杜氏盐藻hsp90基因的克隆及胁迫条件下表达量的变化

利用RACE方法首次从杜氏盐藻中获得hsp90基因全长序列,并将其提交至Gene-Bank(Accession No:JQ735968).进一步研究表明,在热激与盐胁迫条件下杜氏盐藻hsp90基因的转录水平及蛋白表达水平出现明显上调,暗示该基因可能是杜氏盐藻细胞中与逆境响应相关的调控元件.     

不同胁迫下盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶基因表达及其与甘油合成的响应

在已克隆的盐藻（Dunaliella salina）3-磷酸甘油脱氢酶GPD基因的基础上,利用实时荧光定量PCR的方法,研究了经高盐、厌氧、磷酸盐以及氧化等不同外界胁迫条件下该基因的表达情况,并同时监测了盐藻细胞甘油合成的动态变化.对比酿酒酵母的GPD基因,发现D.salina GPD基因受高渗诱导,同时D.salina细胞内可能存在多个形式的GPD基因.     

盐胁迫下盐藻特异表达基因片段的克隆

盐碱、干旱、极端温度等逆境条件是影响植物生长的重要因素。以抑制消减杂交及差式库的筛选对盐藻（Dunaliella salina)在高渗胁迫下特异表达基因片段进行了克隆。比较长期（1周,LS）及短期（16h,SS)NaCl胁近条件下基因表达情况,前者克隆到2个特异表达片段,后者也有2个。通过测序及Gene Bank中进行同源搜索,均未有可靠的同源性结果。可以初步认为,以上得到的4个cDNA可能是新基因或此片段不在保守区内。     

盐生杜氏藻核糖体蛋白L38部分cDNA的克隆及分析

从盐生杜氏藻(Dunaliella salina)中，克隆到L38蛋白的部分cDNA序列及完整的CDS，由生物信息学分析发现与L38家族其它成员高度同源，证明该家族在进化上的高度保守性，为研究真核生物核糖体蛋白的重要补充．     

用CODEHOP设计简并引物克隆杜氏盐藻hog1基因片段

根据NCBI上已经报道的hog1序列,利用简并引物在线设计工具CODEHOP设计出两对简并引物,通过巢式PCR扩增,得到一段大小为635 bp的基因片段,将其克隆到T载体上并测序,将测得的序列在NCBI的Blast搜索发现,其与已报道的其他一些物种的hog1基因有同源性.用CODEHOP程序化设计简并引物可信性强,阳性率高.该基因的成功克隆为研究杜氏盐藻的HOG信号途径奠定了基础.     

静态荧光光谱法研究稀土对杜氏盐藻生长的影响

采用静态荧光光谱分析法研究两组不同质量浓度的稀土硝酸镧、硝酸钐对杜氏盐藻生长及其叶绿素积累的影响,并对其机理进行了讨论,分别得出适宜于盐藻生长的稀土质量浓度．结果表明,硝酸镧质量浓度为2mg／L、硝酸钐的为20mg／L时的促进作用较同组其它浓度稍明显;分别观察370nm光激发叶绿素a和460nm光激发叶绿素C的荧光峰值曲线,硝酸镧和质量浓度为60mg／L的硝酸钐对盐藻培养后期叶绿素a的积累起到了抑制作用,同时2种稀土均加速了盐藻中叶绿素C的消耗．     

杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心蛋白D2 基因的克隆及序列分析

根据莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、Oryza sativa、Chlorella vulgaris以及Mesostigma viride 等真核生物的psbD基因的氨基酸高度保守序列,设计一对简并引物,利用TRIzol试剂提取杜氏盐藻(Dunaliella salina)细胞的总RNA,通过RT-PCR,得到杜氏盐藻cDNA片段的长度大约为1 000bp.该序列的PCR产物经T-A克隆并测序分析以及测序结果推导成氨基酸序列,Blast同源性分析表明所克隆的基因为杜氏盐藻psbD基因,编码杜氏盐藻光系统Ⅱ反应中心D2蛋白,该序列已递交GenBank(GenBank登录号为:DQ074450).编码的氨基酸序列,同源性依次为:Chlamydomonas reinhardtii 92%,Nephroselmis olivacea 88%,Pinus thunbergii 88%,Amborella trichopoda 88%,Chlorella vulgaris 88%.通过密码子偏爱性分析表明,psbD基因存在明显的密码子偏爱性,其(A T)含量明显高于(G C)含量.     

盐藻Psy基因保守序列的克隆及同源性分析

文中根据两种藻——Dunaliella bardawil和Haematococcus pluvialis的Psy cDNA保守序列以及6种植物——Arabidopsis thaliana，Oryza sative，Tagetes erecta，Lycopersicon esculentum，Capsicum annuum和Daucus carota的Psy基因氨基酸保守序列设计了上游引物5’-GAGTACGCCAAGACCTTCTA-3’和下游引物5’-GTTGTCATAGTCATTCTTCTC-3’．以盐藻基因组为模板、以46～35℃每循环递减0．5℃的退火温度扩增获得的大小约为2490bp的片段，经NCBI／BlastP同源性分析推测其为Psy基因的部分片段．     

盐度对盐生杜氏藻叶绿素荧光参数的影响

本文研究了一次性培养过程中,不同盐度（15、30、60、90、120、150）对盐生杜氏藻PSII最大光能转化效率Fv/Fm、PSⅡ的潜在活性Fv/Fo、PSⅡ的实际光能转化效率ΦPSⅡ、相对光合电子传递效率rETR、叶绿素相对含量及细胞密度的影响.实验结果表明：盐度对盐生杜氏藻的光合作用及生长均有显著影响（P〈0.05）;盐生杜氏藻进行光合作用和生长的最适盐度都为90.相关性分析结果表明： 在整个培养周期中,Fv/Fm、叶绿素相对含量均与细胞密度呈显著的正相关关系.     

盐生杜氏藻中一个早期光诱导蛋白(Cbr)的序列分析及功能预测

高等植物及光合微生物在强光照射下会出现光氧化现象，从而引起光合效率降低，光合产物减少,当产生这种有害作用时，早期光诱导蛋白(early light-inducible proteins，ELIPs)迅速被诱导表达，并与游离的叶绿素、类胡萝卜素结合形成抑制三聚体，有效地阻止了游离氧对光合结构的进一步损害，早期光诱导蛋白的这种特性，对于研究光合生物在强光等特殊环境压力下的耐受机制具有一定的借鉴意义。     

盐藻rbcS基因克隆及其原核表达

1,5-二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶（Ribulose1,5-bisphosphate carboxylase／oxygenase,E,C．4,1．1．39简称RuBisCO）是光合作用中的关键酶,作者应用RT-PCR技术从一种极其耐盐的生物-杜氏盐藻的总RNA中克隆RuBisCO的小亚基（rbcS）的cDNA,它的开放读码框为570bp,编码190个氨基酸,将此cDNA定向克隆于原核表达载体pET-30a（＋）中,构建重组质粒pET-rbcS,经IPTG诱导,在大肠杆菌株BL21中表达．SDS-PAGE电泳表明,rbcS融合蛋白分子量约为26kDa．     

香椿TsANR基因的克隆及在温度胁迫下的表达分析

花青素还原酶是调控原花青素形成的关键酶之一,该酶对花青素的积累具有重要调控作用。从香椿中克隆得到一个花青素还原酶基因,命名为TsANR。基因序列注册到GenBank中,登录号为MT629925。TsANR基因开放阅读框有1 011 bp核苷酸组成,共编码336个氨基酸,编码的蛋白分子量为36.451 kD,属于酸性亲水性蛋白。系统进化树分析表明TsANR蛋白与同为无患子目的阿月浑子ANR蛋白亲缘关系最近。荧光定量试验结果表明:TsANR基因在香椿幼苗叶中的相对表达量最高,4℃低温处理24 h内,Ts ANR基因表达量在4 h后,表达量显著低于对照水平;在38℃高温处理24 h内,TsANR基因表达量在1 h时表达量显著增加,随后在2 h后表达恢复至对照水平。     

重组盐藻14-3-3蛋白基因的原核表达及分离纯化

根据克隆的杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因.经原核表达、Ni2+亲和层析法纯化,免疫动物制备抗体. 抗体蛋白质印迹分析检测结果表明抗体能特异结合盐藻细胞分子量为29 kD的多肽.     

梅花鹿过氧化氢酶基因的克隆与表达

克隆得到梅花鹿过氧化氢酶基因序列,已提交Genbank登录(HQ877674).基因编码区全长1 584 bp,编码527个氨基酸,理论计算分子量为60 027.4 Da,理论计算等电点为6.67,预测蛋白质结构中不含有二硫键,在蛋白质序列中,具有过氧化氢酶家族活性中心保守序列和过氧化氢酶家族亚铁血红素保守序列,其DNA序列和蛋白质序列均与Bos taurus来源过氧化氢酶的同源关系最为接近.使用pPICZαC质粒和毕赤酵母GS115菌株,成功异源表达该基因,对诱导表达的发酵上清液进行活性测定,酶活为463 U·mL-1.     

Armillariella tabescens阿拉伯糖苷酶基因全长cDNA的克隆与表达

通过对假密环菌(Arm illariella tabescens)的表达cDNA克隆文库进行随机测序,获得一段与多形拟杆菌的阿拉伯糖苷酶序列同源性很高的EST序列(AJ620046).根据获得的EST序列用SMART-RACE技术成功从假密环菌中克隆出了阿拉伯糖苷酶基因的全长cDNA,用生物信息学的方法对所获的序列进行信息学分析.分析结果显示其全长cDNA为1 016 bp,其最长的开放阅读框架为924 bp,编码307个氨基酸,该全长cDNA序列与多形拟杆菌的阿拉伯糖苷酶序列具有较高同源性,80~279位氨基酸序列属于阿拉伯糖苷酶超家族,58~184位氨基酸是一个典型的结构功能域,蛋白分子质量预测为32 881 u,等电点为4.59.构建重组质粒pPIC9-AF,并在毕赤酵母菌GS115中对所获得的基因进行了表达,相对酶活达到了81.25%.