苏云金杆菌4.0718菌株的发酵上清液中超氧化物歧化酶研究

将苏云金杆菌4.0718进行液体发酵培养，从发酵上清液中可以抽提得到SOD。经（NH4）2SO4分级沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤和HPLC3步纯化得到均五性SOD，其比活力达1040U/mg。经检测该酶属Fe-SOD，分子量为39486D，由2个相同亚基组成，其N-末端氨基酸为丙氨酸，讨论了发酵上清液中SOD与晶体蛋白杀虫毒力的关系。     

苏云金杆菌发酵监测的初步研究

跟踪检测了苏云金杆菌发酵过程中发酵液pH值、OD595 nm值、非极性物质、可溶性蛋白质含量等的变化，并比较了伴孢晶体不同状态下的OD值。在此基础上进行了探讨，并进一步提出了发酵过程的在线检测方案。     

苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白提取方法比较研究

采用液体双相分层法和等电点沉淀法提取苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白.原子力显微镜观测,发现液体双相分层提取的晶体蛋白具有完整典型的晶体结构;等电点法提取的得率高,不能检测到完整的晶体结构.聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,等电点法提取的蛋白质含量是液体双相法提取的蛋白含量的1~2倍.将2种方法提取的晶体蛋白对初孵棉铃虫幼虫生物测定均表现杀虫生物活性,经统计分析,液体双相法提取的蛋白质生测毒力比等电点法的高1.5~3倍.     

苏云金芽胞杆菌高效电转化方法的建立

电转化已经成为苏云金芽胞杆菌工程菌构建过程中非常重要的一种外源基因导入方法.高效率的电转化方法将加速这类研究进展.通过对培养基、培养时间、感受态细胞制备、电转化缓冲液、电压参数的优化,建立一种高效的苏云金杆菌电转化方法.苏云金杆菌生长在含有0.5 mol/L山梨醇的BHI培养基中,30℃振荡培养至OD600值达到0.6～0.8,细菌细胞经1 g/L蛋白酶K在37℃处理20 min,然后用电转化缓冲液洗涤2遍,设定电压为1 800 V,电击1次.利用该方法,pHT315质粒在苏云金杆菌中的转化效率大幅提高.     

一种简便的石斛DNA提取方法

对石斛兰基因组DNA的提取方法进行了改良,提出一种简便、实用的DNA提取方法,经紫外检测、电泳检测及PCR检测,结果表明所得DNA的产量和纯度能够满足分子生物学研究操作的要求．     

重组质粒DNA的提取和纯化方法研究

质粒ＤＮＡ的提纯是现代分子遗传学和基因工程的重要技术，本实验对质粒ＤＮＡ的提取和纯化方法进行了比较研究，并通过改进，建立了简便，快速提取和纯化质粒ＤＮＡ的方法，利用此法所提质粒ＤＮＡ收率大，纯度高，能适于细菌转化，细胞转染及酶切分析等进一步实验研究。     

一种节肢动物模板DNA的快速提取方法

简要介绍一种 高效、快速提取节肢动物模板DNA的方法，提取的DNA无污染物产生，完全能满足RAPD等研究的需要。     

一种适合抗癌药紫杉醇产生菌AFLP分析的DNA提取方法

比较研究了2种常规的DNA提取方法及一种新改进的抗癌药紫杉醇产生菌DNA提取方法.结果表明,CTAB提取法DNA产量低,多糖和蛋白质含量高;高盐低pH法(SD S法)提取DNA的产量较高,蛋白质和多糖含量高,需要进一步去除;新改进的DNA提取方法,DNA产量极高,而且蛋白质含量和多糖含量也低,适合AFLP分子标记技术对该菌的分子生物学研究.     

ANN-CE:一种预测DNA结合位点的改进神经网络方法

基于误差平方和最小原则的神经网络方法并不适于解决DNA结合位点的预测问题,提出了一种改进的神经网络方法(ANN-CE)被用于对DNA结合位点进行预测.这是一个以交叉熵函数为目标函数的三层反向传播神经网络.计算结果表明,与基于误差平方和最小原则的同规模BP网络相比,其对DNA结合位点预测的敏感性Sn(sensitivity)和特异性Sp(specificity)可分别提高11.40%和11.91%.     

一种改进的小叶锦鸡儿叶总RNA提取方法

针对旱生植物小叶锦鸡儿富含蛋白物质及多糖类物质的特点,在常规Trizol方法的基础上进行改进,摸索出一种小叶锦鸡儿叶总RNA提取的方法．     

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体中20-kb DNAs上染色体基因的鉴定

已有的研究表明苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)4.0718菌株菱形晶体中含有与原毒素紧密结合的20-kb DNAs,利用PCR-RFLP分析发现在这些20-kb DNAs上含有cry1Aa、cry1Ac、cry2Aa和cry2Ab基因.本研究利用特异引物从4.0718菌株中20-kb DNAs上分别扩增出带有自身调控序列的cry1Ac和cry2Aa基因,并将其分别电转至Bt无晶体菌株Cry-B中获得重组菌株Cry-B(pHC42)和Cry-B(pHC39).SDS-PAGE和透射电镜分析表明这两种重组菌株能够分别产生由130-kDa的Cry1Ac原毒素形成的菱形晶体以及由65-kDa的Cry2Aa原毒素形成的方形晶体.毒力生测的结果显示,这两种菌株的表达产物对棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫具有预期的杀虫效果.重组菌株分别形成的两种晶体经不同的缓冲液溶解后能释放出与20-kb DNAs紧密结合的原毒素,同时在20-kb DNAs上均可检测到源于Bt染色体的spo0A和nprA基因片段.