人参水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤细胞B16的增殖抑制的研究及对Bcl-2/Bax表达的影响

摘 要 目的：研究人参水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤细胞的增殖抑制作用及对Bcl-2/Bax表达的的影响。方法：1.MTT法测定人参水溶性总蛋白对黑色素瘤B16细胞株的增殖抑制率。2. RT-PCR（Real-time PCR）法检测Bcl-2、Bax基因的mRNA表达情况。3.Western blot测定凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果：1.人参水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤B16细胞株有明显的增殖抑制作用,其抑制率随着加药浓度的增加而升高,并与加药浓度呈现一定的量效关系。2.随着人参水溶性总蛋白浓度的增高（0,100,500,1000ug/mL）,RT-PCR检测的Bcl-2 mRNA相对表达量逐渐降低,Bax mRNA相对表达量逐渐升高,当加药浓度为1000ug/ml时,Bcl-2的相对表达量最低,为0.20±0.05,Bax的相对表达量最高,为16.83±0.07;与对照组相比,Bcl-2和Bax基因的相对表达量差异均有统计学意义（P＜0.05）。3.经Western blot测定,各组Bcl-2蛋白的表达均低于对照组,各组Bax蛋白表达均高于对照组,且随着加药浓度的增加,Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,Bax蛋白表达量逐渐升高。结论：人参水溶性总蛋白可以抑制小鼠黑色素瘤B16细胞株增殖,其分子机制可能与调控Bcl-2/Bax凋亡蛋白的表达有关。     

HCAP1基因对Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl - 2的作用

目的：研究外源HCAP1基因产物对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax／Bcl-2的作用。方法：用脂质体介导的基因转移方法，把外源HCAP1基因转染到Raji细胞中，用流式细胞术和Hochest 33258荧光染色检测细胞凋亡；用Western blot检测外源HCAP1基因对凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2蛋白表达的调节。结果：外源HCAPl基因导入Raji细胞24、48和96h后，细胞凋亡率增加。Western blot显示Bax／Bel-2蛋白表达比值明显增高。结论：转染外源性HCAP1基因可诱导Raji细胞凋亡，使Bax／Bcl-2蛋白表达比例上调可能是HCAP1诱导凋亡的机制之一。     

IL-24联合大蒜素体外抗肺癌细胞生长的实验研究

目的探讨抑癌基因IL-24联合大蒜素对肺癌A549细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法提取前期构建的p DC316-h IL-24-EGFP质粒,转染肺癌A549细胞,分为A组(空白对照组)、B组(单独大蒜素组(40μL/m L))、C组(脂质体+IL-24组)、D组(大蒜素(40μL/m L)+脂质体+IL-24).荧光显微镜下观察质粒的转染情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法检测p DC316-h IL-24-EGFP、大蒜素和联合用药作用A5 4 9细胞4 8 h后IL-24,Bax,Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平.结果大蒜素(40μL/m L)和p DC316-h IL-24-EGFP单用48 h对A549细胞均有明显抑制作用;大蒜素(40μL/m L)联合p DC3 1 6-h IL-24-EGFP比单用p DC3 1 6-h IL-24-EGFP作用更强(P0.05);大蒜素(40μL/m L)、p DC316-h IL-24-EGFP和两药联用48 h后,A549细胞凋亡率分别为32.7%,39.4%和68.8%;大蒜素(40μL/m L)和/或IL-24作用于A549细胞48 h后,Bax/Bcl-2的比值及Caspase-3表达均上调,联合用药组效果尤其明显.结论p DC316-h IL-24-EGFP联合大蒜素可协同抑制人肺癌A549细胞生长,机制可能是通过调节基因Bax/Bcl-2的表达比率,并上调Caspase-3的表达,进而诱导A549细胞的凋亡.     

中药复方921粗提物的抗前列腺癌作用

为确定中药复方921粗提物的抗前列腺癌作用,采用SRB法考察921方粗提物对肿瘤细胞株的体外生长抑制作用,采用小鼠可移植瘤模型肝癌H22、肉瘤S180、前列腺癌TRAMP-C2和人前列腺癌细胞PC-3M裸鼠移植模型,考察其对体内肿瘤的生长抑制作用,并了解其与CTX合用时的增效和减毒作用。结果显示： 1） 921方粗提物对DU-145,PC-3M,EJ,TRAMP-C2等细胞株的GI_50约在1∶14.2～1∶73.5（稀释度）之间; 2） 对肝癌H22小鼠移植瘤的抑制率达42％,对肉瘤S180小鼠移植瘤的抑制率达52％,对TRAMP-C2小鼠移植瘤的抑制率达36％,对人前列腺癌细胞PC-3M裸鼠移植瘤的抑制率达44.2%,与CTX合用能起到协同抗肿瘤作用并且不增加毒性。结果表明中药复方921粗提物具有一定的抗前列腺癌作用。     

铅对小鼠睾丸生精细胞凋亡及Caspase-3,Bcl-2和Bax基因表达的影响

为了研究铅致小鼠睾丸生精细胞凋亡及其对Caspase-3,Bax和Bcl -2基因表达的影响.25只雄性小鼠随机分成5组:0h对照组、12h染铅组、24h染铅组、36h染铅组和48h染铅组,每组5只,实验组按照100mg/kg的剂量腹腔注射醋酸铅溶液,5组小鼠分别于0h、12h、24h、36h、48h后脊柱拉断处死,取其睾丸组织,用苏木精-伊红染色及免疫组化技术检测睾丸组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白Caspase -3,Bcl -2和Bax的表达.结果显示:细胞凋亡相关基因Caspase -3,Bcl -2和Bax的表达较对照组差异显著,Caspase -3和Bax在染铅毒后表达量一直上升,Bcl -2的表达量一直下降,差异性随染铅时间的不同而有变化.铅负荷至一定程度时可致小鼠睾丸细胞凋亡,且呈一定量效关系(P＜0.01),这种作用可能与Bcl -2基因低表达和Caspase-3与Bax基因高表达有关.     

陡脉冲诱导在体瘤细胞凋亡的实验及分析

检测陡脉冲电场作用下Wistar大鼠在体瘤细胞的Bcl-2和Bax基因编码蛋白表达,探讨陡脉冲诱导在体瘤细胞凋亡的机理.用免疫组织化学法和原位缺口末端标记(TUNEL)法分别检测18例荷有Walker-256瘤株的Wistar大鼠瘤细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率.结果表明:1)陡脉冲电场对在体瘤细胞有显著的治疗作用,治疗组可见大量肿瘤坏死组织,对照组瘤细胞呈弥漫性密集分布,浸润性生长;2)TUNEL检测结果:治疗组的细胞凋亡率明显高于对照组;3)Bcl-2、Bax蛋白表达:陡脉冲电场作用后,Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强.陡脉冲电场能诱导瘤细胞凋亡,其分子机制是下调Bcl-2蛋白表达,增强Bax蛋白表达.     

内耳免疫反应诱导Bcl-2和Bax表达研究

探讨内耳免疫反应过程是否引起细胞凋亡以及Bcl-2和Bax的表达情况。选用雌性白色豚鼠16只，随机分为实验组和对照组各8只，以钥孔虫戚血蓝蛋白（KLH）全身免疫后，实验组以相同抗原进行内耳免疫，对照组内耳注射等量的磷酸盐缓冲生理盐水（PBS），在内耳免疫5d后处死动物，取内耳免疫侧耳蜗制作石蜡切片。通过免疫组化检测内耳Bcl-2和Bax的表达。结果表明，内耳免疫反应可以诱导细胞凋亡的发生以及Bcl-2和Bax蛋白在其中起了重要的调节作用。     

黄荆子乙酸乙酯提取物诱导结肠癌HT-29细胞凋亡

目的研究黄荆子乙酸乙酯提取物（EVn-50）诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法用不同浓度的EVn-50处理体外培养的HT-29细胞;碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带;Western blot分析Bcl-2和Bax蛋白表达。结果EVn-50以浓度依赖的方式增加HT-29细胞凋亡率（P〈0．05）。10．0tanoVLEVn-50处理HT-29细胞48h导致典型DNA梯形条带形成。10．0umol/LEVn-50以时间依赖方式下调Bcl-2蛋白表达,同时,上调Bax蛋白表达（P〈0．05）。结论EVn-50诱导HT-29细胞凋亡作用与增加Bax／Bcl-2比值有关。     

运动对心肌细胞中凋亡调控基因的影响

研究运动对心肌细胞中调控基因Bcl-2、Bax和p53的影响以探讨凋亡调控基因对运动引起心肌细胞凋亡的作用。以大鼠中等运动强度训练、一次性力竭运动和过度训练为运动模型，采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术观察了大鼠心肌细胞中调控基因Bcl-2、Bax和p53mRNA的表达。长期中等强度的运动可造成大鼠心肌细胞中凋亡调控基冈Bcl-2mRNA表达明显增加，可抑制心肌细胞凋亡；而力竭运动和过度训练可引起心肌细胞中Bcl-2mRNA表达下降和调控基冈Bax、p53mRNA表达显著升高以及凋亡调控基因Bcl-2／Bax比值显著下降，可促进心肌细胞凋亡。心肌细胞中凋亡调控基冈Bcl-2、Bax和p53在不同运动后的不同表达对心肌细胞凋亡的发生有明显的调控作用。     

溶酶体蛋白酶cathepsin B参与介导前列腺癌PC-3细胞凋亡

细胞凋亡是多细胞生物清除多余、损伤或有潜在危险细胞的一种主要生理机制.蛋白水解酶是细胞凋亡研究的重要对象,其中大部分工作都集中在探索caspases的功能和调控上.近年来,越来越多的证据显示一些非caspases蛋白酶如位于溶酶体中的cathepsins特别是cathepsin B(CTSB)参与细胞凋亡过程.溶酶体cathepsins既可以与caspases协同作用,也可以不依赖于caspases独立执行凋亡功能.选取人前列腺癌PC-3细胞株作为研究对象,通过检测PC-3细胞对TNFα、D-sphingosine两种凋亡诱导剂和caspases、cathepsins抑制剂的应答反应,以及细胞凋亡过程中溶酶体、线粒体的结构变化,证实了D-sphingosine引起PC-3细胞死亡的效应主要通过释放溶酶体中蛋白酶CTSB实现,CTSB和caspases均参与介导TNFα诱导的PC-3细胞凋亡过程,并且很可能在不同的凋亡信号通路中发挥作用.     

白桦脂酸体外抗肿瘤的活性和机制

研究白桦脂醇（Betulin）和白桦脂酸（Betulinic Acid, BA）对3种癌细胞株的增殖抑制作用以及白桦脂酸诱导MCF 7细胞毒的分子机制. 应用结晶紫染色方法对白桦脂醇和白桦脂酸对肿瘤细胞的生长抑制作用进行筛选； 应用RT-PCR技术检测MCF 7细胞p21 mRNA, p53 mRNA, Bcl 2 mRNA和Bax mRNA的表达. 结果表明, 白桦脂醇和白桦脂酸有显著抑制肿瘤细胞生长的作用, 且有浓度依赖性; 白桦脂酸能够诱导MCF 7细胞凋亡, 并诱导其p21 mRNA和p53 mRNA表达增高, 但对其Bcl 2 mRNA和Bax mRNA 的表达无影响.     

Chaetoglobosins E诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用机制研究

为探究Chaetoglobosins E(ChE)对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,体外培养人乳腺癌MCF-7细胞、人膀胱癌T-24细胞、人黑色素瘤C8161细胞、人白血病U937细胞,用不同浓度的ChE分别作用于4种细胞24 h或48 h,MTT法检测4种肿瘤细胞的增殖情况;为进一步研究其作用机制,Hoechst 3334...     

线粒体腺苷酸转运体在宫颈癌组织中的表达变化及其与细胞凋亡的关系

 为探讨线粒体腺苷酸转运体（ANT）在宫颈癌组织中的表达变化及其与细胞凋亡的关系,收集维吾尔族妇女浸润性宫颈鳞癌患者的组织36 例,正常或者慢性宫颈炎宫颈组织32 例作为对照。分别运用荧光定量PCR（Q-PCR）、蛋白免疫印迹（westernblot,WB）技术,检测线粒体腺苷酸转运体ANT1、ANT2、ANT3,以及Bax、Bcl-2、p53 在不同宫颈组织中的mRNA 和蛋白表达水平及其差异。运用TUNEL 法测定不同宫颈组织中的细胞凋亡程度。Q-PCR 和WB 结果显示,与正常对照组相比,p53、Bax 在宫颈癌患者宫颈组织中表达降低,而Bcl-2 和ANT3 表达升高,差异有统计学意义（P<0.05）。TUNEL 结果显示,宫颈癌组的凋亡指数（AI）明显高于正常对照宫颈炎组,两组之间差异有统计学意义（P<0.05）。线粒体腺苷酸转运体ANT 在宫颈癌组织中的异常表达导致线粒体功能紊乱,从而干扰细胞凋亡过程,这可能是宫颈癌发生与发展的一个重要机制。     

Effect of thrombin on the apoptosis of hippocampal neurons in vitro

Hippocampal neurons were treated by thrombin and thrombin receptor activating peptides (TRAP). Cell survival rate was decreased in a dose-dependent manner by MTT assay. The numbers of apoptotic cell and apoptotic rate of hippocampal neurons treated by different concentrations of thrombin were increased in a dose-dependent manner by terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP-biotin nick end-labeling (TUNEL) method and Flow Cytometry. When the concentration of thrombin is 40 U/mL, TUNEL positive cells and apoptotic rate of hippocampal neurons reached peak value, were 27.3±4.0 and (29.333±4.633)%, respectively. Immunocytochemistry assay show that Bcl-2 protein expression was down-regulated and Bax protein expression was up-regulated with the concentration of thrombin increased. TRAP can mimic the effect of thrombin to induce apoptosis on hippocampal neurons. These data demonstrated that thrombin induced hippocampal neuron apoptosis in a dose-dependent manner through activating protease-activated protein-1 (PAR-1). The change in expression of Bcl-2 and Bax was related with the effect of high concentration thrombin induced apoptosis on hippocampal neurons. Foundation item: Supported by the Natural Science Foundation of Hainan Province (N30215) Biography: YANG Wen-qiong (1968-), female, Ph.D. candidate, research direction: cerebrovascular disease.     

Involvement of Oxidative Stress and Down-Regulation of Bcl-2 in Arachidonic Acid-Induced Apoptosis in HUVECs

0IntroductionAraacicdhi,diosn fiocu ancidd p(reAdAo)m i,naanntelsys eantt itahle p sonl-y2u npsoastiutiroante doff actetl-ylular phospholipids . Normal free AAconcentrationin humanblood ranges from5 .8μmol/Lto 49 .3μmol/L[1].It is re-leased mostlythroughactivation of phospholipase A2by physi-ological and pathological sti muli[2]. Free AAcan be metabo-lizedinto various eicosanoids via specific enzymes such as cy-clooxygenases ( COX) , lipoxygenase and cytochromesP-450[3]. During AA met…     

表儿茶素没食子酸酯对人鼻咽癌C666-1细胞凋亡的影响

该文观察ECG在人鼻咽癌细胞株C666-1增殖与凋亡中的作用,并初步探讨其机制.人鼻咽癌C666-1细胞给予不同浓度ECG(0~100μmol/L)处理48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖水平,使用TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase 3等凋亡相关蛋白的表达变化.结果表明,25μmol/L以上浓度的ECG可抑制C666-1细胞增殖,诱导细胞凋亡;并且ECG可浓度依赖性增加Bax/Bcl-2蛋白比值和剪切的Caspase 3蛋白水平.以上结果表明ECG可抑制人鼻咽癌细胞株C666-1增殖,并诱导细胞凋亡.ECG的作用与其增加Bax/Bcl-2相对蛋白比值进而激活caspase-3有关.     

新型单羰基姜黄素类似物的合成及抗肿瘤活性研究

采用氮烷基化、羟基保护、醛酮缩合三步反应合成了8个新型单羰基姜黄素类似物,结构经质谱、核磁共振氢谱和核磁共振碳谱等手段进行确认。并采用MTT染色法体外检测所合成的8个单羰基姜黄素类似物对人肺癌细胞H1299,结肠癌细胞HT-29,人体胰腺癌细胞BxPC-3和人前列腺癌细胞PC-3的抗癌活性。半数抑制浓度IC50值结果显示:所合成的8个姜黄素类似物对四种细胞均有较强的抑制作用,其中化合物A6在四种细胞中的半数抑制浓度IC50均在0.65 μM以下,抗癌活性比姜黄素提高了40倍以上。     

灯盏花注射液抗新生鼠缺氧缺血脑损伤的药效作用

为观察灯盏花注射液治疗新生鼠缺氧缺血脑损伤的药物疗效及其药理作用机制,采用新生7日龄大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,设立假手术组、缺氧缺血脑损伤模型组、灯盏花注射液治疗10,20,40 mg/kg剂量组、无菌注射用水对照组.采用硫堇染色、免疫组织化学染色的方法测定各实验组海马CA1区神经元密度、组织学分级、凋亡相关基因bcl-2和bax的表达情况,并计数各时间点Bcl-2和Bax蛋白免疫阳性细胞数目及积分光密度值.假手术组,大鼠海马CA1区无锥体细胞缺失,未见明显阳性细胞.与假手术组比较,缺氧缺血脑损伤模型组、无菌注射用水对照组Bcl-2,Bax蛋白表达均于3 d时达到高峰(与其余各时间点比较差别有显著意义p0.05),神经元密度明显降低,组织学分级显著增高,积分光密度值增加.灯盏花治疗组,与无菌注射用水对照组比较,Bcl-2阳性表达进一步增加,积分光密度值增加;而Bax阳性表达则减少,积分光密度值降低;神经元密度显著高于对照组,组织学分级明显降低.灯盏花注射液可能是通过上调Bcl-2表达,抑制Bax表达,减轻缺氧缺血引起的神经元凋亡及迟发性神经元死亡.     

明日叶查尔酮对紫外线诱发HaCaT细胞损伤的防护作用

 为研究明日叶查尔酮（Angelica keiskei chalcones,AC）对紫外线诱发HaCaT细胞损伤的防护作用,采用紫外线照射损伤的HaCaT细胞,分别加入高、中、低剂量依次为20、10、5μmol/L终浓度的AC,共同培养24 h,采用3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-Htetrazolium bromide（MTT）比色法测定细胞增殖活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率,试剂盒法测定细胞MDA含量和SOD、CAT及Caspase-3的活性,逆转录聚合酶链式反应方法检测细胞BCL-2和Bax的mRNA表达水平。结果表明,与正常对照组比较,照射模型组细胞增殖活性、SOD、CAT活性、BCL-2 mRNA表达水平降低,而细胞MDA含量、凋亡率、Caspase-3活性以及Bax mRNA表达水平则升高;中、高剂量AC组细胞增殖活性、SOD、CAT活性、BCL-2mRNA表达水平均高于照射模型组,而细胞MDA含量、凋亡率、Caspase-3活性以及BaxmRNA表达水平则均低于照射模型组。上述各项差别均具有统计学意义（P<0.05）。研究发现,明日叶查尔酮可抑制紫外线照射诱发的HaCaT细胞凋亡,调节BCL-2和Bax的mRNA表达水平,增强细胞的抗氧化酶活性,减轻受损细胞的脂质过氧化水平,对紫外线照射导致的细胞损伤有良好防护作用。     

As4S4诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及相关分子机制研究

研究AS4S4对宫颈癌Hela细胞生长抑制厦诱导凋亡作用，并探讨可能的分子机制。以不同浓度的AS4S4分不同时间段处理Hela细胞，用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖抑制率；采用流式细胞术测定细胞凋亡；Western blotting测凋亡相关蛋白Bcl-2，Caspase3表达的变化。结果表明，经AS4S4处理的Hela细胞，增殖受到抑制，作用呈明显的时效和量效关系，细胞凋亡率明显增高并呈浓度依赖性；Western blotting示Bcl-2表达下降，Caspase3表达增加。因此，AS4S4对Hela细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用，其机制与下调Bcl-2蛋白、上调Caspase3蛋白表达有关。