Dynamic changes of apoptosis in duck embryo fibroblasts induced by new type Gosling viral enteritis virus

The monolayer duck embryo fibroblast （DEF） cells were experimentally infected with new type Gosling viral enteritis virus （NGVEV） and the dynamic changes of apoptosis were detected at different time points after NGVEV infection by transmission electron microscopy （TEM）, DNA agarose gel electrophoresis and Annexin V-FITC/PI stained fluorescence-activated cell sorter （FACS）. The result shows that NGVEV can induce infected cells undergoing apoptosis and changing regularly. A series of characteristic apoptotic morphological changes including shrinkage of the cells, chromatin condensation and margination, as well as formation of apoptotic bodies, were observed by TEM. The typical ladder pattern of DNA fragmentation was demonstrated by agarose gel electrophoresis. And using flow cytometry analysis of Annexin V-FITC/PI staining, the dead, viable, apoptotic and necrotic cells could be analyzed quantitatively.     

黄荆子乙酸乙酯提取物诱导结肠癌HT-29细胞凋亡

目的研究黄荆子乙酸乙酯提取物（EVn-50）诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法用不同浓度的EVn-50处理体外培养的HT-29细胞;碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带;Western blot分析Bcl-2和Bax蛋白表达。结果EVn-50以浓度依赖的方式增加HT-29细胞凋亡率（P〈0．05）。10．0tanoVLEVn-50处理HT-29细胞48h导致典型DNA梯形条带形成。10．0umol/LEVn-50以时间依赖方式下调Bcl-2蛋白表达,同时,上调Bax蛋白表达（P〈0．05）。结论EVn-50诱导HT-29细胞凋亡作用与增加Bax／Bcl-2比值有关。     

兔血清诱导Shope肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的：前期实验结果已证明兔血清对Ｓｈｏｐｅ肿瘤细胞具有伤作用。本实验拟从细胞凋亡角度探讨兔血清杀伤该细胞的机理。方法：通过电子显微镜、激光共聚焦显微镜、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测等方法,观察了兔血清诱导细胞凋亡的可能性。结果：经１０％兔血清处理３ｈ的中等分化程度的Ｓｈｏｐｅ肿瘤细胞（ＳＣＢ－６ａ）在电镜、激光共聚焦显微镜下均可见典型的细胞凋亡的形态学特征;１．５％琼脂糖凝胶电泳呈现明显的“阶梯状”图谱（ＤＮＡ ｌｅｄｄｅｒ）;ＰＩ染色后经流式细胞仪检测显示大量亚二倍体细胞（凋亡细胞）。结论：兔血清诱导Ｓｈｏｐｅ肿瘤细胞凋亡可能是其伤细胞的作用机理之一。     

Apoptosis induced by （DIPP-L-Leu）2-L-Lys-OCH3 in K562 cells

Apoptosis as a mechanism of deleting cells from tissues plays an important role in physiological and varieties of pathological situations, especially cancer conditions. In order to search for tumor cells apoptosis inducers, the inhibition effects on K562 cells of N-phosphoryl dipeptide methyl esters were studied by MTT assays, and (DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3 was the compound which had the best activity. From the studies of the typical apoptotic morphologic changes, DNA agarose gel electrophoresis, and flow cytometry analysis, it could be concluded that (DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3 could induce apoptosis of K562 cells in a dose-dependent manner, and the IC50 was 22.66 μmol/L according to MTT assays.     

EVn-50抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的探讨EVn-50对体外培养的人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞,台盼蓝拒染法检测EVn-50对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响;平皿克隆形成法、软琼脂克隆形成法测定EV-n50对人宫颈癌Hela细胞锚定依赖性生长和锚定非依赖性生长作用的影响;AO／EB染色荧光显微镜观察EVn-50诱导Hela细胞凋亡的形态学改变;DNA凝胶电泳确证EVn-50诱导Hela细胞凋亡作用。结果EVn-50对体外培养人宫颈癌Hela细胞的增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性。EVn-50可诱导Hela细胞凋亡,AO／EB染色可见典型凋亡小体;DNA凝胶电泳在EVn-50浓度100μg／mL作用48h出现典型“梯形”DNA条带。结论EVn-50具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡作用。     

阿霉素诱导肝癌QGY-7701细胞凋亡的研究

观察阿霉素对人肝癌细胞株QGY-7701的凋亡诱导作用。实验用阿霉素处理QGY-7701细胞后,用台盼蓝拒染法检测细胞增殖活性;光镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞凋亡形态;DNA琼脂糖凝胶电泳技术观察分析细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果显示,阿霉素处理QGY-7701细胞后,出现了明显的凋亡现象,而且随着药物浓度的增加,细胞凋亡的趋势越明显。分析结果可知,阿霉素作用QGY-7701细胞48 h的IC50值为4.9μg/mL。流式细胞仪检测出阿霉素处理QGY-7701细胞的凋亡率逐渐上升。综上所述,阿霉素可以诱导QGY-7701细胞出现凋亡的现象。     

汉黄芩素对人神经胶质瘤细胞U251的凋亡诱导作用

研究汉黄芩素对人神经胶质瘤细胞U251增殖和凋亡的影响,用不同浓度的汉黄芩素作用于U251细胞系,通过核染色观察形态变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式分析检测细胞的凋亡情况.结果显示,药物作用后的细胞,DAPI核染色呈致密浓染,并伴有凋亡小体的出现;MTT法测得U251细胞的增殖得到明显的抑制,抑制率随浓度和作用时间的增加而上升,其中作用24 h的IC50为145.87 μmol/L; Annexin V-FITC /PI流式细胞检测证实汉黄芩素确实可以诱导U251细胞凋亡,并有剂量依赖的性质;通过比色法证明在药物处理过的细胞中,凋亡标志性酶Caspase-3被激活,且活性随着药物浓度的升高而增强.研究表明,汉黄芩素能明显抑制U251细胞增殖,诱导细胞凋亡,具有抗神经胶质瘤的作用.     

贝特舒对人角膜上皮细胞凋亡诱导作用的实验研究

为了揭示常用青光眼药物贝特舒(betaxolol)对人角膜上皮(HCEP)细胞的毒性及其作用机理,使用不同质量浓度贝特舒对体外培养HCEP细胞进行了处理,并利用倒置显微镜跟踪观察了细胞的生长和形态,用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光双染色法检测了质膜的通透性,用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA的断片化,用透射电镜检测细胞的超微结构。发现在0.17500~2.80000g/L的质量浓度范围内,贝特舒对HCEP细胞具有显著的毒性,并随着质量浓度的提高和处理时间的延长而逐渐增大,处理24h即可使大部分细胞皱缩死亡;进一步的研究结果发现,质量浓度为0.17500~2.80000g/L的贝特舒能显著提高HCEP细胞的质膜通透性,并使其出现DNA断片化、染色质凝缩和形成凋亡小体等凋亡细胞的结构变化。可见,在贝特舒0.17500~2.80000g/L的质量浓度范围内对HCEP细胞具有显著的毒性,并具有质量浓度和时间依赖性,其毒性作用的发挥是通过诱导细胞凋亡实现的,在眼科临床应用中毒副作用极大。     

利多卡因对人角膜上皮细胞的毒性作用及其机理研究

利用不同浓度利多卡因（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）处理体外培养的人角膜上皮（ＨＣＥＰ）细胞系细胞,利用光镜观察、ＭＴＴ、荧光染色、ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ、流式细胞仪和透射电镜方法研究了利多卡因对 ＨＣＥＰ细胞的毒性作用及其机理。光镜观察和 ＭＴＴ检测结果显示,质量浓度 １２５～１０００ｇ／Ｌ的利多卡因对 ＨＣＥＰ细胞具有显著的毒性作用,并具有浓度和时间依赖性;ＡＯ／ＥＢ荧光双染色结果显示,质量浓度 ０６２５～１００００ｇ／Ｌ的利多卡因可引起 ＨＣＥＰ细胞的质膜通透性显著提高,细胞凋亡率也具有浓度和时间依赖性;ＤＮＡ电泳和 ＴＵＮＥＬ检测结果显示,利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞发生 ＤＮＡ断片化;ＴＥＭ观察结果显示,利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞的超微结构出现了凋亡细胞的形态结构特征,如胞质空泡化、染色质浓缩、线粒体膨胀且嵴的结构紊乱、出现凋亡小体等;ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ染色的流式细胞仪检测结果显示,利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞质膜中的磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）发生外翻变化;ＥＬＩＳＡ检测结果显示,利多卡因还能引起 ＨＣＥＰ细胞中胱冬肽酶3、8、9、10表达量的增加,表明利多卡因确能引起 ＨＣＥＰ细胞发生细胞凋亡,而不是细胞坏死。由此可见,利多卡因在质量浓度大于 0.625ｇ／Ｌ时对 ＨＣＥＰ细胞具有显著的细胞毒性,并具有浓度和时间依赖性,且其毒性作用的发挥是通过诱导细胞凋亡实现的,在眼科临床应用中具有很大的毒副作用,应谨慎使用。     

强力霉素对人非小细胞肺癌A549细胞的增殖抑制及促凋亡作用

为研究强力霉素体外对人非小细胞肺癌A549细胞的增殖及凋亡的影响。应用MTT比色法研究不同浓度强力霉素(2.5,5,10,20,50mg/L)对A549细胞增殖的影响。荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳、AnnexinV-PI双标法等多项方法,研究强力霉素对A549细胞的促凋亡作用;采用免疫组化的方法,观察药物作用后bcl-2和bax的表达。强力霉素作用后,A549细胞的吸光度值降低,并出现凋亡特有的细胞核改变DNA梯状条带,早期凋亡的细胞数增加,伴有bcl-2的下调,bax上调。这表明强力霉素可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的生长,并诱导细胞发生凋亡,其诱导凋亡的作用可能与其调节bcl-2/bax的表达有关。     

原癌基因c-jun对EDS诱导大鼠睾丸间质细胞凋亡的研究

本研究用c-junASODNs拮抗c-jun,用EDS诱导的大鼠睾丸间质细胞凋亡,通过琼脂糖凝胶电泳、Henchest33342染色荧光显微镜检查方法研究c-jun对EDS诱导的大鼠睾丸间质细胞凋亡的影响.实验结果显示0.5μmol/Lc-junASODNs抑制EDS诱导的离体间质细胞凋亡(P<0.01).提示c-jun有促进大鼠睾丸间质细胞凋亡的作用.     

洋地黄毒苷诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖和凋亡的影响

应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测洋地黄毒苷对NCI-H446细胞增殖的抑制效果;用AO-EB染色、DNA凝胶电泳分析以及AnnexinⅤ检测法检测细胞凋亡;用碘化丙啶(PI)染色测定其周期变化,利用激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧(ROS)和钙离子(Ca2+)的变化.结果显示洋地黄毒苷明显抑制NCI-H446细胞增殖,AO-EB染色、DNA电泳及AnnexinV检测法显示细胞有明显的凋亡现象,PI染色显示处于S期的细胞增多,激光共聚焦显微镜观察表明细胞内活性氧和钙离子浓度均升高.表明洋地黄毒苷能明显抑制NCI-H446细胞增殖,且细胞被阻滞在S期.细胞内活性氧和钙离子浓度的增加可能与其诱导细胞凋亡有关.     

硒诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的：研究硒抑制肿瘤细胞生长的机理。方法：采用DNA电泳及流式细胞仪分析等方法。结果：硒能诱导Hela细胞调亡。1．5％琼脂凝胶电泳呈现典型的阶梯现象。流式细胞仪检测显示大量的亚二倍体细胞。结论：硒促进Hela。肿瘤细胞凋亡,可能是硒抑制肿瘤细胞生长的机理之一。     

神经毒素MPP+诱发PC12细胞凋亡的实验研究

采用细胞体外培养、噻唑蓝(MTT)比色法、荧光染色技术、透射电镜、流式细胞技术结合的方法,研究了神经毒素MPP 对PC12细胞增殖和凋亡的影响,为进一步研究药物的神经保护作用提供实验模型.结果表明,MPP 对PC12细胞的诱导凋亡作用呈时间和剂量相关性.0.20mM的MPP 作用于PC12细胞48h后,细胞的存活率降低为60%,细胞核发生凝集和断裂,超微结构发生了一系列的变化,呈现出明显的凋亡特征.流式细胞技术的Annexin v-FTTC和PI双染法显示,活细胞占20.2%,晚期凋亡/坏死细胞占51%,早期凋亡细胞占6.75%.提示,MPP 能够诱导PC12细胞凋亡,是研究神经保护作用药物很好的体外实验模型.     

蜂胶黄酮Pinobanksin-3-acetate对结肠癌HCT-116细胞增殖及凋亡的影响

 为探讨蜂胶黄酮(Pinobanksin-3-acetate, PB3A)对结肠癌HCT-116 细胞增殖及细胞凋亡的影响, 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法, 检测不同浓度、不同时间PB3A、5-氟尿嘧啶(5-FU)及两种药物联合作用对HCT-116 细胞生长所产生的影响, 倒置显微镜观察细胞的形态学变化特点, Annexin V-FITC/PI 双染色、流式细胞仪检测药物作用24 h 后的细胞凋亡率。结果显示, PB3A 对HCT-116 细胞增殖有明显的抑制作用, 并呈浓度和时间依赖性。其抑制活性与5-FU 几乎没有显著性差异, 联合用药具有协同效应; 在一定剂量范围内, 可见凋亡细胞明显增多。流式细胞仪分析结果表明, 细胞凋亡率明显上升, 呈剂量依赖性。PB3A 对HCT-116 细胞具有明显的增殖抑制和诱导细胞凋亡作用。     

Host cell apoptosis induced by infection with duck swollen head hemorrhagic disease virus

This study aimed to examine the host cell apoptosis in the tissues of Peking ducks infected with duck swollen head hemorrhagic disease virus (DSHDV). The dynamic changes associated with apoptosis occurring in the internal tissues were evaluated at different time points postinoculation (PI) by performing hematoxylin and eosin (HE) staining, followed by light microscopy, terminal deoxynucleotidyl transfe- rase dUTP nick-end labeling (TUNEL) assay, and transmission electron microscopy (TEM). The results showed that DSHDV infection could induce apoptosis in host cells, including those of the bursa of Fabricius (BF), thymus, spleen, liver, intestinal tract, kidney, and esophagus. The apoptotic index (AI) values increased with time from 2 h to 72 h PI, and the highest values were recorded at 72 h PI. Further, cell death due to classic necrosis was observed in the dying or deceased ducks after 72 h PI. In conclusion, host cell apoptosis can be induced by DSHDV and may play an important role in the pathogenesis of duck viral swollen head hemorrhagic disease (DVSHD).     

琐琐葡萄多糖对PC12细胞损伤的神经保护作用

 体外培养PC12细胞,采用20μmol/L β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)作用24h诱导细胞损伤,建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,研究琐琐葡萄多糖(VTP)对PC12细胞损伤的神经保护作用。设立对照组、模型组和VTP保护组(20,40,80μg/mL),CCK-8法检测各组细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,化学比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果显示,20,40,80μg/mL VTP可提高PC12细胞存活率,减少LDH渗漏,增加SOD活力,减少MDA含量,降低细胞凋亡率,与模型组比较有显著差异(P<0.01)。由此推论,VTP对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤具有明显的保护作用。     

缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液对Hep G2细胞缺氧耐受性的影响

目的:探讨缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液(HP)对Hep G2细胞缺氧耐受性的影响.方法:用4种浓度的HP作用于缺氧(2%O2)培养HepG2细胞,以同浓度正常小鼠脑匀浆提取液(NP)作对照,检测了在缺氧培养后,Hep G2细胞的MTT值、早期凋亡率(Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测)、晚期凋亡率(Hoechst33258染色荧光显微镜检测).结果:低浓度HP对Hep G2细胞有保护作用,而高浓度HP对Hep G2细胞有损伤作用.结论:HP的作用有浓度依赖性和时间依赖性.     

Cinobufacini-induced HeLa cell apoptosis enhanced by curcumin

When used in combination with certain chemotherapies, curcumin has been shown to increase apoptosis in several cancer cell lines. Here, we report the combined effects of curcumin and cinobufacini on human cervical carcinoma cells. The aim of this study was to examine whether curcumin could enhance apoptosis induced by cinobufacini. 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-y1)-2,5- diphenytetrazolium bromide (MTT) assays revealed that the growth and proliferation of HeLa cells could be inhibited by 75% after a combined treatment of 25 μg/mL cinobufacini and 8 μg/mL curcumin. The combined treatment is 3 times more effective than treatment with 25 μg/mL cinobufacini alone. Annexin V-FITC/PI staining, morphological changes and immunofluorescence verified a significant enhancement in cinobufacini-induced apoptosis when cells were also exposed to curcumin. The data showed that the proportion of early apoptotic cells significantly increased from 15.43% in cells treated only with 25 μg/mL cinobufacini to 49.2% in cells treated with 25 μg/mL cinobufacini and 8 μg/mL curcumin. Moreover, compared with treatment of only 25 μg/mL cinobufacini, ROS production increased 1.7-fold, the intracellular free Ca 2+ concentration increased 1.5-fold, and the mitochon- drial membrane potential decreased by 20% in the combined treatment. Simultaneously, the atomic force microscopy (AFM) re- sults suggest that cells treated with a combination of cinobufacini and curcumin varied significantly in shape and ultrastructure. Collapsed cells with leaking cytoplasm, blebbing pores and emerging apoptotic bodies were prevalent. The nanoparticle size increased from 70 nm when the cells were treated with 25 μg/mL cinobufacini to 190 nm when the cells were treated with 25 μg/mL cinobufacini and 8 μg/mL curcumin. The size increase resulted in the cell membrane becoming considerably rough. These results can improve our understanding of combination treatments. Specifically, the combination of cinobufacini and curcumin may potentially find use as a novel cervical carcinoma treatment. Additionally, AFM is a powerful tool that can be used to explore cellular morphologies and ultrastructures.     

4HPR诱导Hela细胞凋亡

目的：实验结果证明4HPR对Hela细胞具有较强的抑制作用,本文从细胞凋亡角度研究4HPR抑制Hela细胞生长的机理。方法：采用电子显微镜、细胞DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等方法,分析4HPR诱导Hela细胞凋亡的形态学、生化学及细胞生物学改变特征。结果：电子显微镜下：细胞固缩、核膜扭曲、核染色体聚集成块并靠近核膜;细胞DNA被降解,在1．5％琼脂糖凝胶电泳上出现典型的阶梯状图谱（DNALadder）;流式细胞仪检测出现大量亚二倍体细胞核型峰,二倍体细胞峰减少。结论：上述结果表明,4HPR可诱导Hela细胞凋亡。4HPR抑制Hela细胞生长的机理之一是诱导读细胞凋亡。