微生物实用技术简介

1 酵素菌技术 这是日本微生物专家岛本觉也在本世纪40年代发明的一种生物技术,目前已在16个国家推广。酵素菌是由细菌、酵母菌、放线菌3大类21种有益微生物组成的群体,含有几十种酶,具有极强的好气性发酵分解能力,可制成酵素菌肥料和酵素菌浓缩饲料,不仅能提高产量,改良品质,还能间接增强人体免疫力。 2 EM技术 这是80年代初日本琉球大学发明的一种生物技术,眼下已在63个国家推广。它是由10届80种微生     

用氧化水观点解释酶促过氧化氢歧化分解的反应机理

认为过氧化氢酶（ＥＣ１．１１．１．６）催化过氧化氢歧化分解反应的机理是：过氧化氢酶结合一分子Ｈ２Ｏ２形成化合物Ⅰ后，催化该Ｈ２Ｏ２异构化为一种氧化性能很强的Ｈ２Ｏ－Ｏ，然后，放出活性氧原子去氧化另一个Ｈ２Ｏ２分子产生２Ｈ２Ｏ和Ｏ２；并认为Ｈ２Ｏ２异构化为Ｈ２Ｏ－Ｏ是该总反应的控制环节。据此观点，进行了单分子反应理论ＲＲＫＭ计算，其结果和实验基本一致。     

用氧化双观点解释酶促过氧化氢歧化分解的反应机理

认为过氧化酶（ＥＣ１．１１．１．６）催化过氧化氢歧化分解反应的机理是：过氧化氢酶结合一岔子Ｏ２形成化合物Ｉ后，催化该Ｈ２Ｏ异构化为一种氧化性能很强的Ｈ２Ｏ－Ｏ，然后，放出活性氧原子去氧化另一个Ｈ２Ｏ２分子产生２Ｈ２Ｏ和Ｏ２；并认为为Ｈ２Ｏ２异构化为Ｈ２Ｏ－Ｏ是该总反应的控制环节，据此观点，进行了单分子反应ＰＲＫＭ计算，其结果和实验基本一致。     

温室黄瓜应用酵素菌肥试验简报

在高效节能日光温室中，进行黄瓜酵素菌积肥 追肥与有机肥 尿素的对比试验。结果表明，施用酵素菌肥可使温室黄瓜采收期提前3-4天，延后8-10天；促进黄瓜生长，提高黄瓜品质；增强抗病性；具有明显的增产、增值作用，增产率达10％以上，亩增值769-865元。     

产耐热过氧化氢酶菌株的筛选和培养

过氧化氢酶能催化过氧化氢的分解,在食品、环保、纸浆和造纸业、以及纺织行业具有重要的工业应用价值。研究从堆肥中分离了一株产过氧化氢酶的嗜热菌。该菌最适生长温度为55℃,最适生长pH值为7.0,最适NaCl浓度为1.5%。通过16S rDNA编码基因序列分析,该菌和环状芽孢杆菌有较高的同源性,命名为Bacillus sp.SHT2。通过对培养基中的碳、氮源进行优化,酶活达到196.9 U/mL。酶学性质研究表明该菌产生的过氧化氢酶具有良好的热稳定性、pH稳定性和储存稳定性。     

通过复合菌系获取胞外木聚糖酶策略及其特性研究

为了获得高效木质纤维素复合酶,从秸秆堆肥土壤中经过长期定向驯化,筛选到一组可快速分解秸秆且稳定的复合菌系.该复合系菌系对水稻秸秆具有很强的分解能力,并产生乙酸、丙酸、丁酸等挥发性有机物.分解能力测定和DEEG分析结果表明,复合菌系经长期定向驯化,分解功能和微生物组成稳定.该复合菌系在常温液体静止培养条件下高效分泌胞外木聚糖酶,木聚糖酶活最高可达13.2IU/mL.从复合菌系获取的胞外粗酶液对秸秆具有明显水解糖化能力,经48h水解,玉米秸秆芯和水稻秸秆分别减重21.1％和11.9％,还原糖含量分别为2.4g/L和1.3g/L.     

产β—1，3—葡聚糖酶链霉菌菌株的筛选及其酶特性研究

从大白菜植株根际土壤中取样，通过茯苓粉琼脂培养基的透明圈试验，分离筛选到4株产β—1，3—葡聚糖酶的链霉菌菌株R8，R15，R31和AS。经比较发现，链霉菌菌株R15最早产生较明显的透明圈，且透明圈最大，澄清度最高，从R15菌株提取酶液，测定其分解β—1，3—葡聚糖的酶活力。结果表明，该酶作用的最适温度为55℃，最适pH为5．0；低于55℃，pH7．5以下，该酶较稳定；Fe^3 ，K^ ,Cu^2 ，Hg^2 对酶有抑制作用，而Ca^2 ,Fe^2 ，Ba^2 ，Mn^2 ，Al^3 及Zn^2 对酶有激活作用，抑菌圈试验表明，该酶对小麦纹枯病菌具有很强的抑制作用，抑菌圈宽度达15mm。盆栽防病试验结果表明，小麦种子经酶液处理后，病根率为34．51％，防病效果为64．28％。     

胡萝卜施用“禾肥宝”牌酵素菌有机肥的肥效试验

在乌兰县胡萝卜的种植中,进行了“禾肥宝”牌酵素菌有机肥肥效试验。结果表明：“禾肥宝”牌酵素菌有机肥能够促进胡萝卜肉质根长、肉质根横径、单根重的增长,提高产量,对胡萝卜肉质根的裂根率,分叉率影响不大;“禾肥宝”酵素菌有机肥2 600 kg/hm^2是乌兰地区胡萝卜施用酵素菌有机肥的最佳施用量。     

分解纤维素菌HT3的筛选及酶活力测定

从不同榈中分离出能分解纤维素菌２９株，经复筛得到产纤维素酶活力较高菌有６株，其中ＨＴ３细菌酶活力最高。该菌产酶为胞外分泌，在最适条件下培养，酶活力可达５．１Ｕ。     

高活性纤维素分解菌株的筛选及其产酶条件的研究

本实验采集了不同环境的25种土样，用以滤纸为唯一碳源的赫奇逊培养基进行纤维素分解菌的初筛，发现香菜地、韭菜地、萱草地、菠菜地里的菌群能很好地分解纤维素，而且以细菌为主；再经CMC－Na平板培养基复筛，结果菠菜地土样中的混合菌溶解圈最大最明显，将混合菌进行分离，并对分离出的细菌进行产酶条件的研究，结果得出，以pH为7.0，温度45℃条件下，摇床培养大约10h，酶活性最好。     

海洋细菌Pseudomonas sp.7-11产碱性蛋白酶的研究

本文研究了海洋细菌Pseudomonas sp.7-11产碱性蛋白酶的发酵条件及调控机制，并对该蛋白酶进行了分离纯化，实验结果显示，7－11为好氧菌，具有某些嗜低温的特性，而且适宜在偏碱性的条件下生长并产酶；酪蛋白培养基适合该菌株产酶；K^＋对产酶起关键作用；复合氨基酸对产酶有抑制作用，发酵液经盐析和离子交换层析等得到了两个活性峰，其中一个峰达到电泳纯，因此该菌产生蛋白酶不止一种。     

酵素食品发酵工艺研究

近年来,由于酵素食品的多种保健作用,在日本和我国已成为保健人群的新宠。以红薯、酸枣仁为主要原料,通过复合多种益生菌进行酵素食品的最佳发酵工艺研究。采用正交设计法对乳酸菌的接种量、发酵时间、发酵温度等工艺条件进行了研究。通过SOD酶活力的测定结果以及活菌总数测定结果,确定出最佳的发酵工艺条件为温度42,℃,发酵时间8,h,接种量1.5%,,红薯酵素配料比红薯∶水=1∶10,加糖2%,,酸枣仁酵素配料比为酸枣仁粉末∶水=1∶25,加糖4%,。     

深海适冷假交替单孢菌Pseudoaltermonas sp.SM9913产适冷蛋白酶的条件优化

对深海适冷假交替单孢菌Pseudoaltermonas sp．SM9913适冷蛋白酶的发酵产酶条件进行了优化．研究结果表明，在发酵培养基中添加一定量柠檬酸钠有利于提高产酶；较难分解利用的氮源，如豆粕、豆粉，能诱导适冷蛋白酶合成，而较易吸收利用的氮源，如豆粕水解液、蛋白胨、尿素、铵盐等，对产酶有抑制作用；添加表面活性剂吐温80和SDS能促进酶向胞外的分泌；钙、镁离子促进产酶，锌、铜、铁离子对产酶有抑制作用；发酵产酶是好氧过程，装液量较少对产酶比较有利；发酵培养基初始pH7．0～8．0利于产酶．在优化后的发酵条件下，Pseudoaltermonas sp．SM9913产适冷蛋白酶量较原来提高了约65％，为适冷蛋白酶向着工业化生产应用提供了基础数据．     

漆酶的分子生物学研究及其应用

白腐菌所分泌的木质素降解酶主要有3种：木质素过氧化物酶、锰依赖过氧化物酶和漆酶．漆酶是近年来研究较多的一种含铜的多酚氧化酶，在白腐菌中普遍存在，也存在于少数低等真菌和植物中．漆酶多为酸性蛋白，含4个铜离子，形成3个活性区域；表面一些氨基酸被不同程度地糖基化．漆酶可催化的底物迭250种，铜离子结合区域在其催化氧化过程中起决定性作用．运用PCR技术cDNA文库技术，越来越多的漆酶基因被克隆，目前已克隆到的漆酶基因有大约20个．许多来源地基因都是以家族地形式存在于染色体上的．已研究的漆酶基因中都含有10个左右的内含子，这些内含子在活性域位置上有比较高的保守性．一些特珠序列存在与否决定了该酶的表达形式-诱导型或组合型．目前已有部分漆酶基因的异源表达获得成功．本文还介绍了漆酶在环境保护、造纸工业、食品工业等方面的应用．对近年来漆酶的研究进展进行了综述．     

杂种优势的一种可能的分子机理——杂合酶的协同效应

根据酶的结构与催化功能关系原理，提出了杂种优势的一种分子机理的假设，即杂合酶的协同效应，显性互补和异质等位基因互补是其中两个特例。应用杂合酶的正负协同效应能够很好地解释杂种优势的正负性和强弱性。杂合酶的特性与杂种优势的许多性质是一致的。杂合酶的活性多态性得到了同工酶的验证，其中的杂合酶活性强度与杂种优势有很强的正相关。从多聚酶的亚基间相互作用所产生的构象变化的传递形成的催化反应的协同性，讨论了杂合     

亚铁配合物模拟过氧化氢酶研究

应用碘化钾显色和紫外可见分光光度法，在２０℃下研究了亚铁－组氨酸配合物与亚铁－三乙烯四胺模拟过氧化氢酶催化过氧化氢分解反应。提出了一种金属配合物催化的数学模型。计算结果表明，金属离子的恰当配位体的络合作用，对得得良好催化性能的金属配合物很重要。     

酶催化分解双氧水的动力学性能研究

在经典实验的基础上,以猪肝中提取的酶作为催化剂,与传统的催化剂相比,酶受外在因素影响更为敏感。实验过程中选取3个因素(温度、浸取时间、pH)作为变量,进行初步定量分析,并以此设计正交实验,为动力学参数的测定提供良好的依据。在动力学参数的处理上,采用的是Guggenheim法处理过氧化氢催化分解反应动力学数据,此法不用测量V∞,可减小误差。当浸取时间为8小时,温度为37℃,pH为6.8时,酶催化过氧化氢分解效率达到最高;在3个考察因素中,pH对酶催化效率影响最大。酶催化双氧水分解的动力学数据表明,其反应速率常数变化不规律,受环境影响较大。     

钌卟啉作为双功能模拟酶的研究

以３种钌卟啉［Ｒｕ（ＴＰＰ）（ＣＯ），Ｒｕ（ＯＥＰ）（ＣＯ），Ｒｕ（４－Ｃｌ－ＴＰＰ）（ＣＯ）］作为超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）双功能模拟酶。核黄素－蛋氨酸光照法证实它们在１０＾６￣１０＾５ｍｏｌ·Ｌ＾－１浓度范围内有清除Ｏ２·的作用；分光光度法证实它们能催化Ｈ２Ｏ２的分解，且分解率随浓度增大而增大；用小鼠肝匀浆法测定Ｒｕ（ＴＰＰ）（ＣＯ）、ＳＯＤ和ＣＡＴ，均表明具有较好的抗脂质     

糙皮侧耳Ax3产漆酶条件及部分酶学性质研究

对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)Ax3菌的漆酶产生条件进行了研究，该菌产漆酶较高的条件是：培养温度25℃，培养基pH5．5，每升C／N含量0．252g／0．021g；加入0．05％～0．1％的吐温可提高漆酶酶活12倍。对漆酶的部分生化性质研究表明：最适反应温度25℃；最适反应pH2．8；琥珀酸缓冲液效果最好；金属离子：Mn^2 ，Cu^2 ，Zn^2 对漆酶有较强的激活作用，其中Mn^2 相对活性最高，Ag^ ，K^ ，Ca^2 ，Fe^2 对漆酶活性有抑制能力，其中Ag^ 的抑制作用明显。     

壳聚糖-Cu(Ⅱ)对H2O2的分解催化性能研究

合成了壳聚糖-Cu(Ⅱ) [CS-Cu(Ⅱ)],并进行了IR、TG/DTA表征和模拟过氧化氢酶催化过氧化氢分解实验. 结果表明CS-Cu(Ⅱ)在室温至240 ℃下具有良好的热稳定性; CS-Cu(Ⅱ)具有过氧化氢酶的作用,能够较好的催化H2O2分解;温度,反应时间及pH值等都是影响壳CS-Cu(Ⅱ)催化性能的重要因素.