纤毛虫阔口游仆虫皮层微管胞器的形态及形态发生

采用荧光紫杉醇直接荧光标记,研究了腹毛类纤毛虫阔口游仆虫(Euplotes eurystomus)中由纤毛器、纤毛器附属微管和非纤毛器微管组成的皮层微管胞器.其中纤毛器、纤毛器附属微管包括口围带及小膜托架微管,波动膜及基部微管骨架网,额腹横棘毛、左缘棘毛及基部的前纵维管束、后纵微管束和横微管束,背触毛及基部的玫瑰花环附属微管等;非纤毛器皮层微管包括背腹面的细小网格状微管,背面的斜向微管层及贯穿于细胞纵长的纵微管层等.形态发生中,老口围带被前仔虫继承,前、后仔虫的额腹横棘毛发生及分化过程中老纤毛器基部微管退化,并且老棘毛及其附属微管可能具有定位和定向作用,但未见直接的物质联系.所得结果为揭示腹毛目纤毛虫皮层微管胞器建构的多样性、细胞皮层微管的分化及其细胞调控提供了基础资料.     

异毛虫Allotricha curdsi皮层纤毛器基部微管的荧光标记

FLUTAX直接荧光标记和抗α-微管蛋白抗体免疫荧光标记显示,原生动物腹毛目纤毛虫异毛虫(Al-lotricha curdsi)细胞微管胞器由口围带、波动膜、额腹横棘毛、左右缘棘毛、背触毛等皮层纤毛器、纤毛器基部附属微管组成.其中腹面皮层纤毛器基部附属微管包括小膜托架、小膜附属微管、波动膜骨架;额腹横棘毛基部围棘纤维篮、额腹横棘毛和左右缘棘毛基部前纵微管束、后纵微管束和横微管束,它们以各自的纤毛器基部为中心,分别向皮层不同方向发射,在细胞皮层内形成一个复合三维结构微管网;并且,左、右缘棘毛基部横微管显示非镜像对称的图像,横棘毛基部微管前纵微管束向前伸展后其前端并非聚集在一起,这与目前报道的其他腹毛目纤毛虫如贻贝棘尾虫、魏氏拟尾柱虫同种结构的定位特征不一样.     

伍氏游仆虫皮层微管类细胞骨架的荧光标记

Flutax直接荧光标记和抗α微管蛋白间接免疫荧光标记显示:伍氏游仆虫皮层细胞骨架是以微管为主要成分组成的各纤毛器骨架和骨架附属微管,以及与非纤毛器骨架相互联系形成的立体骨架.整个皮层骨架包括口围带、波动膜、额腹横棘毛、尾棘毛和背纤毛等纤毛器及其骨架、纤毛器基部附属微管和其他皮层微管骨架.伍氏游仆虫细胞背、腹面存在网格结构;细胞背面存在成列的空洞样结构;毛基体周围的玫瑰花样强荧光标记,呈现更加精细的网格结构.结果揭示:与其他腹毛类纤毛虫相比,游仆虫纤毛器有了明显的功能上的"分工";细胞背腹面存在的网格是游仆虫细胞表面的真实结构,是游仆虫细胞皮层微管类细胞骨架的一部分;细胞背面的空洞样结构及毛基体周围的更精细结构,揭示出毛基体基部存在着更加复杂的微管骨架.所得结果有利于进一步揭示微管类胞器的功能.     

美国赭纤虫纤毛器微管胞器的形态和形态发生

应用荧光紫衫醇(FLUTAX)标记异毛类纤毛虫美国赭纤虫(Blepharisma americanum)纤毛器微管胞器,结果显示：细胞形态发生中,后仔虫口器微管在皮层口围带后第一列体纤毛位置发生,前仔虫口器微管在老口围带位置形成;新的体纤毛在各个老体纤毛列中部两纤毛基体之间发生,此后新、老体纤毛共同组成为新仔虫的体纤毛...     

小腔游仆虫(Euplotes aediculatus)皮层微管胞器的荧光标记

应用荧光紫杉醇直接荧光标记和抗a-微管蛋白抗体免疫荧光标记,显示了纤毛虫小腔游仆虫(Euplotes aediculatus)皮层纤毛器微管、纤毛器基部附属微管和背皮层表面微管等结构,以及皮层纤毛器微管的形态发生.结果表明,该游仆虫背皮层表面网在形态上与嗜银网相一致,也是一种微管类细胞骨架;与其他几种游仆虫比较,前仔虫口纤毛器和背皮层纤毛器微管的形态发生存在不同的模式,其形态发生可能具有种的特异性,可以作为种的分类依据之一.此外,与FLUTAX(fluorescence taxoid)标记方法相比较,抗α-微管蛋白抗体免疫荧光标记能较清晰地显示游仆虫背皮层表面微管网及早期发生的额腹横棘毛原基和背触毛原基,推测该游仆虫的细胞背表面微管网与其他微管结构其微管蛋白组分可能存在差异,且形态发生中伴随着皮层纤毛器微管的组装和成熟,其微管蛋白组分同时也在不断发生变化.     

华美游仆虫皮层细胞骨架的超微结构及免疫电镜观察

 应用透射和免疫电镜术,在超微结构水平观察显示,腹毛类纤毛虫华美游仆虫的皮层纤毛器和非纤毛器细胞骨架中,表膜下、细胞质深部的微管或纤维束,以及纤毛器及纤毛器附属微管等均是以α-和 β-微管蛋白为主要成分的微管类结构;中心蛋白定位于纤毛器的基体腔、基体基部近中心端、基体基部近中心端连接及基体中部连接结构中,而在纤毛杆和皮层非纤毛器微管中无中心蛋白成分存在。据此认为,该纤毛虫中,基体部位的蛋白组成机制与纤毛杆及纤毛器附属结构是不同的,非分裂期细胞中定位于基体主体部位的中心蛋白可能与维持相关结构的稳定性有关。     

包囊游仆虫纤毛器微管在不同生理状态下的分化

应用FLUTAX染色及荧光显微术研究了包囊游仆虫的皮层微管胞器及其形成包囊和脱包囊过程中结构的分化：（1）细胞无性分裂过程中，棘毛基部的毛基体由紧密聚集状态逐渐分离、瓦解和消失；背纤毛基体逐渐膨大，基体内的周围微管散开成梅花形，之后在相应皮层区发生由颗粒组成的条带形原基.（2）细胞形成包囊时，口围带、波动膜和额腹横棘毛等微管胞器经历了部分去分化的过程，伴随着细胞体的凝缩，其纤毛器相互聚集，定位于球形体包囊细胞腹面；背纤毛按原有模式排列，位于包囊细胞背面.（3）脱包囊过程中，细胞吸水膨大，细胞体分化成变形虫状并显示一致的弱荧光，但未见微管胞器的荧光图像；细胞通过包囊壁背面小孔脱囊而出，恢复成为正常形态的纤毛虫；此后，在细胞脱包囊后残留的包囊壁背壁尚保存有部分背纤毛的痕迹.根据所得结果推测,形态发生中，纤毛器微管对新结构的形成可能有物质联系或物质贡献；脱包囊时，细胞成变形虫状，其微管结构可能发生了解聚和再分化的过程.     

包囊游仆虫无性生殖周期中细胞结构的研究

包囊游仆虫表膜含有质膜和表膜泡。表膜下纵纤维层中其腹面由单根微管纵向排列组成，背面由每三根微管形成“品”字形微管单元，背面银线网是一种真实的嗜银结构，它可能是表膜泡结构间隙中的沉积物；细胞皮层中非纤毛器细胞骨架主要包括束状、网状骨架系统以及其他一些微管束，纤毛器细胞骨架其基体间含有托架及其连接纤维，基体并向细胞质放射出纤维。另外，小根纤维由多根微管在一起组成，基体及有关微管纤维形成具有不同的连接方     

红色伪角毛虫微管胞器的免疫荧光观察

与多细胞生物相比,单细胞的纤毛虫具有更多类型的微管骨架结构,如嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophila)共组装17种不同类型的微管,位于皮层纤毛器、细胞质及细胞核内[1],因此在对微管结构功能的研究中,纤毛虫是一种很好的细胞模式.     

包囊游仆虫包囊形成和解脱过程中微管蛋白基因表达的变化

采用干涉相差显微术和实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术显示,腹毛类纤毛虫包囊游仆虫(Euplotes encysticus)包囊形成和解脱过程中,细胞微管胞器始终处于非装配及装配的功能活动状态,脱包囊过程中伸缩泡的运动对细胞充分吸水用于微管胞器的再装配及细胞运动起了关键的作用,细胞内α-、β-和γ-微管蛋白基因的表达量相伴发生变化.其中,微管胞器去分化时,细胞形成毛基体非吸收型包囊,细胞α-、β-和γ-微管蛋白基因的表达量整体呈现逐渐减少的趋势,其细胞微管蛋白基因的相对表达量从大到小依次是β-、α-和γ-微管蛋白基因,但α-、β-微管蛋白基因的起始拷贝数远大于后一种微管蛋白基因的表达量;微管胞器再分化时,伴随着伸缩泡的剧烈伸缩运动,口纤毛器和体纤毛器微管先后形成,细胞在包囊内做旋转运动并脱囊而出,迅速转化为营养细胞,期间细胞内α-、β-和γ-微管蛋白基因的表达量呈现从小到大增加的趋势,其微管蛋白基因的相对表达量从大到小依次是β-、α-和γ-微管蛋白基因,而前两种微管蛋白基因的起始拷贝数远大于后一种微管蛋白基因的表达量.结果表明,包囊游仆虫形成包囊和脱包囊过程中,伴随着皮层微管胞器的不同分化,细胞内α-、β-和γ-微管蛋白基因始终处于不同的功能活动状态,其中作为微管组织中心主要组分的γ-微管蛋白也始终处于不同的功能状态.     

黄瓜根尖细胞中微管冷稳定性和微管蛋白与其抗寒性的关系

以不同抗寒性黄瓜品种为试材,研究了经不同时间低温处理后黄瓜根尖细胞中微管的动态变化及抗寒锻炼后微管蛋白的变化,结果表明黄瓜根尖细胞中不同部位的微管冷稳定性有差异,质膜下的周质微管具有最强的冷稳定性,抗寒品种黄瓜根尖细胞中微管冷稳定性明显高于不抗寒品种,同时抗寒锻炼后微管蛋白的含量有所增加.     

Regulation of the inward K+-channels in stomatal guard cells by cytoskeletal microtubules

Patch clamp techniques were applied to investigating the regulation of the inward K⁺-channels inVicia stomatal guard cells by cytoskeletal microtubules. The intracellular addition of either microtubule-disassembling reagent amprophos-methyl (APM) or microtubule-stabilizing reagent taxol resulted in significant inhibition of the inward K⁺-currents across the plasma membranes ofVicia stomatal guard cells. The results suggest that the activation of the inward K⁺-channels in stomatal guard cells requires proper dynamic organization of cytoskeletal microtubules. The regulation of the inward K⁺-channels in guard cells by microtubules may mediate the regulation of stomatal movements by cytoskeleton.     

小麦幼苗微管结合蛋白MAP65s体外对微管聚合影响的研究

微管结合蛋白与微管特异地结合在一起,参与调节微管的结构与功能,目前已成为植物细胞骨架研究的前沿领域。以"临优2018"小麦幼苗为材料,通过免疫印迹实验鉴定了小麦幼苗中微管结合蛋白MAP65s的存在并利用紫外吸收法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法初步探究了小麦幼苗MAP65s体外对微管聚合的影响,为进一步研究MAP65s蛋白的生理功能提供了重要的依据。     

Identification of an actin-binding protein from Dictyostelium as elongation factor 1a

Indirect evidence has implicated an interaction between the cytoskeleton and the protein synthetic machinery. Two recent reports have linked the elongation factor 1a (EF-1a) which is involved in protein synthesis, with the microtubular cytoskeleton. In situ hybridization has, however, revealed that the messages for certain cytoskeletal proteins are preferentially associated with actin filaments. ABP-50 is an abundant actin filament bundling protein of native relative molecular mass 50,000 (50K) isolated from Dictyostelium discoideum. Immunofluorescence studies show that ABP-50 is present in filopodia and other cortical regions that contain actin filament bundles. In addition, ABP-50 binds to monomeric actin in the cytosol of unstimulated cells and the association of ABP-50 with the actin cytoskeleton is regulated during chemotaxis. Through complementary DNA sequencing and subsequent functional analysis, we have identified ABP-50 as D. discoideum EF-1a. The ability of EF-1a to bind reversibly to the actin cytoskeleton upon stimulation could provide a mechanism for spatially and temporally regulated protein synthesis in eukaryotic cells.     

热处理对HeLa细胞微管影响的研究

目的:用HeLa细胞作模型,研究热处理对肿瘤细胞微管的影响.方法:用不同温度(37°C、、40°C43°C和45°C)经不同时间(1h和2h)水浴处理培养的HeLa细胞后,分别即时用SABC法显示其微管.结果:与37°C相比,40°C处理后的HeLa细胞微管变化不大,43°C处理后,微管开始解聚,并随着作用时间的延长而加剧,45°C处理2h,微管组织中心消失.结论:高温能引起HeLa细胞微管呈现渐进式的解聚变化,微管组织中心具有较强的保护作用.     

纤毛虫胞质微管及大核的FLUTAX-EB荧光标记方法

以游仆虫、尖毛虫和尾柱虫三种腹毛目纤毛虫为材料,在应用FLUTAX方法显示纤毛虫细胞微管结构的标本制备过程中,增加了EB染色的歩骤,使标记纤毛虫细胞皮层微管的同时也显示了细胞核的结构.并提出了实验中对EB浓度及渗透时间等需注意的方面.