重组人碱性成纤维细胞生长因子的纯化及生物活性鉴定

目的 :探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)的纯化工艺和活性鉴定 .方法 :将rhbFGF工程菌大量扩增后通过包涵体提取、复性、阳离子交换、凝胶过滤等技术进行纯化 .结果 :纯化后的rhbFGF ,相对分子质量为 17× 10 3,蛋白纯度为 95 %以上 ,比活为 1 7× 10 6 U/mg ,对NIH3T3细胞具有明显的促分裂活性 .结论 :通过复性和两步层析的纯化方法可获得高纯度、高回收率和高生物活性的rhbFGF ,可用于实验室研究及临床试验     

色谱法在蛋白质分离纯化中的应用

本文阐述了凝胶过滤、离子交换和疏水相互作用色谱的基本原理和操作条件，说明了它们在蛋白质纯化中的应用策略。     

重组人TRAIL蛋白的原核表达、纯化及鉴定

将含有人TRAIL蛋白表达质粒的大肠杆菌以IPTG诱导表达 ,表达蛋白主要以包涵体形式存在 .经菌体破碎、包涵体分离、抽提及复性 ,用Ni NTASuperflow柱层析及进一步的离子交换色谱分离纯化获得纯蛋白 .SDS PAGE显示纯化的蛋白为 19kD的单一条带 .Westernblot鉴定表明 ,纯化的表达产物与抗人TRAIL蛋白的抗体发生特异性免疫反应 .抗肿瘤生物活性测定表明该纯化蛋白对肿瘤细胞的体外生长具有显著的抑制作用 .     

重组人内皮抑素层析复性的相关研究

研究了由大肠杆菌表达的重组人内皮抑素(Recombinant human endostatin,rhES)的复性、纯化过程.比较先层析复性后纯化(工艺1)和先纯化后层析复性(工艺2)两种工艺的结果表明:工艺1所得rhES的收率和活性回收率分别为64.44%和213.19%,与工艺2相比分别提高8.70%和33.04%.工艺1中,研究了3种凝胶过滤柱复性及复性pH和上样蛋白浓度对复性的影响,并优化相关工艺.结果表明:在pH9.0,rhES浓度3.91 mg/mL的条件下,采用双梯度凝胶过滤Sephacryl S-100 HR进行层析复性,Sephadex G-25脱盐后,用SP Sepharose FF阳离子交换吸附纯化,获得活性回收率为213.19%,HPLC纯度为97.07%的rhES,其IC50为1.58 ug/mL.     

铜绿微囊藻气囊结构蛋白GvpC的表达纯化与晶体生长研究

对GvpC进行了初步晶体学研究。首先对GvpC进行分子克隆,利用原核表达系统在体外进行异源表达;结合变复性和凝胶过滤层析的方法纯化GvpC;通过圆二色谱的方法鉴定GvpC的复性效果;运用坐滴蒸汽扩散法进行晶体初筛。结果表明：GvpC在大肠杆菌表达系统中表达为包涵体;通过变复性和凝胶过滤层析能纯化出纯度较高的蛋白;圆二色谱证实复性后的GvpC形成了正确的二级结构,复性效果较佳;通过晶体初筛获得了GvpC的晶体,后续即可通过解析GvpC的晶体结构而获得其三维结构。     

重组基质金属蛋白酶MT5-MMP的表达、 纯化和复性

对已经构建成功并转化到大肠杆菌E.coli BL21(DE3)的基质金属蛋白酶MT5 MMP的催化结构域进行诱导表达, 得到分子量为21000, 包涵体形式的重组蛋白. 通过离子交换树脂对目的蛋白进行纯化后, 用凝胶过滤树脂对纯化后的蛋白进行柱上复性, 得到了具有较高活性的重组蛋白.     

离子交换层析和凝胶过滤分离纯化抗凝血多腚

以DEAE-C52离子交换层析和Sephadex G50凝胶过滤成功地从盐源山蛭(Haemendipsa yanyuanensis)头部分离纯化了抗凝血多肽,获得了蛋白质质量浓度为1.17mg*mL-1、抗凝血酶比活性为152.78U*mg-1的抗凝血多肽,证明了DEAE-C52离子交换层析和Sephadex G50凝胶过滤是分离盐源山蛭抗凝血多肽的有效方法.     

红豆中几丁质酶的纯化与表征

利用硫酸铵沉降、离子交换色谱CM-Sephadex C-50、凝胶过滤色谱Sephadex G-75以及高效液相色谱(HPLC)Poros HS-20,从红豆种子中分离纯化出一种具有抗真菌活性的几丁质酶.SDS-PAGE显示还原与非还原状态下该蛋白分子质量分别为27.7和22.7 kDa,这表明该几丁质酶分子内含有二硫键.该酶比活为14.57 U/mg,最适反应pH为5.4,最适反应温度为50℃.它对棉花枯萎病菌、甜瓜枯萎病菌与瓜果腐霉病菌等真菌有明显的抑制作用.     

鹿茸中促肾上皮细胞增殖蛋白的分离纯化与表征

采用凝胶过滤层析以及离子交换色谱方法,从鹿茸中纯化出一种蛋白,其在SDS-PAGE电泳上显示为一条带,分子质量为53.3 kDa,同时初步考察了该纯化蛋白在6种不同浓度下对狗肾上皮细胞(MDCK)增殖的影响.结果发现,该蛋白在0.124 mg/mL浓度时,MDCK细胞的增殖效果最佳,达73.02%.     

离子交换层析和凝胶过滤分离纯化抗凝血多肽

以DEAE－C52离子交换层析和SephadexG50凝胶过滤成功地从盐源出蛭（Haemendipsa yanyuanensis)头部分离纯化了抗凝血多肽，获得了蛋白质质量浓度为1.17mg.mL^-1，抗凝血酶比活性为152.78U.mg^-1的抗凝血多肽，证明了DEAE－C52离子交换层析和SephadexG50凝胶过滤是分离盐源山蛭抗凝血多肽的有效方法。