基于酶生物催化沉积放大的日本血吸虫压电免疫传感器

提出了一种基于酶生物催化沉积放大的日本血吸虫压电免疫传感器.采用混合自组装单层膜技术在石英晶振金电极表面制备巯基丙酸(MPA)和巯基乙醇(ME)混合功能基底膜,通过偶联剂盐酸1 - 乙基 - 3 - (3 - 二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)及N - 羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化混合膜上富含的羧基基团用于日本血吸虫抗原(SjAg)的高效共价固定.通过夹心式免疫反应,将辣根过氧化酶(HRP)标记的羊抗兔二抗固定到晶体表面,利用HRP催化H2O2 氧化底物4 - 氯 - 1 - 萘酚在晶振表面形成不溶性沉积物,使免疫检测信号得以显著放大.在优化的实验条件下,该传感器可灵敏检测感染兔血清样中日本血吸虫抗体(SjAb)浓度(稀释比)的线性范围是1∶10 000～1∶100,可望用于日本血吸虫病的早期临床诊断.     

胶体金标记免疫凝集光度法检测癌胚抗原

利用胶体金特殊的光学性能,结合抗原抗体相互反应的免疫分析技术,建立一种基于胶体金标记技术的免疫凝集方法分析检测癌胚抗原.采用胶体金纳米粒子分别标记癌胚抗原的两种抗体,通过免疫夹心反应,使胶体金粒子之间凝集形成网络结构,从而引起反应体系光学性质的改变.随着癌胚抗原量的增加,抗原与胶体金粒子标记抗体的反应量不断增加,网络结构也越来越大,使得胶体金粒子在646 nm处的吸收值不断增加.根据胶体金吸光值的变化,检测溶液中癌胚抗原的浓度,最低检测极限为15μg/L.该方法只需要测量胶体金光吸收值的变化,就可以检测癌胚抗原在溶液中的浓度,快速、简便,不需要昂贵的仪器设备,易于推广使用.     

胶体金免疫分析方法的进展

１９７１年胶体金被引入了免疫化学,这一年被公认为是免疫金技术正式诞生的一年。１９９６年为纪念胶体金用于免疫化学和组织化学２５周年,一些学对免疫金电镜分析、免疫金光镜分析以及免疫金标记组织和细胞的各种技术做了总结,但是作为免疫金一项重要的应用,免疫金试纸膜和试剂盒检测法,却没有谈及。这篇综述补充了免疫金电镜分析、免疫金光镜分析在最近几年的进展,并且着重总结了免疫金在试剂盒和试纸膜上的应用现状。     

基于银钯铂复合纳米材料标记的癌胚抗原免疫传感器的研制

合成了中空囊状银钯铂复合纳米材料,并以此为标记物,研制了一种标记型癌胚抗原(CEA, Carcinoembryonic Antigen)免疫传感器用于CEA的快速检测.首先利用Au-SH键将CEA抗体(anti-CEA)固定在金电极表面,与CEA抗原免疫结合后,再与银钯铂复合纳米材料标记过的anti-CEA结合,制成夹心型的免疫传感器.考察了免疫传感器的电化学特性,同时研究了培育时间和抗体固定浓度等实验条件对传感器性能的影响.该传感器在CEA抗原质量浓度为0.1～40 ng/mL的范围内有良好的线性关系,检测下限为0.03 ng/mL.实验结果表明: 该免疫传感器操作简便、灵敏度高、选择性好,具有良好的重现性和稳定性.     

曼氏血吸虫单克隆抗体与日本血吸虫抗原的反应

用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测曼氏血吸虫单克隆抗体(Mc Ab)H417与日本血吸虫31/32kd抗原、斯氏狸殖吸虫成虫粗抗原、旋毛虫幼抗原及猪囊虫抗原的反应,结果显示,Mc AbH417旋毛虫、斯氏狸殖吸虫及猪囊虫抗原反应时,其消光值极低,而当日木血吸虫抗原与Mc AbH417反应时,其消光值读数较高,且与抗原稀释度呈线性关系.结果提示,抗曼氏血吸虫的Mc AbH417能识别异源性血吸虫抗原.     

免疫胶体金技术及其应用

免疫胶体金技术近年来发展迅速,应用范围极广。本文综述了免疫胶体金技术原理、制备方法及其广泛应用,分析了存在的问题,并针对其存在问题提出展望。     

鸡新城疫免疫胶体金诊断技术

鸡新城疫是鸡的一种高度感染和致死性疾病,是由一种侵害呼吸道、胃肠道以及中枢神经系统的新城疫病毒（NDV）所引起的。病毒存在于病鸡的血液、脑、内脏、粪便和口鼻中,国内外对本病的控制仍没有完全解决鸡新城疫对养鸡业有着巨大的威胁。所以有必要建立一种快速、简便、准确的检测方法用于鸡新城疫的诊断。胶体金技术最早是Faulk等于1971年报道的应用于电镜检查技术的一种示踪技术。与传统方法比较,由于胶体金具有肉眼可观察的红色,所以以这种技术为基础开发的检测试剂盒有快捷、准确、高特异性、高敏感性的特点,灵敏度可达0．5-1ng。适用于各级医院、卫生所、家庭个人诊断、保健、体检。目前以此方法为基础发展起来的检测试剂盒涉及范围相当广泛．包括HcG等激素、肿瘤标志物、心血管标志物、传染病的抗原与抗体的检测等。采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒．标记纯化的鸡新城疫抗体．并包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的鸡新城疫抗体和纯化的兔抗鸡抗体包被在硝酸纤维素膜上,组装成鸡新城疫快速诊断试纸条。当检样中含有鸡新城瘦病毒抗原时,试纸条上出现两条红线,为阳性;当检样中不合有鸡新城疫病毒抗原时,试纸条出现一条红线．为阴性。本试验建立的胶体金免疫层析法（GICA）是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法,可用于鸡新城疫诊断,也可用于鸡新城疫的流行病学调查．具有推广价值。     

免疫传感器

生物传感器(Biosensor)是一种利用生化反应特有的专一性,选择性地识别物质,并将生化反应能转换为电信号的装置,其基本结构如图1。免疫传感器是生物传感器中的一种,具有生物传感器的共同特点,如可直接对生化样品进行分析而不需要预处理、且灵敏度高、选择性好、操作简便、测定迅速准确、节省时间。此外,由于免疫传感器是巧妙地利用抗体对抗原的识别功能和同抗原的结合能力设计的,同酶相比,抗体具有识     

胶体金免疫试纸法快速测定雌三醇

雌三醇(E3)在临床诊断、日用化工和畜牧业等领域具有广泛应用,同时它也是一种环境污染物,对E3的检测具有科学和应用意义.本研究采用竞争性免疫层析技术,以E3单克隆抗体-纳米胶体金复合物作为金标抗体,以E3偶联抗原为检测线(T线)、以羊抗鼠抗抗体为控制线(C线),通过条件的优化,制备出检测E3的胶体金试纸条.当试纸条C线和T线同时显色时,结果为阴性;当试纸条仅C线显色时,结果为阳性.所得检测试纸条测加标水样的最低检测限为100μg/L,测加标奶样的最低检测限为100μg/L,反应时间为10min,与雌酮、雌二醇、己烷雌酚等环境雌激素无交叉反应,具有良好的选择性.     

免疫胶体金技术在畜禽疫病检测中的应用和研究进展

免疫胶体金技术是近些年来发展起来的一项新型免疫标记技术,在生物医学中已有广泛的应用.以这种技术为基础开发的检测试剂盒有快捷、准确、特异性强、敏感性高的特点.适用于基层兽医站、养殖场等使用,在今后必定会有更广泛的应用前景.综述了该技术的原理、特点、应用及发展前景.     

基于聚乙烯醇缩丁醛和金溶胶修饰的电位型铂金免疫传感器的研制

报道了一种基于聚乙烯醇缩丁醛(PVB)和金溶胶,把乙型肝炎表面抗体(HBsAb)固定在铂金电极上,用来检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的一种新型电位型免疫传感器.该传感器制作简单、响应时间较短(<3min)、具有良好的选择性和灵敏度,线性范围是4 4μg/L～240μg/L,检出限(3σ)为1 4μg/L.将该电极用于临床上对乙型肝炎表面抗原的检测,与酶联免疫法相比,符合率为91 3%.     

新型缓蚀剂在金银溶胶上的表面增强拉曼散射

利用Johin-Yvon U-1000型显微拉曼光谱仪对一种新合成的缓蚀剂在金、银溶胶上的表面增强拉曼光谱进行了研究,探讨了其在金、银表面的吸附机理.结果表明,这种缓蚀剂以S-Me键倾斜地吸附于金、银溶胶表面,与金、银在表面形成一层稳定的单分子膜,可以有效地阻挡外部分子的侵蚀.     

共价固定乙肝表面抗体电容型免疫传感器研究

利用硫脲中的硫原子和金之间强的共价效应,以及氨基与醛基的键合作用,将乙肝表面抗体(HBsAb)牢牢的固定在金电极表面,同时通过十二硫醇封闭电极,从而制得高灵敏、高稳定电容型乙肝表面抗原(HBsAg)免疫传感器。通过交流阻抗技术考察了溶液pH值和离子强度对电极性能的影响。结果表明:该免疫传感器操作简便,易于再生,电容响应与乙肝表面抗原浓度在7.5~750 ng.mL-1范围内呈线性关系,检出限为1.9 ng/mL。     

日本血吸虫尾蚴的检测及防灭的研究进展

血吸虫尾坳是血吸虫病传播的关键环节,水体表面是否有尾蚴存在或尾蚴数量的多少,是判断该地域血吸虫病流行强度的重要方法之一,对国内已有水体尾蚴检测法及防灭法进行了简要介绍.     

东方田鼠抗日本血吸虫病机制研究

本文报道了在东方田鼠抗日本血吸虫机制研究方面的研究成果。经多次重复感染试验 ,证实来源于血吸虫疫区 (洞庭湖 )和非疫区 (宁夏青铜峡 )的东方田鼠均具有抗日本血吸虫病能力 ,这种能力是可遗传的 ,与获得性免疫关系不大 ;体内外的检测与杀伤试验显示东方田鼠体内存在的抗日本血吸虫童虫和成虫抗原的天然抗体IgG3和补体可能在其抗血吸虫病方面具有很重要的作用 ;东方田鼠和腹腔巨噬细胞 (Mф)、嗜酸细胞 (Eos)对血吸虫童虫具有天然的黏附能力 ;用东方田鼠血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,获得了 5个阳性克隆 ,其中 4个克隆为新基因 ,…     

血吸虫膜相关抗原基因的克隆

目的:筛选日本血吸虫(Schistosoma japonicum,S.japonicum)新的疫苗候选抗原基因.方法:以S.japonicum成虫DNA为模板,PCR扩增相关基因,然后将其克隆XpBS-T载体,通过菌落PCR对产物进行检测,对阳性克隆子测序,与GeneBank中的已知相关序列进行比对分析.结果:菌落PCR获得一条与PCR产物一致的DNA片段,序列测定结果表明PCR产物与S.japonicum 22.6 kDa抗原分子核苷酸序列具有高度同源性.其目的基因大小636 bp,具有一个189 bp的ORF,能编码63个氨基酸.ORF不是全长的阅读框,只获得部分编码区.表达产物可含有一个包含9个氨基酸残基的潜在螺旋跨膜片段(25～33位)和一个酪氨酸激酶磷酸化位点(38～39位).讨论:成功克隆出一个与S.japonicum 22.6kDa抗原编码基因有高度同源性的基因.预测该基因为膜相关蛋白基因,可编码血吸虫体表膜相关蛋白.在生理机能上,该膜相关蛋白可能是信号传递分子.     

脂质体电化学发光免疫传感器用于人IgG的检测

实验构建了一种检测人免疫球蛋白G（人IgG）的竞争型免疫传感器.采用层层组装的方法将IgG抗体固定在金纳米粒子修饰的金电极表面,基于待测IgG与IgG抗原标记的、内部包裹Ru（bpy）23＋的脂质体之间的竞争,实现对人IgG的检测.结果表明,电化学发光强度与人IgG的浓度在0.1-3 ng/mL范围内呈良好的线性关系,线性回归方程为y=803.1-206.2x（ng/mL）（n=6,R=0.99）,检出限为0.05 ng/mL.对人血清中IgG检测,结果令人满意.     

日本血吸虫卵壳蛋白编码基因的扩增及克隆

目的:扩增和克隆日本血吸虫卵壳蛋白编码基因(SjESG),以研究其作为候选疫苗分子和药物靶点的可能性.方法:合成引物,以日本血吸虫雌、雄虫cDNA第一链为模板,RT-PCR扩增日本血吸虫卵壳蛋白编码基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建原核表达重组质粒,并经限制性核酸内切酶酶切分析和PCR鉴定.结果:从雌虫cDNA中扩增出624bp SjESG基因,原核表达重组质粒pET32a(+)-SiESG经限制性核酸内切酶酶切和PCR均获得624bp的DNA片段.结论:成功构建原核表达重组质#ipET32a(+)-SjESG.     

基于石墨烯-壳聚糖/纳米金的酪蛋白电化学免疫传感器

将石墨烯和壳聚糖的复合物滴涂到玻碳电极表面,利用壳聚糖对纳米金的吸附将其修饰到上述电极,以纳米金对抗体的良好亲和力将酪蛋白抗体修饰到电极表面制成免疫传感器,利用循环伏安法对传感器进行表征.结果表明,石墨烯和纳米金有效地促进了电子的传递速度,提高了检测灵敏度.在优化条件下,响应电流与酪蛋白浓度的对数在10～10 000μg/L范围内呈良好的线性关系,检出限为2μg/L(S/N=3).     

日本血吸虫体壁抗原基因的筛选与克隆

为筛选并克隆新的日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)候选抗原基因,以日本血吸虫成虫总DNA为模板,通过生物信息学以及分子生物学手段从日本血吸虫全基因组中筛选目的基因.根据所筛选到的目的基因的核酸序列设计合成引物,用PCR法扩增目的基因,将其克隆入pBS-T载体后转入到大肠杆菌DH5a菌株,筛选阳性克隆.通过对阳性菌落质粒进行PcR予以证实.最终成功筛选并克隆到日本血吸虫体壁候选抗原基因.