玻璃纤维素壳聚糖膜固定乙酰胆碱酯酶的研究

以玻璃纤维素壳聚糖膜为载体,戊二醛为交联剂,进行乙酰胆碱酯酶(AChE)的固定,并对固定化酶的理化性质进行研究.结果表明,乙酰胆碱酯酶的较佳固定化条件为:150 U/mL AChE液50μL,体积分数为5%的戊二醛溶液50μL,质量分数为1%的BSA100μL,pH值为8.0的0.2 mol/L PBS缓冲液,配制成1 mL酶液,玻璃纤维素壳聚糖膜浸于此酶液4℃固定8 h.固定化酶的最适作用温度37℃,最适pH 8.0,能够重复利用4次以上,表明该固定化酶的稳定性较高.     

木素过氧化物酶及乙二醛氧化酶在壳聚糖上的共固定化

选取壳聚糖-戊二醛共价法对黄孢原毛平革菌所产的木素过氧化物酶(LiP)和乙二醛氧化酶(GLOX)同时进行了共固定化研究,LiP和GLOX的酶活回收率分别达到了81.4%和45.2%。实验表明:采用先活化载体后共价结合酶的固定方法比活化载体-酶固定化同时进行效果好;在选择活化剂种类上,戊二醛优于乙二醛和不加活化剂;最佳加酶量为30ml/0.4g载体;最佳戊二醛浓度为0.2%;戊二醛最佳固定化时间均为10h。     

有机磷生物传感器的研制

有机磷生物传感器对于环境分析十分必要.利用乙酰胆碱酯酶与有机磷农药之间的特殊的亲和力,以乙酰胆碱酯酶为固定相,采用石英晶体用来做载体的材料,研制有机磷传感器.初步得到酶固定的最佳pH值及其浓度环境为pH=7,乙酰胆碱酯酶浓度为C=0.0133mol.l-1.并对敌百虫溶液进行测定,证明了pH值和浓度条件的合理性.     

用有机相提高共价固定化胰蛋白酶活力

蛋白质共价固定时,容易发生由于共价化学反应而引起蛋白质构象的不可逆变化而造成蛋白活性丧失的现象,该问题在诸如药物修饰、蛋白质芯片、酶生物电极等制备中十分重要.本研究以壳聚糖为载体,以胰蛋白酶为研究对象,比较了水相与多种有机相条件下的共价固定化酶的动力学特性.结果发现,固定化酶特征常数Km值:所有的有机相条件下共价固定的胰蛋白酶均优于传统的水相中共价固定的该酶,且更接近于游离酶的Km值(水相中固定的胰蛋白酶其Km是1,4-二氧六环中固定的胰蛋白酶的3.69倍),提示有机相中固定的胰蛋白酶比水相中固定的该酶更接近于酶的天然构象;与水相中共价固定的胰蛋白酶相比,所有有机相中共价固定的胰蛋白酶均获得了更高的转换数Kcat(乙酸乙酯中固定的胰蛋白酶其转换数Kcat是水相中固定的该酶的58.64倍),即有机相中共价固定的胰蛋白酶均显示出比传统的水相中共价固定的该酶更高的催化效率.本研究表明,利用酶蛋白在有机相中变得刚硬的特性,在有机相中对某些酶进行共价固定化修饰有利于维持酶蛋白天然构象,一定程度上能够克服传统水相中进行共价固定化过程中造成的酶变性失活现象.     

表面吸附固定化酶及其应用

研究用无机物载体(活性炭、分子筛、硅胶)表面吸附固定植物酶(菠萝酶,木瓜酶)技术,以及固定化酶的活性寿命及其催化效能。将实验制得的固定化酶多次反复应用于催化胶液水解反应中。反应结果证实表面吸附固定酶在技术上是可行的,经济上是合理的。另外还采用“补酶”的方法,使吸附酶趋向平衡,以减少该固定化酶中酶的脱落。初步探讨了用与水不溶支撑体的共价结合法固定酶技术。     

两步活化法制备葡萄糖氧化酶电极的研究

采用多步活化法制备的聚乙烯醇膜 ,可在温和的条件下实现酶的固定化。用对甲基苯磺酰氯处理聚乙烯醇膜 ,与二乙胺反应引入氨基 ,再用戊二醛处理 ,最后用取得的活化膜载体可在温和条件下固定葡萄糖氧化酶。所得酶膜与碘离子选择性电极组装成的葡萄糖氧化酶电极 ,测定葡萄糖浓度时 ,线性响应范围为 1 6× 10 - 4～ 5 8× 10 - 3mol L。     

凝胶法固定乙酰胆碱酯酶的研究

以海藻酸钠为载体包埋固定乙酰胆碱酯酶(AChE),考察了影响酶固定化的重要因素,获得了最佳固定化条件。实验结果表明,将1U乙酰胆碱酯酶,2μLφ(戊二醛)为5%的戊二醛,1μL10g/L的牛血清白蛋白(BSA),与30g/L的海藻酸钠配成300μL的酶溶液,滴入20g/L的氯化钙溶液中,3℃下固定8h,制备的凝胶酶珠机械强度高,活力重现性好。在20g/L的氯化钙溶液中3℃下保存40d,活力基本不变,相对标准偏差为5.53%～6.82%。     

小菜蛾Plutella xylostella羧酸酯酶、酰胺酶及乙酰胆碱酯酶的研究

研究结果表明,小菜蛾(Plutella xylostella)乙酰胆碱酶、酰胺酶的最适pH值分别为8.0和8.5。pH值对闳酸酯酶活力影响较小,酰胺酶和羧酸酯酶反应速度在反应开始60钟内,仍在线性范围,乙酰胆碱酯酶反应速度在反应开始的8分钟内呈线性关系。羧酸酯酶、酰胺酶和乙酰胆碱酯酶的Vmax分别为551.81(nmol/mg,mln)、5.25×10~(-4)(μmol/mg.min)和20.36(nmol/mg.min);km分别为5.52×10~(-5)(mol)、1.18×10~(-3)(mol)和8.33×10~(-3)(mol)。     

硅胶吸附-交联脂肪酶的研究

以活化硅胶作为固定的载体,采用吸附-交联法研究了脂肪酶的固定化.考察了3种方式对目标酶固定化的影响,并进一步探究了其最优固定条件.结果表明,固定方式的不同对目标酶的固定效果有着较大的影响,活化硅胶先与酶液混合吸附一段时间后加入交联剂戊二醛所获得的酶活回收率最大.优化后的固化条件为:给酶量是3 mg/mL,固化温度30℃...     

以天然纤维织物为载体固定化脂肪酶

针对天然纤维载体表面氨基和羧基丰富的特点,选取戊二醛和碳二亚胺分别对此二种基团进行预活化,然后共价固定化脂肪酶Candida sp.99-125。考察了pH、温度等对不同载体固定化酶与游离酶的酶活力影响。结果表明,固定化后的脂肪酶对于酸碱的耐受范围变宽,最适pH向碱性方向移动,对温度适应范围也变宽。在相同的保存条件下,固定化酶较游离酶能更好的保持酶活力。在酯化反应中,活化后的载体对酶活稳定性有更明显的改善。     

Primary structure of Torpedo californica acetylcholinesterase deduced from its cDNA sequence

Acetylcholinesterase, an essential enzyme of the nervous system, rapidly terminates the action of acetylcholine released into the synapse. Acetylcholinesterase is also found (in lower abundance) in extrajunctional areas of muscle and nerve and on erythrocyte membranes. Hydrodynamic analyses of the native enzyme and characterization of its dissociated subunits have revealed multiple enzyme forms which can be divided into two classes: dimensionally asymmetric forms which are usually found within the synapse and contain a collagen-like structural subunit disulphide-linked to the catalytic subunits; and globular forms which appear to be widely distributed on the outer surface of cell membranes. Both forms have been characterized in the ray Torpedo californica and, although their catalytic behaviours seem to be identical, they differ slightly in amino-acid composition, peptide maps and reactivity with certain monoclonal antibodies. Here, we report the complete amino-acid sequence of an acetylcholinesterase inferred from the sequence of a complementary DNA clone. The 575-residue protein shows significant homology with the C-terminal portion of thyroglobulin.     

蚯蚓纤溶酶的分离及其生物学特性

经过分离纯化，从人工养殖的赤子爱胜蚓中提取出两种既有纤维蛋白溶酶原激活因子活性又能直接溶解纤维蛋白的组分。ＰＡＧＥ检测各为一条区带，证明已达电泳纯。对这两组分的生物学性质进行了研究，包括分子量、酶活力，Ｎ－末端氨基酸残基，氨基酸组成，温度的稳定性及对苯甲酸精氨酸乙酯（ＢＡＥＥ）的酶促反应动力学特性。还分析了其中一个组分（ＢⅡ）从Ｎ末端开始的 ２５个氨基酸残基序列。     

蚯蚓活动对高羊茅修复土壤芘污染的强化作用

为了探讨土壤动物在植物修复多环芳烃类有机污染物过程中的作用,采用盆栽试验法,对比研究了蚯蚓(Pheretimasp.)活动对高羊茅(Festuca arundinacea)修复土壤芘污染的影响效应.在72d的试验期间,蚯蚓活动促进了芘污染土壤(20.24～321.42mg.kg-1)中高羊茅的生长,其根冠比明显增大.试验结束时,种植高羊茅的土壤中芘的去除率高达55.89%～82.01%,其平均去除率(69.91%)比无蚯蚓活动的土壤-植物(高羊茅)系统(60.06%)提高9.85%,比无植物对照组(18.24%)提高50.67%.各种生物、非生物修复因子中,植物-微生物交互作用(plant-icrobial interaction)对芘去除的贡献率(44.08%)最为突出,比无蚯蚓活动时(37.54%)提高6.53%.说明蚯蚓活动可强化土壤-植物系统对土壤芘污染的修复作用.     

施用有机垃圾肥料后林地蚯蚓数量变化跟踪调查

为研究施用有机垃圾肥料对林地土壤动物蚯蚓的影响,对上海郊区3个基地施用不同量有机垃圾肥料的林地中蚯蚓的数量和组成进行了调查。研究发现,赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)和腔蚓(Metaphire sp.)两种蚯蚓数量比约为1.78:1。在老港和金山基地中,蚯蚓的数量随着撒施有机垃圾肥料量的增加而增加,而在沟施的操作下蚯蚓数量的变化起伏较大,这一变化与有机垃圾肥料在林地沟施不均匀密切相关。施用有机垃圾肥料后,蚯蚓数量的增加会导致生态系统地下部分物质和能量循环产生变化; 在蚯蚓活动和取食过程中,通过其对有机物质的分解转化,会促进氮、磷循环,从而给林地生态系统带来较多的有利影响。     

蚯蚓对松嫩草原主要凋落物分解作用实验研究

采用室内模拟的方法,研究了蚯蚓对松嫩草原冰草(Agropyron cristatum)、朝鲜碱茅(Puccinellia chinam poensis)、羊草(Leymus chinensis)和贝加尔针茅(Stipa baicalensis)凋落物叶和茎的分解作用及蚯蚓在各种凋落物分解过程中的生长和代谢情况.结果表明...     

蚯蚓在不同污水污染土壤中生长繁殖的状况

本文研究蚯蚓在不同生活污水污染土壤中的生长与繁殖情况,发现随着实验时间的延长,蚯蚓的存活率不断下降。洗涤灵污水污染土壤中蚯蚓的存活率整体上高于洗衣粉污水。洗涤灵污水对蚯蚓平均体重的影响低于洗衣粉污水。洗涤灵污水污染土壤中蚯蚓的繁殖率整体上比洗衣粉污水的要高。两种污水污染土壤中蚯蚓的存活率、增重和繁殖率都是随着污水浓度的增大而降低。本研究可为利用蚯蚓对生活污水污染土壤的生物修复提供理论参考。     

溴苯腈对赤子爱胜蚓的急性毒性效应研究

采用滤纸接触试验和人工土壤试验方法,分别以48 h、7d和14 d为试验周期,研究农药溴苯腈对赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)的急性毒性效应.试验结果表明:滤纸接触试验空白对照组和人工土壤试验空白对照组的试验生物没有死亡,满足质量控制要求.滤纸接触试验结果表明溴苯腈对蚯蚓经皮暴露的48h-LC50值为10....     

蚓激酶提取条件的优化与酶活性测定

蚯蚓纤溶酶是目前较为理想的溶栓药物之一,具有广泛的临床应用前景。采用盐析法从蚯蚓中提取蚓激酶,通过采用考马斯亮蓝G-250染色法间接地测定蚓激酶活性,优化出最佳的提取条件。结果显示,蚓激酶的提取最佳PH为7.5-8.0,二次盐析硫酸铵饱和度应在80%以上。     

蚯蚓与环境保护

蚯蚓是土壤中的主要动物类群 ,在生态系统系统中具有重要的功能。它们促进植物残枝落叶的降解 ,有机物质的分解和矿化这一复杂的过程 ,并具有混合土壤 ,改善土壤结构 ,提高土壤透气、排水和深层持水能力的作用。它们的这些作用与其生物量和 3种生态类型 (表层种、内层种和深层种 )密切相关。根据它们的自然生态作用 ,我们可以有意识地利用合适的蚯蚓物种来为环境保护服务。它们是很好的土壤环境指示生物 ,我们可以利用蚯蚓 ,通过实验室或田间的生态毒理学试验来评价土壤中化学污染物的生态毒性。由于蚯蚓具有通过与微生物协同作用加速有机物质分解转化的功能 ,我们可以利用蚯蚓来处理有机垃圾——蚯蚓分解处理。城市生活污水的蚯蚓过滤处理是新近开发的一项利用蚯蚓的新技术 ,它可能具有更广泛的应用领域。本文主要介绍蚯蚓及其在自然生态系统中的功能和在环境保护方面的应用 ,同时指出土壤生物多样性的保护在环境保护上的重要性。