盐酸胍诱导牛血红蛋白变性的微量热研究

应用恒温微量热技术,对盐酸胍与牛血红蛋白在30℃水溶液中的结合作用及造成牛血红蛋白变性的过程进行研究,并根据简单结合模型,计算了它们之间的结合常数、结合自由能.用变性中点的直线外推方法求出了表观变性焓.实验结果表明,盐酸胍诱导牛血红蛋白变性的相互作用分为3个阶段.牛血红蛋白在盐酸胍溶液中的变性焓在pH5.21时为200 kJ·mol-1,在pH6.70时为540 kJ·mol-1,在pH8.03时为120kJ·mol-1.牛血红蛋白在pH6.70时,即在等电点时,较稳定.     

牛血清蛋白在NaCl水溶液中相互作用的研究

盐析法由于其价格低廉、方法简单,是实验室及生物制品工业中分离纯化蛋白质(包括酶类)的重要方法,影响蛋白质盐析行为的首先是蛋白质的性质,其次是盐的性质,溶液中盐的浓度、pH值及温度,我们利用改进的Viker渗透压计在25℃测量了不同NaCl浓度及不同pH值下牛血清蛋白的渗透压,并根据McMil—     

盐酸胍诱导的蛋白质变性现象研究

考虑常用变性剂盐酸胍（GuHCl)分子与蛋白质主链上的相邻二肽形成双氢键，利用吸附反应动力学方法，得到了描述蛋白质变性物理参量与盐酸胍浓度之间关系的式。结果表明计算得到的理论值与实验值符合良好，说明所给出的蛋白质分子与盐酸分子相互作用模型，能够较好地描述盐酸胍诱导的蛋白质变性现象。     

α-氨基酸在盐酸胍水溶液中的流动活化参数

在前期工作中，我们研究了α－氨基酸在尿素［１］和盐酸胍［２］水溶液中的体积性质．作为水溶液中氨基酸与蛋白质的变性剂相互作用系列研究的一部分，本文报道了不同温度下（２７８．１５，２８８．１５，２９８．１５，３０８．１５Ｋ），甘氨酸、ＤＬ－α－丙氨酸，Ｄ...     

温度对α-氨基酸在盐酸胍水溶液中体积性质的影响

温度对α－氨基酸在盐酸胍水溶液中体积性质的影响颜振宁王键吉卓克垒卢锦梭（河南师范大学化学系，４５３００２，新乡；第１作者２７岁，女，博士生）蛋白质在水溶液中的变性是一个没有被完全了解的生物过程，由于构成蛋白质的结构单元是氨基酸，因此研究变性剂与氨基酸...     

鱼腥草中酮类活性成分与牛血清蛋白相互作用特征

运用荧光光谱和紫外光谱,分别在血清蛋白的等电点以下(pH3.78)和以上(pH7.40),研究了鱼腥草的活性成分甲基正壬酮(2UC)和十二酮(2DC)与牛血清蛋白(BSA)的相互作用.结果显示在等电点前后,(2UC)和(2DC)与BSA的结合呈现可饱和模式,但对荧光的猝灭模式不同,而且结合的饱和浓度也不同.285 K和pH7.40下,二者在浓度较低时呈现明显的正协同作用,而在301 K时没有这种现象.计算了不同温度下结合的热力学参数△H0,△G0,△S0,结果显示疏水作用是主要的作用力.猝灭常数显示出酸度、温度和烃链长度的依赖性.考察了常见金属离子和中药活性成分对结合的影响.结果显示当共存锌离子、ANS和甘草次酸时,两种成分的加入会引起最大荧光发射波长的强烈兰移.试验表明脂肪酸2结合位(fatty site 2)是它们的一个结合位点,而药物结合位点Ⅱ(siteⅡ)可能是它们的另一结合位点.     

猕猴桃蛋白酶在胍中“慢构象快活力变化”现象

比较了猕猴桃蛋白酶(Actinidin)在盐酸胍中变性时的荧光变化与活力变化的关系。当胍浓度为0.1 mol/l时,酶的最大荧光发射波长λ_(max)不变,荧光强度上升。此时酶被激活,活力提高25％,激活速度比变性速度快5.0倍。胍浓度逐渐增大,酶λ_(max)略红移,4.0 mol/l时达336 nm。但荧光强度降低,酶表现为快相和慢相失活的二个一级反应,失活速度常数比变性速度常数快 1～3个数量级。Actinidin 的激活与失活现象显示这可能与活性部位相关的 Trp 微环境的构象变化有关。胍变性结果指出 Actinidin 构象变化速度小于活力变化速度,这代表酶变性反应时慢构象变化快活力变化的一种模式。     

牛血清蛋白在(NH4)2SO4水溶液中相互作用的研究

蛋白质在水溶液中的盐析行为在微观本质上是由蛋白质分子间相互作用引起的分子聚集过程．它取决于蛋白质分子间的各种相互作用的相对大小和盐对其相互作用的影响,也与溶液的pH值和温度等有关．通过热力学的方法研究蛋白质在溶液中的相互作用,有助于深入理解各种因素对盐析行为的影响．我们利用改进的Viker渗透压计测量了25℃下不同(NH4)2SO4浓度和不同pH值时牛血清蛋白的渗透压,在此基础上根据MeMillan-Mayer理论计算出牛血清蛋白的渗透第二维里系数B2．     

异烟肼与牛血清蛋白相互作用的光谱研究

用紫外吸收光谱和荧光光谱研究了异烟肼(INH)与牛血清蛋白(BSA)的相互作用.荧光光谱表明,INH对BSA的荧光有较强的猝灭作用.通过结合常数和结合位点数的计算,证明这种荧光猝灭机理符合静态机制,INH和BSA形成了1∶1稳定复合物;考察不同温度和酸度下的猝灭作用,进一步证实其静态猝灭行为和疏水作用机制.紫外吸收光谱和同步荧光光谱表明,INH与BSA的相互作用使蛋白质的分子构象发生变化,而同步荧光光谱显示两者的结合位点更接近于色氨酸.     

染料分子与牛血清蛋白相互作用的研究

应用定量结构-性质关系技术,通过对染料分子与牛血清蛋白的增强共振散射光谱的分析,研究了它们之间的相互作用.经过遗传算法对染料分子结构描述符的筛选,针对最大散射波长及其强度,分别采用了3个及6个染料分子结构描述符建立了两个定量结构-性质关系模型,进而推测染料分子与牛血清蛋白主要为分子间非化学键作用,染料分子被吸附于牛血清蛋白的表面.     

荧光法研究6-硫鸟嘌呤和牛血清蛋白之间的相互作用

利用荧光光谱技术研究了6-硫鸟嘌呤(6-TG)和牛血清蛋白(BSA)之间的相互作用.6-硫鸟嘌呤对牛血清蛋白荧光的猝灭机制属于形成复合物的静态猝灭过程.在22,32和42℃下6-硫鸟嘌呤和牛血清蛋白之间的结合常数K分别为8.07×104,9.83×104和12.04×104L/mol,结合位点数n分别为1.002,1.022和1.039.3个温度下的热力学参数变化值(AH,AG和AS)表明,结合反应的主要作用力类型为疏水作用力,熵变化驱动该结合反应而焓变化不利于该结合反应.根据Forster非辐射能量转移理论,测得6-TG与BSA之间的结合距离r分别为3.44,3.52和3.54 nm(22,32和42℃下).根据牛血清蛋白的结构,可以推测牛血清蛋白与6-硫鸟嘌呤结合的位点在ⅡA亚结构域,靠近Trp 214的区域.     

碱性介质中茜素黄R与牛血清蛋白相互作用研究

在碱性条件下,采用紫外—可见分光光度法研究了茜素黄R(Alizarin Yellow R)与牛血清白蛋白(BSA)的结合反应。研究表明,AYR—BSA二元配合物的最大吸收波长为386 nm,比AYR紫移约108 nm;建立了碱性条件下以AYR测定蛋白质的光谱分析法,对样品分析表明,回收率为96.4%~106.6%,相对标准偏差为0.28%~1.13%;采用双波长法、平衡透析法和单波长法对AYR与BSA的相互作用的研究结果基本一致,在386 nm处,AYR—BSA配合物的结合比为nAYR:nBSA=5 1,摩尔吸光系数ε=9.12×103L.mol-1.cm-1,相互作用的条件平衡常数K=8.13×105。     

盐酸在氨基酸水溶液中热力学性质的研究2丙氨酸,缬…

本文测定了电池Ｐｔ，Ｈ２（ｇ，１ａｔｍ）ＨＣｌ（Ｍ）＋氨基酸（ｍＡ）＋Ｈ２Ｏ（Ａｇ－ＡｇＣｌ在２９８．１５，３０３．１５，３０８．１５，３１３．１５，３１８．１５Ｋ时电动势，这里氨基酸分别为丙氨酸（Ａｌａ）和缬氨酸（Ｖａｌ）求出Ａｇ－ＡｇＣｌ电极在不同氨基酸水溶液的标准电极电势Ｅ°ｍ计算了ＨＣｌ从水到不同氨基酸溶液中的迁移热力学函数，着重讨论了溶剂结构的变化的情况，提出了氨基酸水溶液中存在着两种不     

大黄酚与牛血清蛋白相互作用的光谱和分子模拟研究

在模拟生物体生理条件下,利用荧光光谱、同步荧光光谱、分子模拟方法研究了不同温度下大黄酚与牛血清蛋白(BSA)之间的相互作用.实验结果表明,静态猝灭是导致大黄酚对BSA荧光猝灭的主要原因.通过计算热力学参数,可知该药物与蛋白的相互作用是一个熵增加和吉布斯自由能降低的自发过程,并由此推断大黄酚与BSA之间的作用力是以疏水相互作用为主.分子模拟研究表明:大黄酚能够进入BSA的疏水空腔,它们之间的相互作用不仅存在疏水作用,而且还有氢键作用,这与热力学分析结果基本一致.     

高效液相色谱分离分析工业灭菌净中盐酸吗啉胍的研究

采用ＨＰＬＣ技术对工业灭菌净中盐酸吗啉胍的分离和定量方法做了探讨，采用非极性Ｃ１８作为固定相，极性溶剂甲醇－水（９：１）作为流动相，建立了一个适宜于工厂质量控制的分析方法，盐酸吗啉胍的检测限为４８ｎｇ；并且考察了流动相的组成，流速，进样体积等分离灭菌的色谱分辩率，峰形的影响。本法用于产品分析，结果令人满意。     

盐酸在氨基酸水溶液中热力学性质的研究2丙氨酸、缬氨酸＋盐酸＋水体系

本文测定了电池Ｐｔ，Ｈ２（ｇ，ｌａｔｍ）｜ＨＣｌ（ｍ）十氨基酸（ｍＡ）＋Ｈ２Ｏ｜Ａｇ－ＡｇＣｌ在２９８．１５，３０３．１５，３０８．１５．３１３．１５，３１８．１５Ｋ时的电动势，这里氨基酸分别为丙氨酸（Ａｌａ）和缬氨酸（Ｖａｌ），求出了Ａｇ—ＡｇＣｌ电极在不同氨基酸水溶液中的标准电极电势Ｅｍ０，计算了ＨＣＩ从水到不同氨基酸溶液中的迁移热力学函数．着重讨论了溶剂结构的变化情况．提出了在氨基酸水溶液中存在着两种不同的结构形式，并从理论上进行了讨论．     

新型除草剂(ZJ0777)与牛血清蛋白结合作用的荧光光谱研究

该实验用荧光猝灭光谱和同步荧光光谱研究了在不同温度下,新型除草剂N-(2-溴苯基)-2-(4,6-二甲氧基-2-嘧啶氧基)苄胺[ZJ0777][C19H18BrN3O3]与牛血清蛋白(BSA)结合反应的光谱行为.发现BSA与ZJ0777发生反应生成了新的复合物,属于静态荧光猝灭,由Lineweaver-Burk双倒数方程求出了不同温度下反应时复合物的形成常数KLB(287 K:1.955×103 L·mol-1;298 K:2.441×103L·mol-1;308 K:3.041×103 L·mol-1)及对应温度下结合反应的热力学参数(△H=15.566 kJ·mol-1;△S=117.24,117.08,117.22 J·K-1;△G=-18.082,-19.325,-20.537 kJ·mol-1),证明二者主要靠疏水作用力结合,结合点位为1.同时利用同步荧光光谱,考察了ZJ0777对BSA构象的影响.     

荧光法测定消毒剂中盐酸聚六亚甲基胍

建立了荧光法测定消毒剂中盐酸聚六亚甲基胍（PHMG-HCl）的方法．PHMG-HCl在碱性条件下与茚三酮反应生成荧光产物,测定其荧光光谱,最大激发波长为405nm,最大发射波长为500nm.在有两性表面活性剂存在时,体系的荧光强度大大加强,并与PHMG-HCl的质量浓度在2.010-4～2.510-1g/L范围内呈线性关系.相关系数为0.9993;检出限为 4.010-5g/L．用该方法测定了消毒剂中PHMG-HCl的含量,获得满意结果．该方法操作简便,具有较高的灵敏度和准确度．