苏云金杆菌杀虫增效作用研究进展

苏云金杆菌是一种在自然界中广泛分布的好气芽孢杆菌，由于其对昆虫的特异性毒杀作用而广泛用于农业和卫生害虫的生物防治中。但由于野外应用防效不稳定、残效期短、杀虫速度慢、对某些目标害虫不敏感，影响其作为生物杀虫剂的应用。通过特异性高毒力菌株的筛选、菌株的遗传改良、剂型的改良、各种增效剂和增效因子采用等方法，以提高苏云金杆菌制剂的杀虫活性和野外应用防治效果。本文在讨论苏云金杆菌的杀虫毒素蛋白及其作用方式的基础上，介绍了不同增效方式及其杀虫活性的影响的研究进展。     

苏云金杆菌晶体蛋白Cyt1A对营养期杀虫蛋白Vip3A杀虫毒力的影响

为检测苏云金杆菌晶体蛋白Cyt1A对Vip3A表达和杀虫活性的影响,将p20和cyt1A基因与vip3A基因连接构建了重组质粒pHVC20,然后电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株CryB中进行了共表达,以单独表达Vip3A蛋白的CryB(pHPT3)作为对照菌株。Westernblot结果显示,Vip3A蛋白在CryB(pHVC20)菌株中的最大表达量约为在CryB(pHPT3)菌株的2倍,这可能是由于前者中的辅助蛋白P20增加了Vip3A表达量的缘故,晶体蛋白Cyt1A的存在对Vip3A的正常表达没有影响。生物测定结果表明,CryB(pHVC20)和CryB(pHPT3)菌株对斜纹夜蛾初孵幼虫的LC50值分别为10.62!g/ml和78!g/ml,前者的毒力比后者提高了6倍,这表明Cyt1A蛋白和Vip3A蛋白对目标昆虫的毒力可能存在着协同增效作用。     

Cry1A型杀虫晶体蛋白活性区的空间结构比较分析

对9种代表性Cry1A型杀虫晶体蛋白成员进行活性区空间结构的同源模建与比较分析.分析结果表明:Domain Ⅰ和Domain Ⅲ相对保守,其中,Domain Ⅰ整体走向及结构基本重叠,只有Cry1Aa和Cry1Af多了一个螺旋;Domain Ⅱ的主要差异体现在loop上;将Domain Ⅲ结构一致的成员Cry1Ab,Cry1Ad,Cry1Ae和Cry1Af归为一个亚型,其他5种成员归为另一个亚型.研究确定了影响Cry1A型杀虫晶体蛋白结构差异的关键氨基酸及关键结构片段.     

新型杀虫晶体蛋白Cry7Ab4空间结构的计算机解析

采用一级结构分析,二级结构预测及同源比对建模的方法,模拟出新型杀虫晶体蛋白Cry7Ab4的空间结构,并进行动力学优化.结合其杀大猿叶甲活性数据与蛋白结构比对分析,发现Cry7Ab4与Cry7Aa1的活性差异主要归因于α3,α4上疏水性氨基酸的不同.     

利用转座子Tn917构建杀虫Bt工程菌

利用链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）的转座子Ｔｎ９１７衍生载体ｐＴＶ１Ｔｓ将苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,Ｂｔ）的２个杀虫晶体蛋白（ＩＣＰｓ）基因整合进Ｂｔ染色体上,转座频率达５９×１０－５．将对双翅目昆虫有毒效的ＩＣＰｓ基因ｃｒｙ１１Ａ和广谱溶细胞且对蚊子等有毒效的ｃｙｔ１Ａ基因分别克隆到ｐＴＶ１Ｔｓ上,用高压电激法转入对鳞翅目昆虫有毒效的库斯塔克亚种（Ｂｔｓｕｂｓｐｋｕｒｓｔａｋｉ）ＨＤ１菌株,分别筛选到在染色体基因组上整合进这２个基因的突变株ＨＴ２６和ＨＴ４５,整合基因均能在这２株工程菌中获得表达并形成正常的伴孢晶体．生物测定结果显示,表达的Ｃｒｙ１１Ａ和Ｃｙｔ１Ａ晶体蛋白有很高的杀虫活性,对库蚊三龄幼虫的ＬＣ５０分别为８３ｎｇ／ｍＬ和６４ｎｇ／ｍＬ,同时Ｃｙｔ１Ａ晶体蛋白对培养的昆虫细胞有较强的溶解作用．其结果为创造新型基因工程苏云金杆菌杀虫剂提供了新的重要途径     

苏云金杆菌杀虫晶体蛋白的crylC基因

目前,有8种crylC类基因已被克隆,其主要分布在杀虫亚种和鲇泽亚种.本文对杀虫晶体蛋白CrylC的结构与功能、作用方式、抗性问题及基因改造等方面作一综述,还就存在的问题与前景进行探讨.     

饲料中添加Bt对受免黄河鲤白细胞吞噬活性及血清溶菌酶的影响

将苏云金芽胞杆菌按1.0×1011、3.0×1011、5.0×1011cfu/kg 3个浓度添加在鱼用全价颗粒饲料中,投喂经嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)疫苗免疫(A0～A3)和未免疫组(B0～B3)黄河鲤鱼,分别于0,15,30,40 d时检测各组鲤鱼白细胞吞噬活性、血清溶菌酶活性结果表明:添加苏云金芽胞杆菌可使黄河鲤血液中白细胞吞噬活性和血清溶菌酶活性明显提高,添加组与对照组差异显著(P<0.05),添加浓度越高血液白细胞活性和溶菌酶活性越强.免疫组与未免疫组白细胞吞噬活性差异不显著(P>0.05),而溶菌酶活性差异显著(P<0.05).在停止投喂后10 d,白细胞活性、血清溶菌酶活性逐渐下降,但差异不显著(P>0.05).     

苏云金芽孢杆菌cyt1Aa基因在拟步甲亚种菌株中的表达及重组菌株杀虫活性研究

将含苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis subsp.israelensis,简称Bti)cyt1Aa基因的质粒电激转化至对鞘翅目害虫有专一活性的Bt拟步甲亚种(Bacillus thuringiensis subsp.tenebrionis,简称Btt)菌株中进行表达,获得重组菌株Btt-WF45。对表达产物进行SDS-PAGE分析,显示Cyt1Aa蛋白获得了大量表达。生物测定结果表明,Btt-WF45对鞘翅目小圆叶甲(Plagiodera Redtenbacher)幼虫没有毒力,对致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)的毒力比对照菌株4Q7-WF45高0.33倍,对白纹伊蚊(Aedes albopictus)的毒力比4Q7-WF45高0.63倍。由于在重组菌株Btt-WF45中Cry3A蛋白的表达量太低,所以在该结果中未能显示Cyt1Aa蛋白与Cry3A蛋白是否存在协同增效作用。     

苏云金芽孢杆菌工程菌BM B_(20-4)的杀虫晶体蛋白检测及毒力测定

苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白由单基因编码,经过遗传操作,构建成BM B 20-4工程菌.本研究对工程菌BM B 20-4进行了杀虫晶体蛋白检测和发酵液毒力测定.结果表明:工程菌BM B 20-4杀虫晶体蛋白质含量比天然菌株提高44%,毒力效价显著提高,对小菜蛾提高了0.72倍,对棉铃虫提高了0.75倍.     

添加剂对苏云金杆菌杀虫效果的影响

定了碱性、酸性和中性化合物及蛋白质助溶剂和芳香族化合物等 5类物质对 Bt杀虫效果影响 ,结果表明有 30种物质能促进 Bt杀小菜蛾的效果 ,其中碱性物质 11种 ,酸性物质 3种 ,中性盐 8种 ,蛋白质助溶剂5种 ,芳香族化合物 3种。在各类不同的化合物中以硼酸和 K2 CO3 对 Bt杀虫效果的促进作用较强。     

鄂尔多斯半日花水煮膏对小菜蛾的毒杀作用

用鄂尔多斯半日花（Helianthemum ordosicum）水煮膏配制不同浓度的溶液,采用微量点滴法研究其对小菜蛾幼虫的触杀活性,以叶片浸毒法研究其胃毒活性．结果表明,鄂尔多斯半日花水煮膏溶液对小菜蛾幼虫有很好的触杀和胃毒作用,经25g／L溶液处理,7d后的矫正死亡率均达到70％以上．     

小菜蛾生态控制系统设计及其评价

运用种群系统的原理与方法,组建了小菜蛾生态控制体系;运用生命表技术,采用种群控制指数(IIPC)评价了系统对小菜蛾的控制效果。     

小菜蛾对毒死蜱的抗性与饲养温度关系的研究(Ⅰ.不同饲养温度下的小菜蛾对毒死蜱敏感性的变化)

不同饲养温度下的小菜蛾 3龄幼虫对毒死蜱的敏感性发生了变化。在 10 - 30℃范围内 ,低温饲养的小菜蛾比高温饲养的小菜蛾更为敏感。但是变温条件下饲养的小菜蛾 3龄幼虫经 5℃处理温度后 ,对毒死蜱的敏感性减弱 ,甚至较 35℃恒温下饲养的小菜蛾的敏感性更低。     

天葵几种粗提物对菜青虫、小菜蛾的拒食活性筛选

本文研究报道了天葵几种粗提物对菜青虫、小菜蛾的拒食活性筛选。经石油醚、氯仿、丙酮粗提物的拒食活性比较,结果表明石油醚粗提物的拒食效果较好,石油醚粗提物经进一步分离得油状和结晶粗提物,二者经拒食活性比较,结果表明石油醚油状粗提物的活性较强。