猪血超氧化物歧化酶的研究(Ⅱ)——右旋糖苷对猪血超氧化物歧化酶的共价修饰

用高碘酸钠活化右旋糖苷,对猪血超氧化物歧化酶进行共价修饰,修饰酶完全保留了天然酶的酶学特性和抗胰蛋白酶水解的能力,而且修饰酶的热稳定性明显提高。     

尿激酶化学修饰的研究(Ⅱ)——肝素对尿激酶的共价修饰

本文报导了肝素对尿激酶侧链氨基的化学修饰作用,並对修饰酶与天然尿激酶的某些性质进行了对比研究。结果清楚地表明,酶的化学修饰作用增强了抗酸、碱能力和抵抗稀释溶液中酶变性失活的能力;提高了酶的抗胃蛋白酶水解的能力。因此,我们认为修饰尿激酶比天然酶具有更广泛的临床应用价值。     

天然与修饰超氧化物歧化酶某些物化性质的比较

本文对天然与月桂酸修饰的超氧化物歧化酶的某些物化性质进行了比较，结果表明，修饰酶较天然酶的稳定性显著增加，且保留了天然酶的大部分活性，具有广泛的应用前景。     

水溶性大分子修饰~(125)I-尿激酶在小白鼠体内的分布及代谢

本文用放射性同位素~(125)Ⅰ示踪方法对比研究了水溶性大分子修饰酶与天然酶在小白鼠体内的滞留率;通过对标记物在各脏器中的分布及代谢的研究,对修饰酶的性质及临床应用前景做出了判断。 实验结果表明;右旋糖酐及右旋糖酐磺酸酯修饰了的尿激酶明显地延长了它们在血液中的停留时间;尿激酶进入体内后,主要分布于肝及肾脏中,脾、肺及心脏中分布很少;修饰酶与天然酶在肝及肾中的变化很不一致,天然酶在其主要排泄器官肾中分布较高,而修饰酶在肝中的分布则略高于天然酶。     

高碘酸活化肝素修饰~(125)Ⅰ-尿激酶在小白鼠体内的分布与代谢

本文用~(125)Ⅰ示踪法对此研究了高碘酸活化肝素修饰尿激酶和天然尿激酶在小白鼠体内的分布与代谢。结果表明,与天然酶相比,修饰酶在其主要排泄器官(肾脏)中分布较低,在肝脏则相反。修饰酶不仅完全保留了天然酶的活性,而且明显地延长了在血液中的滞留时间。     

福建部分海藻凝集素的检测

用天然和经酶修饰的绵羊、兔、鸡，以及人的Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型和Ｏ型７种红细胞，对产于福建的１６种海藻（绿藻１种、红藻８种、褐藻７种）进行了凝集素的检测．实验结果表明，每种海藻提取液至少能凝集２种以上天然或经酶修饰的红细胞。在检测的１６种海藻中，褐藻门的铁钉菜、厚网藻和绿藻门的浒苔产生的阳性凝血结果最广泛，能凝集供试的７种天然或经酶修饰的红细胞．红藻门的粗枝软骨藻、褐藻门的扁铁钉、鼠尾藻的凝血能力最差，只能凝集２或３种天然或经酶修饰的红细胞。在７种红细胞中，绵羊血红细胞对海藻凝集素最敏感。各种类型的红细胞经酶（胰蛋白酶）修饰后，对凝集素的敏感性普遍增加（鸡红细胞对几种海藻例外）。     

β-环糊精衍生物与核糖核酸酶的相互作用

用β-环糊精和对甲苯磺酰氯合成单-(6-O对甲苯磺酰基)β-环糊精,以合成的β-环糊精衍生物为主体,核糖核酸酶为客体,对比研究β-环糊精衍生物催化核糖核酸的水解和β环糊精衍生物非共价修饰的核糖核酸酶催化核糖核酸水解的酶活性,分析其催化活性的高低,并对其作用机理进行初步的探讨.β-环糊精衍生物具有水解核糖核酸的催化活性,能够非共价结合在核糖核酸酶上,形成的非共价修饰核糖核酸酶的催化活性比核糖核酸酶要高8.8倍.     

牛红细胞铜锌超氧物歧化酶的化学修饰与性质

用戎二醛交联法对牛红细胞Ｃｕ．Ｚｎ－ＳＯＤ进行化学修饰，得到了热稳定性高，耐酸碱笥优越，抗蛋白酶酶解能力强的修饰酶，该酚分子量约为８６０００，在经外区最大吸收值为２６９ｎｍ，它的荧光激发光谱和荧光发射光谱强度均大于天然酶。     

右旋糖酐对胰岛素共价修饰的研究

本文报导了用高碘酸活化右旋糖酐对胰岛素的化学修饰作用,对比研究了修饰胰岛素与天然胰岛素的某些性质,及其在小鼠体内的分布与代谢。实验结果表明,修饰胰岛素较天然胰岛素的降血糖活性明显提高,增强了热稳定性和抗蛋白水解酶降解能力,修饰胰岛素在其靶器官肝脏中分布显著提高,而在其排泄器官肾脏中的分布低于天然胰岛素,并且明显延长了在体内的作用时间。     

水解度对蚕蛹蛋白酶解物的物化特性和抗氧化能力的影响

对蛋白质进行适度酶解是改善动植物蛋白原料的物化性质和提高其生理活性的常用方法.研究了水解度对蚕蛹蛋白的溶解性、乳化性、起泡性等物化性质的影响,以及水解度对蚕蛹蛋白的还原力,对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除能力等抗氧化特性的影响.实验结果表明,蚕蛹蛋白经适度酶解后溶解性得到显著改善,且水解度越大溶解性越好.蚕蛹蛋白经酶解后乳化性与乳化稳定性均降低,但起泡性和起泡稳定性增强,水解度增至5%时,起泡性和起泡稳定性达到最高值,继续增大水解度,反而下降.蚕蛹蛋白经酶解后抗氧化性显著提高,水解度为5%时,还原力和对DPPH自由基和羟基自由基的清除能力最高,水解度为15%时,对超氧阴离子自由基的清除能力最高,继续增加水解度,抗氧化能力反而下降.这说明,对蛋白质原料进行酶解改性时,不能简单的追求高水解度,而应根据产品的要求控制合适的水解度,过度水解是无益的.     

用活化的单甲氧基聚乙二醇修饰L-天冬酰胺酶

使用活化的单甲氧基聚乙二醇（mPEG2）对L－天酰胺酶进行修饰,修饰过程中加入底物L－天冬酰氨保护酶的活性中心。得到的修饰酶抗体结合能力消失,保留酶比活力32．8％,酶的常温稳定性和热稳定性均有显著提高。荧光胺法科氨基数目得出酶分子的92个自由氨基中有51个被修饰剂结合。     

聚乙二醇衍生物修饰胰蛋白酶的研究

采用各种类型的聚乙二醇衍生物修饰胰蛋白酶,对所修饰酶的酶学性质进行了评价并与原酶比较.结果表明：修饰酶的残存活力受修饰剂的结构、分子量和修饰化度的影响较大,其中分子量为5000-6000的2种聚乙二醇衍生物所修饰的酶活力升高所有修饰酶的热稳定性显著改善,其最适pH值没有发生变化,修饰酶的Km值有所增加．实验表明采用合适的修饰剂对胰蛋白酶进行适度地修饰不会降低酶的活性和改变酶性能.     

两种酶水解明胶的条件筛选及评价

对中性蛋白酶和胰蛋白酶样品进行了以明胶为底物的酶解反应试验,并对两种酶的水解能力进行了比较,确定了两种酶的反应温度、pH值、底物浓度、加酶量以及酶解时间等条件.     

酶法水解鸡肝的工艺研究

采用5种蛋白酶分别对鸡肝进行水解,以水解度为指标,通过单因素试验,对原料预处理方法、酶解温度、pH、酶用量(E/S)、底物浓度及酶解时间等酶解条件进行优化,确定了Alcalase、Neutrase、Protamex、Fla-vourzyme以及木瓜蛋白酶水解鸡肝的工艺条件.综合比较酶解产物的水解度、氮回收率、感官质量和胆固醇含量发现,Alcalase水解能力最强,且产物苦味较弱;而Flavourzyme所得水解产物感官质量最好,无苦味,且具有较好的鲜味;酶解产物中均不含胆固醇.优选Alcalase用于单酶水解鸡肝,通过正交实验优化确定其最佳水解条件为:温度60℃,pH值8.0,加酶量1.25%,水解时间2.5h,底物浓度7.5%.在此条件下所得酶解液水解度为52.62%,氮回收率为85.32%.     

超氧化物歧化酶在模拟人体胃肠环境中稳定性的研究

本文以中国药典中的人工胃液和人工肠液作为模拟人体胃肠环境，对超氧化物歧化酶的稳定性进行了一系列单独及综合的研究。研究结果发现，超氧化物歧化酶在人工胃液中会受到较强的破坏，而在人工液中则颇为稳定。同时还发现，尽管是天然结构的超氧化物歧化酶对胃蛋白酶和胰酶具有较强的耐受力，但被胃酸处理后结构松散的超氧化物歧化酶却可被胃蛋白酶和胰酶较有效地水解。     

家蚕碱性磷酸酶的功能基团研究

用PCMB、NBS、PMSF、TNBS、SUAN、DTT、BrAc、IAc等在一定条件下选择性修饰家蚕碱性磷酸酶的部分氨基酸残基,对酶活力的变化进行测定.结果表明:PMSF、SUAN、BrAc、IAc和TNBS的修饰能显著抑制酶的活性,且酶活力降低程度与修饰剂的浓度相关;PMSF、DTT和NBT的修饰对酶的影响较小.初步认为,巯基和组氨酸的咪唑基可能是家蚕碱性磷酸酶的必需功能基团,赖氨酸残基和二硫键对保护酶的催化能力是必需的.     

包衣酶在油/水两相体系中催化水解橄榄油反应

用合成的谷氨酸十二烷基酯核糖醇对来源于Candidarugosa的脂肪酶包衣后在油/水两相体系中水解橄榄油为反应模型.确定了最佳水油比范围为1～3,最适pH值为7.0左右,温度为30℃,油相有机溶剂为异辛烷.包衣酶的最大活性达到48.8mmol·min-1·g-1蛋白质,是天然酶活性的1.8倍.对底物选择性研究表明:包衣酶和天然酶的最适底物均为橄榄油,酰基链越长,酶活越高.包衣酶的米氏常数只有天然酶的一半,最大反应速度是天然酶的1.4倍.     

酶解制造速溶牛板筋粉

本文使用碱性蛋白酶和风味酶水解牛板筋,制备牛板筋蛋白粉,可应用到火腿、香肠、果奶饮料、口服营养液、天然氨基酸型调味料、乳品等中,产品新颖,具有良好的开发前景。     

1.0代树形大分子(PAMAM)的合成及对阴阳离子的识别

目前生物体内ATP合酶催化ATP水解的研究是生物催化方向的研究热点。为了探索ATP合酶催化ATP水解的机制,本研究模拟生物体系环境,在N2氛围中,采用甲醇溶液回流的发散合成法合成了多功能化的树形大分子,用核磁、红外光谱等方法对其结构进行了表征,并利用其多作用位点的特征对不同阴阳离子进行了识别作用的分析。结果表明:G1.0 PAMAM(L)与Mn2+的识别效果最明显,荧光强度增加18倍,根据修饰的Benesi-Hildebrand方程得到了G1.0 PAMAM与Mn2+最佳配位比为1∶1,结合常数为1.13×104L/mol;采用Job’s法对主客体配位比进行了验证;同时,F-对G1.0 PAMAM荧光猝灭现象最明显,根据修饰的Benesi-Hildebrand方程确定了两者的最佳配位比为1∶1,结合常数为2561 L/mol。该结果开辟了新的一类模拟酶催化剂体系,并为研究ATP合酶的作用机理提供理论依据。     

复合酶法水解花生粕制备抗氧化肽的工艺优化

以DPPH自由基清除率和收率为响应值,采用响应面法对复合酶法水解花生粕生产抗氧化性肽工艺条件进行了优化.研究结果表明,碱性蛋白酶和中性蛋白酶对花生粕具有较强的水解能力,二者以2∶1的比例对花生粕水解时,较优水解条件是50℃,pH值8.54,底物质量分数8.34%.在此条件下酶解16 h,花生肽收率为65.80%,在花生肽质量浓度为0.55 mg/mL时,对DPPH自由基清除率为25.77%,与优化前相比,复合酶比碱性蛋白酶单酶水解时收率和DPPH自由基清除率分别提高了7.48%和7.66%,比中性蛋白酶单酶水解时分别提高了10.29%和22.53%.