在载玻片上制备高杂交效率的DNA芯片

目的 :改进玻璃基质上固定DNA的方法 ,提高固定DNA的杂交效率 .方法 :玻片用 β -(对、间氯甲基苯基 )三氯硅乙烷和 β -苯基三氯硅乙烷二组分混合硅烷化试剂处理 ,再用NaI丙酮溶液处理 ,在表面自组装形成带有苄碘功能基的二组分混合单层硅烷膜 .巯基修饰的DNA共价偶联到这一自组装的硅烷膜上 .结果 :放射性分析证实玻璃基质表面共价固定DNA的优化密度为9 3× 10 - 2 μmol/m2 ,目标DNA杂交密度为 8.6× 10 - 2 μmol/m2 ,固定DNA的杂交率为 93% .结论 :采用两步竞争性反应的方法能够较容易地控制DNA在芯片上的固定密度 ,固定的DNA在芯片分布较均匀 ,因此制得的DNA芯片具有较高杂交效率和杂交密度 ,可方便地用于核酸杂交和探测研究     

采用溶剂抽提法制备3-巯丙基三甲氧基硅烷自组装单层膜

为提高硅烷自组装单层膜的质量,提出溶剂抽提制备的工艺.玻片在5×10-3 mol/L的巯基丙基三甲氧基硅烷(MPTS)苯溶液浸泡反应,依次用苯、丙酮、双蒸水回流抽提,得到MPTS的自组装膜.使用接触角、俄歇电子能谱及x射线光电子能谱等方法进行表征.研究结果表明:在惰性气体保护下,连续使用非极性溶剂和极性溶剂抽提,有效清除玻璃表面硅烷的物理吸附层,有效防止巯基硅烷的氧化,获得膜厚度为0.8咖、均匀的MPTS自组装单层膜.该工艺为制备稳定的硅烷自组装单层膜提供一种新方法.     

γ-巯基丙基三甲氧基硅烷自组装膜的制备及其防腐蚀性能

采用自组装的方法在铜片表面制备了γ-巯基丙基三甲氧基硅烷的单分子膜,并利用金相显微镜及粗糙度测定仪观察自组装分子膜的表面形貌,利用电化学工作站评价了自组装分子膜对铜片的缓蚀性能。结果表明：自组装分子膜对铜片具有一定的修饰作用,修饰效果与时间呈正相关;γ-巯基丙基三甲氧基硅烷自组装膜对铜片具有一定的缓蚀性能,其缓蚀性能与...     

Ag纳米微粒的组装和SERS效应

近年来纳米粒子作为基本单元组装成各种复合结构的研究引起了人们的浓厚兴趣 ,人们期待着组装后的纳米粒子会有各种新的性能 [1] .Natan,Cotton等将硅基表面 (玻璃或石英 )进行硅烷化处理 ,从而形成一层末端带有功能基团 (氨基或巯基 )的高分子膜 ,然后通过这些基团与金或银纳米粒子之间的化学吸附作用使他们得以固定 ,制成纳米有序结构 .张锦等利用真空蒸镀的方法制备了银岛膜 .本文报道了用自组装和电化学组装相结合的方法 ,制备了银纳米粒子的二维阵列 ,研究了AMP在组装的银纳米阵列上的增强拉曼光谱 ( SERS) .1　实验部分1 .1　纳米…     

自组装单分子膜成膜形貌及其缓蚀性能的研究

新工艺方法在玻璃基体表层及银片表面制备出3-巯基丙基三甲氧基硅烷自组装单分子膜（MPS-SAM）,并利用扫描电子显微镜（SEM）观察了玻璃基体薄膜形貌,使用自动椭圆偏振测厚仪SGC-2测出其膜厚;运用金相显微镜观测出银片表面形貌变化并结合触针式粗糙度测量仪得出其膜厚范围;同时通过塔菲尔曲线(Tafel)对银片电极的电化学性能进行了对比分析。结果表明：组装溶液的成膜形貌与致密性受组装时间的影响很大且在金属与非金属表面的成膜时间大不相同;银片表面组装膜形貌的变化决定其缓蚀性能、稳定性和致密性等条件。     

应用压电型生物传感器研究寡核苷酸在石英金膜表面的固定

应用课题组自行研制的压电型生物芯片分析仪,利用分子自组装技术将5端巯基修饰的寡核苷酸固定在石英金膜表面,制成DNA传感器,并用它进行了寡核苷酸在石英金膜表面的定量分析,初步检测了所研制的分析仪的基本性能。     

Heck偶联反应在有机单分子膜上的应用

利用Heck偶联反应成功地改变了自组装单分子有机薄膜的化学结构以及末端基团,薄膜末端的碘苯基团与对卤苯乙烯在标准的Heck反应条件下成功发生了偶联反应.这些薄膜经过了接触角、膜厚以及X射线光电子能谱的详细表征.这种表面修饰的方法有效地改变有机薄膜的表面化学.     

一种适于水相中使用的表面增强拉曼散射基底的制备

利用自组装技术和银镜反应给出了一种制备表面增强拉曼散射基底的新方法.以自组装的方法在玻璃基片上组装巯丙基三甲氧基硅烷分子膜,利用这层分子膜使银纳米颗粒与基底表面形成较强的化学键结合.通过优化银镜反应条件,得到了可以长时间在水相中使用的高活性表面增强拉曼散射基底.结果显示其检测灵敏度可达单分子层,且具有很好的稳定性和重复性.     

硅烷自组装单分子层生长条件的优化

对长碳链硅烷在玻璃片表面自组装形成单分子层膜进行研究。以甲苯为溶剂,使辛烷基三乙氧基硅烷(OTES)、十二烷基三甲氧基硅烷(DTMS)、3-胺丙基三乙氧基硅烷(APTES)和十八烷基三氯硅烷(OTS)在玻璃表面进行生长,考察反应时间、反应浓度和可水解基团对自组装单分子层膜的影响。用接触角仪和全反射红外光谱仪(FT-IR)对单分子膜进行表征。结果表明:带有—Cl水解基团的OTS最易生长,而带有乙氧基离去基团的OTES比带有甲氧基的DTMS容易反应。在24℃时,1 mmol/L OTES反应20 min自组装单分子层膜生长很好,并且表面比较规整均一。     

巯基自组装的压电DNA传感器技术研究

采用先将寡核苷酸分子标记上巯基基团，通过自组装技术将巯基修饰的寡核苷酸固定于金电极上，研制成的压电DNA传感器一致性，特异性都较好，每次检测杂交后，经过电极的再生，传感器可以重复使用3次，用该传感器检测和传统的斑点杂交方法相比较，具有快速，灵敏，简便等优越性。     

玻璃介质寡核苷酸DNA Microarrays的研制

建立了一种快速，简便的寡核苷酸链固定在普通玻璃介质上的ＤＮＡ微矩阵并通过荧光检测的方法。首先将２种不同的寡核苷酸在固定在普通玻璃介质上，使寡核苷酸共价结合在经过处理的普通玻璃片表面形成点直径大约３ｍｍ的ＤＮＡ微矩阵，然后先后分别与其对应互补的红黄不同颜色的荧光寡核苷酸链进行杂交实验。     

进氧化氢在微过氧化物酶-11(MP-11)修饰玻碳电极上的电催化还原

0　ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＭＰ 1 1ｉｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍｐｅｐｓｉｎｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｃ .Ｉｔｒｅｔａｉｎｓａｍｉｎｏａｃｉｄｒｅｓｉｄｕｅｓ 1 1 2 1ｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｃ .Ｉｔｉｓｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｇｏｏｄｍｏｄｅｌｏｆｃ ｔｙｐｅｈｅｍｅｅｎｚｙｍｅｓａｎｄｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｓ .Ｓｏｆａｒ,ｓｏｍｅｍｅｔｈｏｄｓｈａｖｅｂｅｅｎｕｓｅｄｔｏｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅＭＰ 1 1ｏｎｅｌｅｃｔｒｏｄｅｓ ,ｓｕｃｈａｓｍｉｘｉｎｇｕｐｗｉｔｈｇｒａｐｈｉｔｅｐａｓｔ…     

The hybridization between peptide nucleic acid containing azobenzene and DNA labeled nanoparticle on chip surfaces studied by atomic force microscopy

Peptide nucleic acid containing azobenzene （N-PNA） was covalently bound on chip surfaces. Complementary DNA probes labeled by gold nanoparticles hybridizated with PNA on chip surfaces, The hybridization was successfully detected with AFM by the microscopy mothed. The influences of the position and the cis-trans isomerization of azobenzene unit on hybridization were investigated with AFM.     

利用椭圆偏振光谱法研究硅片上DNA分子杂交

将单晶硅片硅烷化后，用戊二醛做醛基修饰，将5′端氨基修饰寡核苷酸探针片段通过醛－氨共价键结合在硅片上，然后用椭圆偏振光谱法对探针和不同序列样品的杂交反应进行了研究。结果表明该方法能在不对样品进行荧光标记的情况下直接研究杂交反应的效率，从而得知样品的序列信息。     

Excess beta 2 microglobulin promoting functional peptide association with purified soluble class I MHC molecules

T lymphocytes expressing alpha beta receptors recognize antigenic peptide fragments bound to major histocompatibility complex class I or class II molecules present on the surface membranes of other cells. Peptide fragments are present in the two available HLA crystal structures and recent data indicate that peptide is required for the stable folding of the class I heavy chain and maintenance of its association with the class I light chain, beta 2-microglobulin (beta 2m), at physiological temperature. To explain how the exogenous peptide used to create targets for cytotoxic cells bearing CD8 antigen could associate with apparently peptide-filled extracellular class I molecules, we hypothesized that stable binding of exogenous peptide to mature class I molecules reflects either the replacement of previously bound peptide during the well documented beta 2m exchange process or the loading of 'empty' class I heavy chains dependent on the availability of excess beta 2m. In either case, free beta 2m should enhance peptide/class I binding. Using either isolated soluble class I molecules or living cells, we show here that free purified beta 2m markedly augments the generation of antigenic complexes capable of T-cell stimulation.     

I(Cn)的圆色数

讨论了n-圈Cn的关联图I(Cn)的结构性质.证明了I(Cn)是4-正则的平面图并研究了其色数.主要研究I(Cn)的圆色数并得到结果:如果n=3m,则χc(I(Cn))=χ(I(Cn))=3;如果n=3m 2,则χc(I(Cn))=(6m 4)/(2m 1).当n=3m 1时,给出了χc(I(C3m 1))的一个界.     

Recovery of DNA from agarose gel with home-made silica milk

An usefulness of silica milk made with waste ultraviolet light tube for recovery of DNA fragment from agarose gel was represented. The glass milk is a water suspension of 50% fine silica powder prepared by grinding the crushed waste ultraviolet light tube with a porcelain mortar. It was showed that one microliter of the glass milk could bind more than 1 μg of DNA fragment, and DNA fragment in length from 125 bp to 23 kb could be efficiently recovered from agarose gel. The bound DNA could be eluted from the particle of SiO₂ in the glass milk with a yield of about 60%–80%. The eluted DNA could be used in all manipulations in molecular cloning. Biography: Wang Zhuo-hua (1977-), female, M. D, research direction: genetic engineering.     

基于Au@SiO_2纳米复合材料构建新型的DNA电化学传感器

合成了金包二氧化硅纳米复合材料(Au@SiO2),并将其修饰于玻碳电极表面,固定上DNA探针后构建了一种新型的DNA电化学传感器.采用循环伏安法、差分脉冲伏安法(DPV)对于复合材料的电化学性能进行了研究.以5.0 mmol/L的[Fe(CN)6]3-/4-溶液为探针,分别对DNA的固定温度、固定时间、杂交温度以及杂交时间等试验条件进行了优化.结果表明:在优化条件下,利用DPV测定,目标DNA浓度的对数与峰电流在1.0×10-13¹.0×10-10mol/L范围内呈良好的线性关系,线性相关系数为0.995,检出限为1.0×10-15mol/L.该方法具有简单、快速、灵敏等优点.     

反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究

目的:建立起简单、快速、灵敏、准确的慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药位点的反向线性探针(reverse line probe,RLP)检测方法.方法:根据HBV野生及耐药基因序列设计通用探针、3'、5'对称加有poly-C的特异性探针和5'标记生物素的扩增引物.将探针线性固定在硝酸纤维膜上,使HBV PCR扩增产物与探针进行杂交.通过优化杂交条件,建立RLP检测方法.利用该方法对重庆地区86个慢性乙肝病人进行检测,同时与直接测序结果比较.结果:半巢式PCR可对103拷贝/ml的血清样本进行有效特异扩增,新建的RLP检测方法可对PCR扩增产物在1 ng/ml以上,或血清样本中突变型DNA占野生型DNA比例为5％以上的均可有效检测,86例临床的检测灵敏度为100％,野生型和耐药型的检测准确性分别为98.09％(103/105)、100％ (43/43),与直接测序法比,RLP检测野生与耐药混合型准确性更好.结论:反向线性探针杂交检测方法检测HBV拉米夫定耐药位点方便、灵敏、准确,是HBV拉米夫定治疗有效的监控工具,该方法适合临床应用.