钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)4个跨膜Ser/Thr蛋白激酶基因对不同温度诱导的响应子

Ser/Thr蛋白激酶(STK)是生物体信号转导系统的重要组成部分.实验以钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)为材料,经过本地BLAST搜索、SMART结构域预测排除假阳性结果得到钝顶螺旋藻Ser/Thr蛋白激酶的基因序列.测定不同温度下的生长曲线确定该藻的最适生长温度为30℃,经低温15,20,25℃和高温37,43℃分别诱导60 min,利用半定量RT-PCR方法,分析4个具有跨膜结构域的Ser/Thr蛋白激酶基因在正常生长温度下和经低温、高温诱导后表达量的变化情况.发现stj1850在所有温度下都不表达;stk1993,stk2111的表达量在不同温度下没有显著差异;stk2103在低温诱导后的表达量降低,高温诱导后的表达量升高,提示该基因的表达可能参与了钝顶螺旋藻对温度的适应.     

温度和pH值对螺旋藻AMY活性的影响

采用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法对内蒙古毛乌素沙地碱湖的钝顶螺旋藻S1与国外引进的钝顶螺旋藻S2和极大螺旋藻S3的淀粉酶（AMY）活性,及温度和pH值对其影响进行了初步的比较研究。结果表明：S1、S2和S3的AMY活性在25℃、pH5．6时分别为71．7U／g FW、44．1U／g FW和54．6U／gFW;最适温度均为40℃;最适值均为pH5．6。我国特有的S1AMY对温度和pH适应范围宽,且在低温、高温、强酸和强碱下的活性比引进种的高。     

低温下两个品系的钝顶螺旋藻质膜蛋白的变化

采用考马斯亮蓝G-250法和SDS-PAGE电泳对经低温处理和低温锻炼的内蒙古鄂尔多斯沙区碱湖的钝顶螺旋藻（S1）和引进非洲Chad湖的钝顶螺旋藻（S2）的质膜蛋白含量和电泳图谱分析表明：两种藻质膜蛋白对低温反应的规律相似,但抗寒性较强的内蒙古鄂尔多斯沙区碱湖的钝顶螺旋藻（S1）质膜蛋白含量比抗寒性较弱的引进非洲Chad湖的钝顶螺旋藻（S2）的高,较低的低温下质膜蛋白降低幅度S1〈S2;直接处理时,抗寒性较强的内蒙古鄂尔多斯沙区碱湖的钝顶螺旋藻（S1）对5℃反应更强。低温锻炼可适当增加螺旋藻的质膜蛋白含量。较低的低温下有分子量较小的新质膜蛋白的合成和分子量较大的旧质膜蛋白的解聚或解体。     

鄂尔多斯沙区碱湖钝顶螺旋藻Spirulina platensis的低温适应特性

采用比色法、大幅度降温法和冰冻法,对鄂尔多斯沙区碱湖的钝顶螺旋藻低温适应性进行了研究。结果表明:在69.3μmol·m~(-2)·s~(-1)连续光照下(7 d),该藻生长的最适温度的最低点约为24℃;温度从35℃骤降到13℃时其能够缓慢生长;在-18％冰冻后依然可以复生;其对低温的适应特性是引进品系所不具备的。研究可为我国螺旋藻产业所需的低温型藻种提供理论依据。     

Se(Ⅳ)对钝顶和极大螺旋藻生长的影响

采用藻类生长动力学函数和藻类测试化学品毒性的标准方法,分别研究了高、低质量浓度Se（Ⅳ）对钝顶（S．platensis）和极大（S．maxima）螺旋藻生长的影响,结果表明：低质量浓度组中,Se（Ⅳ）的质量浓度低于16mg／L时对钝顶螺旋藻前4d的生长影响差异无显著性意义,但当质量浓度为32mg／L时出现明显的抑制作用;而低质量浓度范围内,即质量浓度低于32mg／L的Se（Ⅳ）在前4d对极大螺旋藻的生长的影响不明显．高质量浓度组中,当质量浓度高于560mg／L时,钝顶螺旋藻的生长被完全抑制;硒对极大螺旋藻的最低完全抑制质量浓度为600mg/L.     

钝顶螺旋藻藻胆蛋白的分离纯化及特性研究

钝顶螺旋藻藻胆蛋白的分离纯化及特性研究杜林方，付华龙（生物系）１材料与方法１．１实验材料钝顶螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａｐｌａｔｅｎｓｉｓ）由武汉水生所购买，生长于修改的Ｚｏｒｒｏｕｋ氏培养基中￣［４］，２～１０Ｌ，３０℃培养。１．２藻胆蛋白粗提物的制...     

大肠杆菌中表达外源重组蛋白的研究

通过聚合酶链式反应（PCR）,扩增出交链孢菌激活蛋白辅助蛋白基因p42A．并将该基因按正确阅读框克隆到表达载体pGEx—KG中谷胱甘肽转移酶（GST）基因的下游。重组质粒转化大肠杆菌BL21,通过建立重组菌生长时间与OD600值的关系,及对菌液密度、诱导剂浓度、诱导时间和温度等条件的摸索,根据SDS—PAGE电泳检测结果判断融合蛋白的最佳表达条件。实验结果表明,最适诱导时期为重组菌生长对数中期;IPTG的最佳浓度为1．0mmol／L：37℃下诱导培养4h时产物表达量最高。超声波破碎菌体细胞,离心及电泳结果表明,表达产物为可溶性蛋白。     

盐泽螺旋藻的生长及放氢的实验研究

对影响盐泽螺旋藻生长的因素以及放氢情况进行了实验研究．结果表明盐泽螺旋藻也具有放氢的现象,而且相对钝顶螺旋藻而言放氢量较大;同时也给出了盐泽螺旋藻生长的合适条件．     

几种水体污染因子对钝顶螺旋藻生长的影响

为确定不同污染因子对钝顶螺旋藻（Spirulina platensis）生长的影响,对五种主要水体污染因子Hg^2 、Cr^6 、Pb^2 、酸雨、苯酚各取5个质量浓度梯度处理钝顶螺旋藻,使其在人工控制的环境下生长,每天测定培养液的光密度OD560,溶氧量DO和pH值以分析其生长情况,结果表明：钝顶螺旋藻对Hg^2 最敏感,对Cr^6 ,Pb^2 和苯酚的敏感性稍低,对酸性环境有较强的抵抗力。     

不同碳源培养螺旋藻的生长及其藻蓝蛋白含量

研究葡萄糖、乙酸盐和碳酸盐等作为不同碳源对钝顶螺旋藻的混合培养生长的影响。与无机碳源对比，葡萄糖和乙酸盐能较好地改善钝顶螺旋藻的生长，葡萄糖使之获得最大的生长速率（P＝0．62／o和产生最多的生物量（干重为2.637g/1）；这三种碳源对藻蓝蛋白含量的影响基本一致，约为13010mg／I干重细胞。研究发现，藻蓝蛋白的含量主要受光强度影响。     

不同来源钝顶螺旋藻藻蓝蛋白特性比较

 为更大程度地开发利用鄂尔多斯螺旋藻藻蓝蛋白资源,获得螺旋藻藻蓝蛋白提取及保存过程中的最佳参数,对2 藻种藻蓝蛋白硫酸铵盐析饱和度、热稳定性、酸碱稳定性进行了比较。结果显示,在硫酸铵饱和度达到40%时,2 藻种藻蓝蛋白纯度和藻蓝蛋白提取率均达到最高,且鄂尔多斯钝顶螺旋藻藻蓝蛋白纯度为引进钝顶螺旋藻的1.67 倍,两者的提取率持平。鄂尔多斯螺旋藻藻蓝蛋白对温度较引进种敏感,除25℃时相差不大外,35、45、55℃等条件下均表现出相比引进种更大的纯度降低率,多数为后者的两倍,但即使鄂尔多斯钝顶螺旋藻纯度降低率较大,降低后的纯度仍然比引进种最高纯度大,显示出鄂尔多斯钝顶螺旋藻在藻蓝蛋白上的优势。在工艺及环境条件允许的情况下,提取鄂尔多斯钝顶螺旋藻藻蓝蛋白时,尽量保持在较低温度下操作,如果兼顾提取率和纯度,宜选择55℃以内操作。2 藻种藻蓝蛋白酸碱稳定性上表现出较一致的反应,pH 值5~6 可以保持藻蓝蛋白的最大纯度。     

钝顶螺旋藻磁性生物吸附剂的制备及对铬(Ⅵ)的吸附性能

以钝顶螺旋藻和磁性纳米粒子四氧化三铁为材料,采用海藻酸钙进行包埋制备出钝顶螺旋藻磁性生物吸附剂,从pH、温度、吸附动力学等方面研究钝顶螺旋藻磁性生物吸附剂对Cr(Ⅵ)的吸附性能。研究结果表明:当pH为1.5,温度为40℃时,吸附效果最好,时间在120 min时吸附容量达到饱和吸附量的96.5%;随Cr(Ⅵ)离子初始浓度的增加,吸附量增加,吸附效率减小。且与海藻酸钙吸附行为显著不同,说明主要是由钝顶螺旋藻对Cr(Ⅵ)离子吸附作用;钝顶螺旋藻磁性生物吸附剂对Cr(Ⅵ)的吸附过程可用Langmuir和Freundlich等温模型进行描述;同时,磁性生物吸附剂具有较强的磁性,在加有外界磁场的情况下,能快速地实现固液分离和回收,可简化重金属离子吸附的后续处理。     

马铃薯低温启动子CIP的克隆及其功能鉴定

合适的启动子有利于基因的高效表达．本研究从鄂马铃薯-3中克隆了低温诱导的启动子（CIP）,并调控转化酶抑制子基因转化马铃薯植株,以抑制马铃薯块茎发生的“低温糖化”．实验结果表明,克隆的CIP与报道的低温诱导的启动子序列同源性达98．9％,含有启动子的典型结构．构建CIP与转化酶抑制子（St-VIF）基因的载体成功转化马铃薯并获得转基因株系．转基因株系收获块茎在4℃和20℃贮藏lm,Nothern杂交显示St-VIF基因在4℃大量表达,检测转化酶活性表明,与对照比较液泡转化酶活性大大降低,说明通过低温诱导CIP调控St-VIF基因的表达能够抑制转化酶的活性,从而降低还原糖的积累．     

钝顶螺旋藻去废水中氨氮使用液培养条件研究

研究了钝顶螺旋藻母液与培养液温间差对钝顶螺旋藻使用液培养的影响、钝顶螺旋藻母液取量与培养时间的关系、水质对使用液培养的影响。实验结果表明：温间差以控制在5—6℃为宜,母液与培养液比以1／10为最佳,用蒸馏水或膜处理过的池塘水来培养钝项螺旋藻使用液较为理想．不宜采用含次氯酸的自来水进行培养。     

香菇漆酶活性及转录表达对不同温度的响应特征

以香菇新808为材料,研究不同温度培养下漆酶活性及其基因表达调控特征.通过平板培养法测定4种温度（20℃、25℃、28℃和30℃）对香菇菌丝圈及氧化圈的影响,通过液体发酵测定漆酶活性,并采用qPCR技术检测漆酶同工酶基因的相对表达量.结果表明:不同温度条件下,漆酶的活性及转录表达存在明显差异.25℃培养条件下香菇菌丝圈及氧化圈最大,漆酶活性最强（114.11 U/mL）;而30℃时的菌丝圈和氧化圈最小,漆酶活性低（47.52 U/mL）.不同温度培养下漆酶同工酶基因出现差异性表达,以25℃为对照组,20℃培养条件下9个漆酶基因（Llac1-3、Llac5和Llac7-11）表达量上调,28℃处理下除Llac5和Llac7基因以外,其余8个漆酶基因表达量发生上调,而30℃处理组6个漆酶基因（Llac1-2、Llac4、Llac7-8和Llac10）表达量下调.表明20℃处理下有助于漆酶基因的表达,而30℃处理下则抑制了其同工酶基因的表达.     

谷氨酸钠对钝顶螺旋藻生长及色素的影响

在Zarrouk培养液中添加不同质量浓度的谷氨酸钠,研究其对钝顶螺旋藻生长和色素质量比的影响。结果表明,低质量浓度的谷氨酸钠能促进螺旋藻的生长,提高螺旋藻中叶绿素a、类胡萝卜素和藻蓝蛋白的质量比,而当谷氨酸钠质量浓度超过1g/L后,钝顶螺旋藻的生长和色素质量比都受到明显抑制,藻蓝蛋白也受到破坏。     

蓝、绿藻SOD同工酶类型及其进化

以新鲜蓝藻极大螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｍ ａｘｉｍ ａ）、钝顶螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）、盐泽螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｓｕｂｓａｌｓａ）、单细胞绿藻盐藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ ｓａｌｉｎａ） 、多细胞绿藻轮藻（Ｃｈａｒａ）、水绵（Ｓｐｉｒ－ｏｇｙｒａ）和鞘藻（Ｏｄｅｏｇｏｎｉｕｍ ）为实验材料．经抽滤、超声波破碎后,进行聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳和抑制剂处理,结果表明三种螺旋藻都只含有Ｆｅ－ ＳＯＤ,其中极大螺旋藻、钝顶螺旋藻含有４ 条Ｆｅ－ ＳＯＤ同工酶谱带,而盐泽螺旋藻含有６ 条谱带;盐藻、水绵、鞘藻含有Ｆｅ－ ＳＯＤ和Ｍｎ－ ＳＯＤ两种类型,而轮藻含有Ｆｅ－ ＳＯＤ、Ｍｎ－ ＳＯＤ和Ｃｕ·Ｚｎ－ ＳＯＤ三种类型．     

人疱疹病毒8编码的趋化因子vMIP-Ⅱ在大肠杆菌的优化表达

目的：探讨优化vMIP-Ⅱ/MBP融合蛋白表达载体pMal在原核细胞中的表达条件，并对其表达产物进行纯化。方法：通过接菌，诱导表达，实验了解诱导时不同的温度，诱导时间，IPTG浓度对蛋白表达量的影响，并进行SDS-聚丙烯酰氨凝胶（SDS-PAGE）电泳分析。结果：发现该菌在含0.3mmol/L IPTG的TB培养基中，28℃诱导表达4h，可使诱导蛋白表达达量占菌体蛋白总量的10%。结论：vMIP-Ⅱ/MBP的表达受温度条件影响较大，低温诱导时表达水平较高，从而为该工程菌的中试提供了实验基础。     

光照度及葡萄糖浓度对螺旋藻生长的影响

研究光照度和葡萄糖浓度对钝顶螺旋藻光合自养及混合培养生长速率的影响．在光合自养中，钝顶螺旋藻的生长受光照度的影响，最佳的光照度约为４０００ｌｘ．光照度的减少将明显降低其生长速率。如果光照度低于５００ｌｘ，将观察不到其生长．在混合培养中，光照度对螺旋藻的影响不及在光合自养中显著．在２０００至４０００ｌｘ光照度范围内，螺旋藻的生长几乎不受影响。而且在２．５×１０ｋｇ／Ｌ的葡萄糖浓度下，可获得２．６６×１０－３ｋｇ／Ｌ的最高干细胞质量浓度．光照度和葡萄糖浓度对钝顶螺旋藻生长的影响是相关联的：当光照度从４０００ｌｘ降至５００ｌｘ时，如果要获得最大的螺旋藻生长速率，葡萄糖的浓度应该从２．５×１０－３ｋｇ／Ｌ增加至５．０×１０－３ｋｇ／Ｌ。     

钝顶螺旋藻的培养及其生物学特性的研究

通过对钝顶螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａｐｌａｔｅｎｓｉｓ）的室内培养,选择了其最佳的培养条件,对藻体中的碳水化合物、粗蛋白、灰分进行分析,并且研究了钝顶螺旋藻对铁、锌、钙、碘等生命必须元素的吸收情况。结果表明,钝顶螺旋藻在２５００ｌｕｘ,３４＋１℃,光暗比为１２：１２,ＮａＨＣＯ３浓度为１３．０ｇ／Ｌ的培养液中生物量最高可达２．６６ｍｇ干重／ｍｌ。藻体中的碳水化合物占干重的１６．０％,粗蛋白占干重／