应用PCR－RFLP法作脊灰炎病毒型内分析的研究

用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法对近年来从麻痹病人分离到的２６株脊灰炎病毒（ＰＶ）作了型内分析研究。１６株ＰＶ１的ＲＦＬＰ图式呈现多样性，毒株的图式可与Ｓａｂｉｎ１型疫苗株完全相同或不同，某些毒株亦可无电泳条带出现。７株ＰＶ２与３株ＰＶ３的ＲＦＬＰ图式则分别与疫苗株Ｓａｂｉｎ２型和３型完全相同。全面分析这些ＲＦＬＰ后，我们认为１６株ＰＶ１为野毒株，而７株ＰＶ２及３株ＰＶ３则可能是疫苗相似株。鉴于近年来广西的麻痹病例仍主要由ＰＶ１所致。故此，加强突击普服ＯＰＶ运动及作好分离毒株的型内分析已成为消灭脊灰炎的关键。     

嗜神经型新城疫病毒野毒株的电镜观察

采用钼酸铵负染色方法，电镜观察一株野外分离的嗜神经型新城疫病毒。分离的毒株接种ＳＰＦ鸡胚后，收集尿囊液，在电镜下看到大量圆形或扁圆形，直径２００￣３００ｎｍ的病毒颗粒，并且，部分病毒粒子囊膜及纤突清晰可见。     

鸡传染性支气管炎HA抗原的制备及HI试验方法的建立

用１０％Ａ型魏氏梭菌滤液处理１００倍浓缩ＩＢＶ Ｍ４１株病毒液,成功地制备了ＩＢＶ ＨＡ抗原,效价为１：６４￣１：１０２４。用该抗原建立了ＩＢＶ ＨＩ试验方法。抗原在４℃保存,５个月效价不变;加入０．１％的甲醛及１／万的硫柳汞使抗原效价下降１￣２个滴度。对ＳＰＦ鸡血清、Ｍ４１阳性血清、其它鸡病标准阳性血清以及疫苗免疫试验鸡只血清的ＩＢＶ ＨＩ抗体监测结果证明,该方法操作简便、快速、敏感性高、特异性     

免疫酶技术检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

以抗鸡肾型传染性支气管炎病毒（肾型ＩＢＶ）Ｔ株的鼠源免血清为一抗，辣根过氧化酶（ＨＲＰ）标记的羊抗鼠ＩｇＧ为二抗，建立了检测石蜡切片中肾型ＩＢＶ抗原的免疫酶组化技术，经过特异性试验和阻断性试验，表明该方法具有高度的敏感性和特异性，应用该法对人工感染肾型ＩＢＶＲＳ株的鸡气管和肾脏石蜡切片中的病毒抗原进行了检测，结果气管从感染后０．５～１１ｄ，肾脏从感染后１～２０ｄ均检测到病毒抗原，阳性染色体主要集中     

应用免疫吸附电镜检测甘薯羽状斑驳病毒

应用血清学特异性的免疫吸附电镜法对接种ＳＰＦＭＶ的Ｉ．ｓｅｔｏｓａ、Ｉ．ｎｉｌ和网室种植的感染ＳＰＦＭＶ的徐薯－１８、新大紫甘薯叶片分别进行了测定．结果表明被检测的四种植物汁液的稀释度分别可达到１／１２８０、１／６４０、１／６４０和１／１６０；而用无血清包被的电镜铜网检测Ｉ．ｓｅｔｏｓａ、Ｉ．ｎｉｌ和徐薯－１８，其汁液稀释度仅达到１／２０．比较接种ＳＰＦＭＶ的Ｉ．ｓｅｔｏｓａ和Ｉ．ｎｉｌ植物体内病毒含量，前者高于后者．网室种植的自然感染ＳＰＦＭＶ的两种甘薯品种，体内病毒含量也不一样．     

鸡痘病毒载体强启动子的构建和筛选

根据痘苗病毒天然启动子Ｐ７．５关键区的结构,人工合成４条寡核苷酸,形成早,晚期启动子,把合成的启动子进行不同组合,得到１０个较有代表性的不同启动子组合ＰＳ１～１０,用Ｐ７．５作对照构建成表达ＬａｃＺ基因的表达载体ｐＦＢＳ１～１０以及ｐＦＢＳ７．５。利用脂质体介导转染鸡痘病毒中国疫苗株２８２Ｅ４,获取重组病毒,经纯化后,分别测重组欠代ＣＥＦ后１０,２４,３６,４８,７２ｈ,表达β－半乳糖苷酶的活性,     

鸡胚致死孤儿病毒PCR检测方法的建立及应用

目的建立鸡胚致死孤儿病毒PCR检测方法,并应用于鸡胚及禽源性生物制品的检测。方法根据鸡胚致死孤儿病毒长纤突保守序列分别设计3对引物,优化并建立鸡胚致死孤儿病毒PCR检测方法;分别采用该方法对SPF鸡胚和流感疫苗、麻疹疫苗进行检测。结果建立的方法可检测到10-9稀释的病毒DNA;该方法与鼠腺病毒及猴腺病毒无交叉反应;在SPF鸡胚及禽源性生物制品中应用该方法均未检出病毒。结论该方法具有良好的特异性和敏感性,可以应用于禽源性生物制品中鸡胚致死孤儿病毒的检测。     

鸡传染性法氏囊病地方流行毒株的分离与制苗种毒的筛选

从河北省昌黎县不同鸡场发生的法氏囊病鸡群中,分离到ＪＤ１,ＪＤ２,ＪＤ３,ＪＤ４,ＪＤ５共５株ＩＢＤ病毒毒株,通过初步分离与试验,并对其作了致病性、鸡胚适应性和免疫保护性等项试验。结果表明：所分离的５株均为ＩＢＤＶ,且可使易感鸡１００％发病,致死率在０～４０％。其中ＪＤ２和ＪＤ５可以在鸡胚中稳定增殖并使鸡胚规律性死亡。尽管通过鸡胚驯化,使分离的ＩＢ－ＤＶ毒力有所下降,但其灭活后免疫鸡,仍可使鸡对ＩＢＤ流行毒株的攻击达到８５％的保护率。ＪＤ２可作为ＩＢＤ囊组织抗原的种毒,也可作为ＩＢＤ鸡胚抗原的种毒。     

禽大肠杆菌O18、O78分离株免疫保护机理的研究

以禽原性大肠杆菌Ｏ１８,Ｏ７８分离株制成超声波裂解铝佐剂灭活苗免疫１４日龄鸡,以相同或不同外膜蛋白（ＯＭＰ）型的Ｏ１８,Ｏ７８分离株攻毒,结果以Ｏ７８血清型内相同和不同ＯＭＰ型分离株间能获得最大保护,Ｏ１８血清型内相同ＯＭＰ型分离株间获得最大保护,而不同ＯＭＰ型分离株间不能保护,两个血清型的分离株间不率ＯＭＰ型是否相同,均缺乏保护,以间接ＥＬＩＳＡ试验,间接血凝试验分别测定了试验鸡针对大肠杆菌ＯＭ     

免疫鸡群新城疫病毒检测和分离的研究

以ＳＰＦ鸡抗新城疫病毒（ＮＤＶ）ＩｇＧ为包被抗体（５μｇ／ｍＬ）,兔抗ＮＤＶＶｅｒｏ细胞培养纯化毒ＩｇＧ为第二抗体（１∶２００～６００）,酶标记羊抗兔ＩｇＧ（１∶５０００）为指示抗体建立间接夹心ＥＬＩＳＡ,检测实验免疫鸡、攻毒鸡及现地免疫鸡口腔或泄殖腔外分泌物。结果表明：新城疫无毒力Ｖ４疫苗免疫后２ｄ,口腔内病毒抗原随机检出率为４／１０,第１０天为１０／１０;泄殖腔为０～１／１０,并持续１８ｄ以上。滴鼻攻毒后１ｄ,口腔和泄殖腔内病毒抗原检出率分别是８／１０和６／１０;第１３天,泄殖腔内病毒抗原检出阴性。ＮＤＶ灭活疫苗免疫６０ｄ后攻毒,第２天有７／２０口腔和８／２０泄殖腔检出阳性,并一直到攻毒后第１４天。非免疫对照鸡攻毒后第３天直到死亡时,口腔和泄殖腔均可检出病毒抗原。对各地临床上无任何症状的ＮＤＶ免疫鸡群检测发现,泄殖腔ＮＤＶ抗原阳性率０％～９．３％,分离到８株ＮＤＶ流行毒株,生物学试验证实这些毒株的毒力属中等毒力偏强或强毒。