用AFM研究杜仲抗真菌蛋白的晶体生长

随着后基因组时代的到来以及蛋白质组学研究的深入开展,研究蛋白质晶体生长成为生物化学和结构生物学领域一个广泛关注的课题.通过使用原子力显微镜(Atomic Force Microscope,简称AFM)对杜仲抗真菌蛋白(eucommia antifungal protein,简称EAFP)的晶体在有母液存在下原位实时动态地进行了晶面生长观察.研究结果表明:不同过饱和度对EAFP晶体生长形貌的影响较大,较高的过饱和度下生长很快,生长台阶密度高,较高的过饱和度下主要进行各向异性二维台阶的发生、发展,较低的过饱和度下主要采用螺旋位错的生长方式,当过饱和度极低时生长缓慢,且晶体表面有很多小孔存在,晶面生长很不完整;还对不同过饱和度下晶体生长速率进行了定量的测量,也反映了过饱和度对EAFP晶体生长的影响;同时对在AFM观察过程中由探针的扫描速度和方向对表面形貌的影响进行了讨论.     

基于超声波辅助法的杜仲籽蛋白提取工艺优化

采用单因素和正交试验方法对超声波辅助提取杜仲籽蛋白工艺进行了优化.先选取料液比、超声时间、超声温度、浸提pH值等条件对杜仲籽蛋白的提取工艺进行单因素实验,采用L9(34)正交试验确定本工艺最佳条件.实验结果表明,在超声波辅助提取杜仲籽蛋白最佳工艺条件（料液比为1∶25,超声时间为30 min,超声温度为50 ℃,浸提pH值为10.0）下,杜仲籽蛋白提取率为77.03%.     

杜仲叶与皮中绿原酸的正交提取对比实验

对四川道地中药材杜仲叶与皮中所含有的一种重要的生物活性物质绿原酸进行提取工艺研究.采用乙醇—水溶液体系作浸提剂,以绿原酸提取率为指标,考察温度、乙醇浓度、料液比、溶剂pH对提取工艺的影响.结果表明,杜仲叶绿原酸的最佳工艺条件为A3B2C3D1,杜仲皮的最佳工艺条件为为A3B1,在此条件下,杜仲叶中绿原酸提取率为3.324%;杜仲皮中绿原酸提取率为0.647%.     

杜仲提取物对鱼类病原菌作用的研究

采用二次水浸提法提取杜仲有效成分进行杯碟法抑菌试验.结果表明,杜仲提取物对嗜水气单胞菌、鳗弧菌、温和气单胞菌具有较好的抑菌效果,而对大肠杆菌的抑菌效果不明显.通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析病原菌在杜仲提取物作用下蛋白的差异表达,结果发现,药物抑菌效果越明显的菌种,其蛋白表达的差异性就越大,且受抑制的蛋白和诱导表达的特异蛋白的分布比较广;而抑菌效果较差的菌种,其蛋白表达差异性较小.     

杜仲翅果籽油与猕猴桃籽油的比较研究

对杜仲翅果籽油和猕猴桃籽油的脂肪酸组成、α-亚麻酸含量及籽油的理化特性等进行了比较研究.研究结果表明：两者脂肪酸GC指纹图谱非常相似,即脂肪酸组成和含量基本相同.亚油酸和α-亚麻酸含量极为相近,且折光指数、密度、气味、色泽等质量指标非常相近.说明杜仲翅果籽油具有与猕猴桃籽油同样的保健功能和开发利用价值.     

原子力显微镜研究蛋白质晶体生长机理及进展

原子力显微镜(AFM)这种能进行微尺度测量的精密仪器是目前研究晶体生长机理最为有效的方法之一,在晶体生长机理研究中起到了重要的作用,尤其是对于蛋白质晶体生长的研究显得更为突出.分别简明地阐述了利用AFM进行蛋白质晶体生长研究的工作原理,以及在这方面已经取得的研究成果,包括二维台阶生长、螺旋位错生长、法向生长、三维成核生长、台阶发展的不对称性、及杜仲抗真菌蛋白(EAFP)和天花粉蛋白(TCS)晶体生长的新进展.论述了利用空间微重力环境进行蛋白质晶体生长及空间蛋白质晶体生长的科研和应用, 指出今后进行蛋白质晶体生长研究的趋势和前景.     

基于转录组高通量测序分析白光对杜仲愈伤组织中绿原酸含量的影响

利用Illumina HiSeq 2500平台对光暗培养的杜仲愈伤组织进行了转录组高通量测序,利用BLAST软件进行差异表达基因的功能注释和富集分析,就白光(光强为12 000 lux,16 h 光照,8 h 黑暗)对杜仲愈伤组织中绿原酸含量的影响进行了研究.结果表明:通过Trinity软件合并组装后共获得62 030个Unigenes,通过BLASTX比对,共获得25 417(40.98%)个有注释信息的Unigenes.通过对KEGG通路进行深入分析表明,白光(光强为12 000 lux,16 h 光照,8 h 黑暗)培养杜仲愈伤组织18 d,与绿原酸合成相关的3种酶基因上调表达,它们分别为苯丙氨酸解氨酶(EC 4.3.1.24,phenylalanine ammonia-lyase,PAL)、肉桂酸-4-羟基化酶(EC 1.14.13.11,trans-cinnamate 4-monooxygenase,C4H)、奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(EC 2.3.1.133,Shikimate o-hydroxyl-cinnamoyltransferase,HCT).由此推断,白光能促进杜仲愈伤组织中绿原酸的积累.研究结果为获取高产绿原酸资源和杜仲遗传分析提供有价值的资料.     

高效液相色谱法同时测定杜仲中的几种多酚酸——超声助提及微波助提和热回流提取技术的比较

微波、超声波和热回流提取技术分别用于提取杜仲中的绿原酸、咖啡酸、没食子酸、原儿茶酸和香草酸,并用高效液相色谱进行分析.考察了提取时间和溶剂对提取效果的影响.结果表明：超声波助提和热回流提取分别需90 min和120 min才能达到最大提取,而微波助提仅需50 s就可达到.在微波助提和热回流提取中,水比甲醇提取效果要好,而在超声波助提过程中,用甲醇作溶剂获得的提取率比水高.3种提取方法的重现性均较好.综合来看,微波助提比超声波助提和热回流提取技术效果更好,更有利于杜仲中酚酸的提取.     

中药杜仲炮制的现代研究进展

目的对杜仲现代炮制的研究进展作一综述。方法通过文献研究,详细分析杜仲炮制火候、辅料及单一成分与药理作用在炮制前后的变化,全面了解杜仲现代炮制研究进展。结果杜仲炮制以盐炙法为主流方法,但炮制方法及条件尚需进一步深入全面的考察。结论建议综合分析杜仲数种活性成分与药理作用在炮制前后的变化,考察影响杜仲炮制效果的主要因素。     

杜仲对不同光强度的适应性研究

研究了不同光强度下一年生杜仲幼苗的光合生理特性。自然光照、一层遮阴、两层遮阴和三层遮阴杜仲幼苗光饱和点分别为：２５ｋｌｘ，２０ｋｌｘ，１７ｋｌｘ和５ｋｌｘ；光补偿点分别为：４．５ｋｌｘ，４．３ｋｌｘ，２．５ｋｌｘ和１．８ｋｌｘ。随生境中光强度的减弱，叶绿素含量增加，；汁绿素ｂ比例增高。生长在弱光环境中的杜仲幼苗株高受抑，叶面积减小，ＣＯ＿２补偿点降低，固定同化ＣＯ＿２能力减弱，净光合速率较低，导致生物产量和桃叶珊瑚甙地含量降低，表明杜仲是喜阳生植物。     

杜仲树皮、树叶、树枝及其生存土壤的X射线能谱分析

用X射线能谱仪测定了杜仲树皮 ,树叶 ,树枝的无机元素组成 ,发现它们有相同的元素组成 :Mg、Al、Si、S、K、Ca、Fe ,但Mg、Ca、Al、Fe元素的质量分数差异较大。对杜仲所生存土壤也进行了X射线能谱分析 ,统计分析了杜仲树皮、树叶、树枝对土壤中无机元素的吸收情况     

杜仲细胞的悬浮培养

杜仲外植体在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ的培养基上可诱导出生长速度快、离散性好、适合于悬浮培养的愈伤组织；愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的液体培养基上进行振荡培养，经３～４次继代，即可建立起悬浮细胞系；悬浮细胞的形状为长形、椭圆形、圆形和“月牙”形。     

杜仲叶片蒸腾速率的因子分析

利用ＬＩ－１６００稳态气孔计测定了杜仲叶片蒸腾速率的日变化，以及水分胁迫下蒸腾速率的变化，探讨了环境因子对杜仲叶片蒸腾速率的影响。     

模拟酸雨对杜仲光合生理及生长的影响

研究了模拟酸雨对杜仲光合生理及生长的影响,结果表明:在系列模拟酸雨胁迫下,无论春、夏、秋季,杜仲叶叶绿素(Chl)含量和Chl a／b值随酸雨pH值降低而降低,呈显著正相关．pH 4．0～5．6酸雨在春、夏、秋季对杜仲叶Hill反应活力、CO2补偿点、光补偿点、光饱和点和最大净光合速率无显著影响,而在pH 3．5～2．5强酸雨胁迫下Hill反应活力逐渐降低,CO2补偿点和光补偿点明显升高,光饱和点、最大净光合速率则显著下降．另外, 酸雨各处理组最大净光合速率与杜仲总生物量、杜仲叶药用有效成分(绿原酸、桃叶珊瑚甙和总黄酮)含量呈显著正相关,表明酸雨通过影响杜仲光合生理活性,进而影响其生长和药用有效成分含量．     

ASE-UPLC法同时测定杜仲制剂中3种成分

建立ASE-UPLC(快速溶剂萃取仪-超高效液相色谱)法同时测定不同杜仲制剂中京尼平苷酸(GPA)、绿原酸(CA)、松脂醇二葡萄糖苷(PDG)3种指标成分含量的方法.采用70%甲醇水,温度40℃,压力103.4MPa的ASE法提取;色谱柱Acquity UPLCBEHC18(100mm×2.1mm,1.7μm);乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相;流速0.15m L/min;洗脱梯度:0~15min,70%B~90%B;检测波长237nm;柱温20℃.结果显示3种被测成分分别在选定的范围内线性关系良好;精密度、重复性良好,相对标准偏差(RSD)分别均小于3.0%;平均加标回收率在95.84%~102.69%,RSD均小于3.0%.表明所建立的方法快捷、准确、重复性好,可用于杜仲制剂中主要成分的含量测定.     

杜仲叶片对土壤水分胁迫的适应性研究

二年生杜仲实生苗在不同土壤干旱条件下的盆栽试验结果表明，杜仲对土壤水分胁迫有很强的适应能力，这种适应能力通过三种调节过程实现，即通过叶片水分饱和亏缺和Ｋ＾＋含量的反馈控制实现的气孔运动的调节，通过脯氨酸积累实现的渗透调节，以及通过活必氧浦除剂（如过氧化物酶）活性变化实现的对自由基平衡的调节。     

中药和泰药提取物对褐点石斑鱼的免疫效果

采用酒精萃取法,从8种中药和2种泰药中提取了有效成分,并通过氮蓝四唑(NBT)还原法检测了褐点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)白细胞产生氧负离子能力的强弱和吞噬活性,开展了以上药物对褐点石斑鱼的免疫效果研究.白细胞氧负离子检测的结果表明:当药物萃取物质量浓度为10 g.L-1时,香菇组(C4)的免疫效果最好;当药物萃取物质量浓度为5 g.L-1时,所有实验组的免疫效果均不明显;当药物萃取物质量浓度为2.5 g.L-1和1.25 g.L-1时,黄芪组(C3)、香菇组(C4)、红参组(C5)和复方1组(C7)的免疫效果最为突出;而当药物萃取物质量浓度为0.625 g.L-1时,黄芪组(C3)、杜仲组(C2)和姜黄组(T1)的免疫效果最为突出.白细胞吞噬活性的检测结果表明:红参组(C5)、香菇组(C4)、黄芪组(C3)及复方1组(C7)这4个试验组的白细胞吞噬活性极显著高于对照组(P<0.01).因此认为:红参、香菇、黄芪及生脉玉屏风散这4种药物的萃取物能明显提高褐点石斑鱼的非特异性免疫力,这为今后开展褐点石斑鱼的新型安全的免疫增加剂的研究奠定了良好基础.     

湘西州生境对杜仲叶绿原酸质量分数的影响

对湘西自治州7县1市多个采集点的杜仲叶绿原酸质量分数进行检测,考察不同生境对杜仲叶绿原酸质量分数的影响.试验结果表明,湘西自治州不同地区杜仲叶绿原酸质量分数存在明显差异,不同地区及同一地区不同采集点绿原酸的质量分数均存在差异.杜仲生长在海拔401~500m范围,坡向南坡,土壤种类为浅灰土壤,土壤母质为石灰岩或砂页岩的条件下,杜仲叶绿原酸质量分数较高.     

杜仲山茱萸保健酒澄清工艺的优化

据市场调查信息反馈,杜仲山茱萸保健酒澄清度不够高,光照下有散射光点,静置3个月以上易产生沉淀.通过单因素和正交试验优化杜仲山茱萸保健酒的澄清工艺.试验结果表明,当活性炭和JA澄清剂的添加量分别为1.00g/L、0.20g/L,澄清时间为30天,再经硅藻土(300#:100#=0.8:1)过滤机过滤,酒体透光率最高,达96.73%.澄清后,该保健酒酒度变化较小,皂苷、总糖等营养物质含量基本不变,且口感爽快醇和.     

杜仲叶发育过程中结构及杜仲胶含量变化研究

应用石蜡切片法和实验室综合提胶法,研究了杜仲叶的结构发育,探讨了杜仲叶结构发育与杜仲胶积累的变化规律,旨在确定杜仲叶的最适采收季节,为生产实践提供参考。结果表明,杜仲叶内杜仲胶随着季节的变化基本呈跳跃式变化;叶片发育早期,随着栅栏薄壁组织、海绵组织等叶肉细胞的分化发育,叶片中的含胶细胞也在不断地形成、积累。七月份叶片组织结构发育成熟时,含胶细胞仍继续增加和生长,叶片含胶率总体上呈增加的趋势。由于杜仲树叶内杜仲胶为一年逐步积累的结果,11月份将近黄落的叶子含胶量较高,为1.19%。综合分析叶片生物量和杜仲胶的含量,11月份杜仲叶子黄落时收集较合适。