胰升血糖素样肽-1受体激动剂高通量筛选细胞模型研究

为建立GLP-1受体激动剂的高通量筛选方法,将GLP-1受体质粒和报告基因质粒(3×CRE/3×MRE/SRE-LUC/pGL3)按照1∶5的比例共转染到CHO细胞中,建立GLP-1受体激动剂筛选细胞株。利用GLP-1内源激动剂探索和优化每孔细胞接种密度、荧光素酶表达时间、Bright-GloTM试剂用量、DMSO浓度等筛选条件,建立可靠的筛选方法。当细胞数目为4×104个/孔,激动剂孵育时间为8 h,Bright-GloTM试剂4倍稀释,每孔DMSO终质量分数小于1%时,系统Z′-因子为0.75。利用此模型对中药提取物库进行检测,发现有5个样品显示出活性。结果表明,该模型能够用于GLP-1受体激动剂的高通量筛选。     

MC1R天然拮抗剂的高通量初步筛选

为了寻找高效稳定的黑色素皮质激素受体1(melanocortin 1 receptor, MC1R)的拮抗剂,利用作者前期工作中建立的高通量筛选方法对 1 000种中草药提取物进行了筛选,并检测了这些提取物对小鼠B16-F1细胞系黑色素生成量的影响.结果表明,补骨脂等10种粗提物具有拮抗促黑激素（MSH）激活MC1R的作用.其中,补骨脂、破茎松萝、桑根和太白树粗提物能明显降低B16-F1细胞的产黑色素能力,但其机制有所不同,补骨脂主要作用于MSH对C1R的激活过程,而其余3种提取物基本上直接作用于cAMP通路.本实验为利用上述中草药调控皮肤细胞中的黑色素生成提供了初步线索.     

胰高血糖素测定方法的新探讨

本文论述了作者经以Ｖｉｓｔａｒ大白鼠肝切片匀装为材料，用邻甲苯胺（Ｏ—ＴＢ测糖法测定胰高血糖素（Ｇｌ．）与其促使肝糖原分解生成的葡萄糖量（Ｇ．）之间的关系，总结并建立了一种简易、快速测定胰高血糖素的方法．     

胰高血糖素测定方法的新探讨

本文论述了作者经以Ｖｉｓｔａｒ大白鼠肝切片匀装为材料，用邻甲苯胺（Ｏ－ＴＢ测糖法测定胰高血糖素（ＣＬ．）与其促使肝糖原分解生成的葡萄糖量（Ｇ．）之间的关系，地并建立了一定简易，快速测定胰高血糖素的方法。     

放线菌生物活性物质的高通量筛选

 放线菌是产生生物活性物质最多的一类微生物.最近3年,我室从云南省采集土样,分离到3000多株放线菌、真菌,选择其中2600株,进行发酵,制备成提取物,利用自建的抗氧化、抑制乙酰胆碱酶、抑制一氧化氮合成酶、AGE等模型和高通量筛选系统进行了筛选,筛选到一些值得进一步研究的菌株.对高通量筛选的有关问题及初步筛选结果进行了讨论.     

采用胰高血糖素刺激C-肽释放实验判定糖尿病患者的β细胞功能

为评估糖尿病患者β细胞胰岛素分泌功能，采用胰高血糖素刺激C-肽释放试验评估糖尿病患者β细胞分泌功能，结果表明：在本组1型及2型糖尿病患者中，空腹及胰高血糖素刺激6min后血浆C-肽值差别明显；胰高血糖素刺激C-肽释放试验是一种简单可行、方便、重复性好的判断糖尿病患者β细胞分泌功能的方法。     

胰高血糖素免疫敏感膜的制备及SPR检测

制备胰高血糖素免疫敏感膜并建立一种快速、简便测定胰高血糖素含量的方法，利用化学自组装技术将胰高血糖素的抗体组装到ＳＰＲ基片上，首先通过已知浓度的胰高血糖素进行ＳＰＲ检测，确定了其结合常数，并以此对未知浓度的胰高血糖素进行了测定，样品无需纯化和标记。     

高通量筛选污水中的硝化细菌

为了降低污水中氮元素对环境的污染,利用分离培养基从污水中分离出94株单菌,对单菌进行富集,再利用鉴定培养基、氨氮、亚硝酸盐和硝酸盐快速测定试剂盒初筛出41株硝化细菌,通过功能验证复筛出25株高效的硝化细菌.这25株硝化细菌均可将市政污水中的COD降解到40~60 mg/L,符合污水的COD一级降解标准,氨氮的降解率为70%~90%,也符合污水中氨氮的降解标准.     

胰高血糖素样肽-1受体激动剂功能性报告基因分析系统的构建

用大鼠胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)基因转染带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的CH0细胞,成功地构建了基于G蛋白偶联受体信号传导途径的CHO/EGFP/GLP-1R检测细胞系.该细胞系能功能性表达GLP-1R并且能通过cAMP偶联的EGFP报告基因的表达评价GLP-1R激动剂的活性.利用该细胞系本文进一步对5种GLP-1与金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)不同形式连接的融合蛋白进行了体外活性评价.结果表明,5种融合蛋白的活性均低于天然的GLP-1,将GLP-1融合在SPA的N端与C端融合相比,能显著的提高其生物活性.在融合蛋白之问加入不同长度的重复序列(GGGGS),有助于提高其活性,但间隔序列的长短对活性没有显著的影响.以上结果表明,利用CHO/EGFP/GLP-1R细胞系,能够对GLP-1及其类似物的体外活性进行定性和定量的分析,为筛选和开发长效GLP-1类似物奠定了方法学基础.     

白三烯受体拮抗剂对哮喘的治疗作用

白三烯是哮喘过程中的重要炎性介质之一，可在哮喘的多个环节上发挥作用，通过与其特异性受体结合诱发哮喘，因此，阻断白三烯与其受体结合就成为抑制哮喘发作的新途径．针对白三烯在哮喘中的作用机制及应用白三烯受体拮抗剂治疗作一综述．     

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2抑制剂高通量筛选模型的建立和应用

 为了建立体外蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2抑制剂的高通量筛选模型,筛选潜在的SHP2抑制剂,通过应用大肠杆菌系统克隆表达GST-SHP2 融合蛋白,经过GST-Sepharose 亲和层析分离得到纯化的GST-SHP2 蛋白,建立384 孔板的高通量筛选模型,对48000个有明确结构的小分子化合物进行体外筛选,筛选出75个活性化合物对SHP2的抑制作用大于50%,确定3个化合物具有较高的抑制活性。该筛选模型灵敏、稳定,对SHP2抑制剂药物研发打下了基础。     

LDPC码高速译码器的设计与实现

通过对LDPC码(低密度奇偶校验码)的迭代译码算法的分析,提出了一种同时能够对两个码字进行译码,使得译码器中的变量节点和校验节点交替被两个码字使用的译码器结构。该结构不仅适用于全并行结构的LDPC码译码器,也适用于目前广泛采用的半并行结构译码器。以此结构为基础,实现了一个长度为1008bit,改进半并行结构的LDPC码译码器。此结构能够充分利用现有半并行结构译码器的逻辑资源,将译码器数据吞吐率提高近一倍。测试结果表明,本文实现的译码器的有效信息速率达到45Mbps。     

ET_A受体拮抗剂杨梅酸A的半合成研究

合成了潜在的特定ETA受体拮抗剂杨梅酸A。合成方法是通过廉价易得的齐墩果酸为原料,通过3-OH Dess-Martin（DMP）氧化、臭氧化、液氨还原等11步反应,得到杨梅酸A,中间体及目标产物的结构通过^1H NMR、^13C NMR进行了表征。     

组合库的筛选及在新药研究中的应用

从库的排列和组合技巧得到活性化合物的结构信息,应用编码技术标记库化合物的结构以及对活性化合物直接进行结构分析。阐述了组合库的筛选及其在新药应用领域的研究进展。简要介绍了作者在组合化学方面所做的研究工作。     

高效选育产氢光合细菌的研究

降解有机废水转化太阳能为氢能是一条理想制氢途径 .为使选育的菌株实用性更强 ,本文选用有机废水主要降解产物—乙酸为唯一氢供体 ,在自然生态环境条件下 ,利用紫色非硫细菌培养基 ,紫色硫细菌培养基和绿硫细菌培养基 ,从不同的水域环境中进行了产氢光合细菌的筛选 .从影响太阳能转化效率主要因素出发 ,本文对分离纯化的 1 5株光合细菌进行形态学特征研究基础上 ,着重进行了最适生长温度、光合色素成分、利用硫化物能力和耐盐能力的测定 ,并将其分为 4个类群 .在对每组细菌初筛基础上 ,本文对选育出的 8个菌株进行了生长动力学测定 ,其中Z ,SP2 ,R3,Y7菌株能利用乙酸快速生长 .对其产氢动力学研究表明 ,这些菌株均具有光合放氢活性 ,其中Z菌株产氢得率最高 .在含有 2 0mmol·L-1 乙酸钠和 5mmol·L-1 谷氨酸钠的培养基中 ,其产氢得率为 3 0 8.9ml·g-1 .这 4个菌株生理生态特性完全不同 ,且能利用乙酸光合放氢 ,在有机废水光合制氢技术中具有重要的潜在应用价值 .     

高脂饮食对法尼醇受体(FXR)敲除小鼠糖脂代谢及肝脏脂肪变性的影响研究

目的探讨高脂饮食对法尼醇受体（farnesoid X receptor,FXR）敲除小鼠糖脂代谢及肝脏脂肪变性的影响。方法正常饮食（normal diet,ND）组:C57BL/6（wild type,WT）小鼠（n=6）和FXR -/- 小鼠（n=6）给予辐照灭菌维持饲料喂养12周。高脂饮食（high fat diet,HFD）组:C57BL/6小鼠（n=6）和FXR -/- 小鼠（n=6）给予45%高脂饲料喂养12周。小鼠处死后全自动生化分析仪检测血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（High density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）和总胆汁酸（total bile acid,TBA）指标; RT-PCR检测肝脏炎症因子TNF-α、TLR4和FXR下游基因小分子异源二聚体（small heterodimer partner,SHP）、胆固醇7α-羟化酶（cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1）的相对表达量; HE染色观察肝脏脂肪变性情况。结果高脂饮食喂养条件下,C57BL/6小鼠和FXR -/- 小鼠体质量变化无差异,但相比C57BL/6小鼠,FXR -/- 小鼠表现出更为严重糖耐量受损（P <0. 01）、脂质代谢紊乱（P <0. 01）、血清胆汁酸增高（P <0. 01）、肝脏炎症（P <0. 01）和肝脏脂肪变性。结论 FXR的缺失引起小鼠糖脂代谢紊乱、胆汁酸代谢异常、肝脏脂肪变性,但这种改变需要高脂饮食的诱导。