溶菌酶标准酶活曲线测定方法的改进

天然溶菌酶活性(标准酶活)的测定是蛋白质复性研究过程中的一个关键步骤.为了增加测定数据的准确性和可比性,改进了测定标准酶活的方法.在固定其他条件的前提下,对于影响标准酶活的重要因素-温度,采用空调控制室温的方法,使其规律性由低到高变化.同时将测活液放置在与所控制室温相同的水浴环境中保持温度,测出各种温度下曲线的斜率,用直线进行拟合.对于其他没有测定的温度点,可以从拟合曲线中求出.这样,通过一组实验便可以得到任意温度下的标准酶活.     

眉斑并脊天牛纤维素酶性质的研究

为了了解眉斑并脊天牛(Glenea cantor)纤维素酶的性质,选取以木棉树(Bombax ceiba)为食的眉斑并脊天牛为研究对象,按照IUPAC的标准测定方法,测定和定位眉斑并脊天牛肠道中的内切-β-1,4葡聚糖酶、纤维二糖酶以及滤纸酶活力,考察内切-β-1,4葡聚糖酶的最适pH值和最适温度.结果表明:在眉斑并脊...     

溶菌酶标准酶活曲线测定方法的改进

天然溶菌酶活性（标准酶活）的测定是蛋白质复性研究过程中的一个关键步骤。为了增加测定数据的准确性和可比性,改进了测定标准酶活的方法。在固定其他条件的前提下,对于影响标准酶活的重要因素-温度,采用空调控制室温的方法,使其规律性由低到高变化。同时将测活液放置在与所控制室温相同的水浴环境中保持温度,测出各种温度下曲线的斜率,用直线进行拟合。对于其他没有测定的温度点,可以从拟合曲线中求出。这样,通过一组实验便可以得到任意温度下的标准酶活。     

超氧化物歧化酶—邻苯三酚自氧化测活方法的改进

本文对邻苯三酚自氧化测定超氧化物歧化酶活力的方法做了部分改进,使其操作更简便省时,节省试剂;并对该实验条件下反应的动力学做了初步研究,表明该法比较适合经部分纯化的酶活测定,结果比较稳定,认为是柱层析中大批量活性跟踪的首选方法,可作为自动分析的基础。     

高温大曲中筛选产纤维素酶的耐高温芽孢杆菌

从高温大曲中筛选出产纤维素酶的芽孢杆菌1株,进行形态特征、生化鉴定和16S rDNA序列分子鉴定,该菌株鉴定为Bacillus cereusFrankland.对该菌株进行产酶摇瓶液体发酵,测定其内切纤维素酶活力和外切纤维素酶活力分别为260.32,87.22u.mL-1,对该菌株进行产酶固态发酵,测定其内切纤维素酶活力和外切纤维素酶活力分别为556.64,121.47u.mL-1.酶的稳定性实验显示该菌株产纤维素酶在60℃以下和在pH4～8范围内具有良好的热稳定性和pH稳定性,利用响应面法优化固态发酵产酶培养基,优化后测定纤维素酶活提高至1 643.27u.mL-1.     

绿色木霉纤维素酶酶活力的研究

探讨不同碳源、氮源、无机盐等因素对绿色木零纤维素酶活力的影响，利用滤纸酶活测定法和DNS比色法测定样品中的葡萄糖含量，间接求出酶总活力．得到的最终优化结果为：磷酸二氢钾789．65mg、氯化钴0．80mg、硫酸镁68．25mg、硫酸亚铁0．80mg、硫酸锰0．80mg、麦麸0．58g、稻草粉0．56g、尿素0．57g、硫酸铵0．23g，所测酶活比原培养基提高8％．     

纤维素酶的活力与棉纤维的失重

研究了纤维素酶活力与织物失重率、断裂强力、表面厚度和弯曲刚度的关系.用三种纤维素酶处理两种全棉织物,将处理结果(失重率等)与以滤纸、CMC、脱脂棉为底物测得的酶活力相比较.结果表明,脱脂棉酶活最能反映纤维素酶对棉织物的水解能力,而CMC酶活与酶的实际水解能力不存在明显的依赖关系.研究还表明,外切酶活较高的Cellu-soft L有利于使织物柔软,内切酶活较高的Cellusoft Plus有利于生物抛光.     

纤维素酶产生菌——根霉的分离选育与鉴定

6月在兰州榆中县兴隆山次生林区采集潮湿的腐质土壤、枯枝落叶、腐烂的植物种子、果实和朽木等样,用羧甲基纤维素钠培养基初筛,根据水解圈与菌落直径之比大小和水解圈清晰度分离筛选出较多的产纤维素酶菌株,其中有真菌、放线菌和细菌等.进一步通过测纤维素酶活力复筛,最终筛选出滤纸酶活力FPA和羧甲基纤维素酶活力同时都较高的菌株10株。经形态学鉴定10株均为霉菌,其中酶活最高的菌株分别是58-3A,42-2A和50-2B,它们的粗酶液崩解滤纸效果快速明显.58-3A的FPA酶活是497.78 U,CMC酶活是1376.2 U.10株之中菌株50-2B和菌株50-2C的菌落形态与其他菌株区别较大,经形态学鉴定菌株50-2B和50-2C都是根霉属.菌株50-2B的FPA酶活是218.88 U,CMC酶活是1571.4 U,菌株50-2C的FPA酶活是273.78U,CMC酶活是1084.62U.     

嗜热侧孢霉2441纤维素酶产酶条件优化及突变株选育

为了提高嗜热侧孢霉2441纤维素酶的产量,对产酶条件进行了优化,测定了酶的特性,对选育抗葡萄糖效应突变株和中温型突变株进行了探索.实验中酶活力测定以微晶纤维素、CMC-Na和水杨苷为底物,DNS法测定还原糖;产酶条件优化采用正交试验设计,以微晶纤维素酶活为指标;通过NTG诱变和UV诱变选育抗葡萄糖效应突变株和中温型突变株.结果表明:产酶条件优化后,嗜热侧孢霉2441的纤维素酶活极显著提高(P0.01);2441的微晶纤维素酶、CMC-Na酶和β-葡萄糖苷酶的最适作用温度分别为60℃、65℃、70℃,最适作用pH值均为5.5,温度高于70℃及碱性条件下,酶活力显著下降;选育的抗葡萄糖效应突变株N20-01,微晶纤维素酶活提高13.203%,CMC-Na酶活提高47.176%,β-葡萄糖苷酶活提高119.517%;选育的中温型突变株U40-03,在32℃培养时与2441在45℃培养时相比,微晶纤维素酶活提高11.411%,CMC-Na酶活提高29.484%,β-葡萄糖苷酶活提高54.759%.     

DNS法测定纤维素酶活力最适条件研究

鉴于纤维素酶研究和生产中,纤维素酶活力测定和酶活力单位的表示方法很不统一的现象,本文研究和分析了３,５－二硝基水杨酸法测定羧甲基纤维素酶糖化力的实验条件,如：温度、ｐＨ、酶促反应时间、ＤＮＳ显色时间、波长等．实验表明：在５０℃,ｐＨ４．６条件下酶促反应时间５ｍｉｎ,ＤＮＳ显色５ｍｉｎ,于４９０ｎｍ处测定ＯＤ值比较适宜．     

一株生孢噬纤维菌的纤维素酶的定位研究

生孢噬纤维细菌Sporocytophaga sp.JL-01是能够降解纤维素的滑动细菌, 通过对该菌株发酵上清液、荚膜液、超声波破碎后的上清液、破碎细胞碎片及完整细胞的CMC酶活、滤纸酶活的研究,对其所产生的纤维素酶在细胞上的定位进行了研究.结果显示:生孢噬纤维细菌Sporocytophaga sp.JL-01可通过细胞质膜向细胞外分泌CMC酶,而其滤纸纤维素酶则存在于细胞质膜上.     

产碱性纤维素酶真菌产酶条件的研究

研究了碱性纤维素酶生产菌株镰刀霉菌(Fusarum Sp.)的产酶条件.结果表明:该菌株产碱性纤维素酶的适宜碳源为1%麦杆粉+1%可溶性淀粉,最适氮源为O.2%的(NH_4)_2SO_4加0.1%的酵母粉,接种量为5%,培养时间为72 h,培养温度为46℃,培养基初始pH为8.0.在最适宜的条件下,培养液中内切葡聚糖酶活力可达到1.29 IU/mL,而天然纤维素酶活力和滤纸酶活力却很低.具有这种组分结构的碱性纤维素酶系统在棉织品的生物整理及洗涤剂工业中具有良好的应用前景.     

纤维素酶法提取玫瑰花渣多糖工艺研究

采用单因素实验和L9（34）正交试验,研究纤维素酶酶解时间、酶解温度、酶解pH、酶加量对多糖得率的影响。利用还原糖测定仪测定经酸水解的多糖。结果表明,酶的反应温度和酶解pH值是提取玫瑰多糖的主要因素。最佳工艺方案为：酶反应温度50 ℃,酶反应pH值为4.6,酶反应时间150 min,酶加量为4.5%。酶反应完后以料液比1∶30在100℃下提取5 h,在此工艺条件下,提取液中玫瑰多糖的得率为11.1%,可溶性多糖提取率为4.49%。     

酶酸结合法降解植物纤维素新工艺

以麦秸为材料,研究乙酸、盐酸等对纤维素酶降解纤维素的影响;设计出降解纤维素的2个工艺方案:方案1是先酸解后酶解;方案2是先酶解后酸解。在这2种工艺方案基础上,研究一种酶酸循环降解法(CDCA法)。研究结果表明:方案2优于方案1;CDCA法亦明显优于方案1和方案2;以CH3COOH,HCl和纤维素酶为降解剂,在常压、温度低于100℃、反应12～15 h的条件下,CDCA法能使纤维素转化成葡萄糖的转化率达98.68%,反应终液中葡萄糖质量分数达5.38%;与常规技术相比,CDCA法只需25%的醋酸、50%的盐酸和少量的酶,可以大幅度地降低纤维素转化成葡萄糖的成本;本研究的酶酸结合法降解纤维素新工艺具有条件温和、工艺简单、成本低和周期短等特点,该工艺方法可为发酵工业上以纤维素为原料从事乙醇、抗生素、SCP等产品的开发生产及环保上固态生活垃圾的生物处理提供科学依据。     

中性纤维素酶整理丝光棉织物工艺的确定

研究中性纤维素酶整理丝光棉织物后对其性能的影响．通过实验分析酶用量、pH值、整理温度和时间对织物失重率、顶破强力、硬挺度及抗起毛起球性的影响,并最终确定最佳工艺条件．实验结果表明,中性纤维素酶整理丝光棉织物的最佳工艺为酶用量2％（0．w．f）,pH值为7．5,整理温度50℃,整理时间55min．在最佳工艺条件下整理的丝光棉织物,各方面性能有不同程度的改善．并且,顶破强力控制在220N以上,仍能保持织物应有的使用性能．     

葡聚糖凝胶层析法分离纯化纤维素酶的研究

用绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ）高产变异菌株４１３１产生的纤维素酶粗酶分别过ｓｅｐｈａｄｅｘＧ２５、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ５０、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ７５、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１００和ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１５０柱层析．结果表明：ｓｅｐｈａｄｅｘＧ７５对纤维素酶的分离效果最佳,并获得了一个ＣＭＣ酶组份,其比活力提高到原来的４９倍,回收率为４１６％．     

几种糖对纤维素酶热稳定性影响的研究

研究了几种糖对纤维素酶热稳定性的影响。研究发现，20℃下海藻糖和葡萄糖都能较好地保护酶的活性，蔗糖次之，而葡聚糖则不起作用。高温下葡萄糖和蔗糖不但不能保护酶的活性，反而起到破坏作用，而海藻糖和葡聚糖则对酶有较强的保护作用。初步分析，海藻糖作用机理是羟基能替代水分子同酶结合，并且能在酶分子空隙中和酶分子周围形成玻璃态，将酶分子支撑和包裹起来。因此海藻糖能在较宽的温度范围内阻止酶分子空间结构发生变化，从而提高了酶的热稳定性。     

纤维素酶酶解苹果渣的工艺条件

研究了纤维素酶酶解苹果废干渣转化为还原糖的适宜条件 ,实验讨论了不同的温度、酶解时间、酶解底物初始 p H值、底物质量分数、纤维素酶添加量及碱处理条件下对酶解效果的影响。实验结果表明 ,纤维素酶酶解苹果干渣的最适宜条件是在不经过碱处理 ,50℃ ,p H初始值为 5.0 ,纤维素酶用量为每克底物 2 0× 0 .0 1 667× 1 0 -6mol/s的情况下酶解 1 2 h,而底物质量分数在实验所选时间范围内对酶解效果无明显影响     

褐色高温单孢菌PE-211产纤维素酶的酶学特性研究

对褐色高温单孢菌PE-211(Thermomomospora fuscd PE-211)形态学和生物学特征进行了研究,该菌适宜在pH8．0～10．0、55-60℃条件下生长．初步研究了该菌产生的纤维素酶(CMCase)的一些基本性质,结果表明．CMCase最适作用温度为75℃,最适作用pH为9．0,Ca^2 和Mn^2 对酶反应有促进作用,Pb^2 和Hg^2 时酶反应有抑制作用．这种酶制剂在洗涤剂工业中具有良好的应用前景．     

一株产碱性纤维素酶放线菌的分离及酶学特性

目的为了弥补目前学术界在产碱性纤维素酶放线菌研究方面的薄弱环节。方法通过实验从采集的土样中,分离获得6株不同菌株,利用CMC透明圈、刚果红染色及酶活测定从中筛选出1株酶活较高的放线菌菌株H,经鉴定,该菌株为间孢囊菌属的一个种(Intrasporangiumsp.);通过液体振荡培养法,对该菌株的发酵条件进行研究,并对该菌株酶系组成及特性进行探讨。结果该菌株为好氧型兼性嗜碱菌,当接种量为6%,pH为8,在28℃条件下振荡培养5 d时生长良好。结论此菌株可产生碱性纤维素酶(CMC酶),且该酶大部分属内切β-1,4葡聚糖酶,其初始酶活力为2.912 IU/mL。酶反应温度为40℃时,酶活力可达到6~10 IU/mL;当pH为6~11,温度为10~60℃时,酶活力可保持在60%以上,能较好地满足日常洗涤的环境要求。