,其编码的蛋白OsWRKY39能够与顺式元件W盒特异结合,Os-WRKY39具有转录因子的最基本特征。     

ECHS1抑制IFNa诱导的STAT3转录活性

烯脂酰辅酶A水解酶 (Enoyl-CoA Hydratase short chain 1,ECHS1), 是一种脂肪酸代谢过程中的关键酶,关于其功能研究甚少。本研究采用双荧光报告系统和Western blot等方法,分别干涉和过表达ECHS1,分析ECHS1对IFNa刺激下STAT3转录活性的影响,结果显示ECHS1能够显著抑制IFNa诱导的STST3的转录活性,提示该基因可能参与STAT3相关功能的调控。     

14种高原植物抑制植物病原菌活性的初步研究

采用生长速率法检测了11科14种高原植物的乙醇提取物对6种植物病原真茵的抑制活性.实验结果显示,在样品的作用浓度为1 mg/mL时,香青、铁线莲、露蕊乌头的乙醇提取物对苹果腐烂病原茵有明显的抑制作用,抑制率分别为77.10%、68.14%、67.53%;香青、露蕊乌头、金露梅、木鳖子对苹果炭疽病原茵也有值得关注的抑制作...     

东亚三角涡虫Dj14-3-3ε原核表达及鉴定

从东亚三角涡虫cDNA文库中挑选出克隆M455,经BLASTP确定隶属于14-3-3ε基因家族,具有14-3-3蛋白的保守结构域命名为Dj14-3-3ε基因.该基因含有完整的最大开放阅读框(ORF),编码蛋白约10.7 kDa.构建pET28b-Dj14-3-3ε原核表达载体,通过IPTG诱导在大肠杆菌中表达,western blot鉴定,表明原核表达载体构建成功,并在大肠杆菌中正常表达.