中华大蟾蜍“高温卵”cDNA文库的构建

以长足但不具成熟潜能的中华大蟾蜍“高温卵”为材料,提取总RNA和mRNA,以Not I/Oligo dT18为引物,经反转录合成第1链cDNA;再以DNAPolymerase I合成第2链.所得到的cDNA加装衔接头后定向克隆到λ-ExCell载体上,构建cDNA文库.结果显示,平均每个“高温卵”中总RNA的含量为5.66μg,poly A+RNA含量约为63.96 ng,构建的cDNA文库的丰度为8.93×10-5pfu/μg cDNA.随机挑选的2个重组噬菌体经NotI、EcoR I双酶切后,均能酶切出外源片段,说明我们已成功地构建了中华大蟾蜍"高温卵"的cDNA文库.     

中华卵索线虫雌雄成虫可溶性总蛋白的初步比较

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对中华卵索线虫成虫可溶性总蛋白进行了比较和分析，初步的实验结果表明，雌性成虫特异表达3种以上蛋白质，分子量分别为78．33KD、72．39KD、24．58KD、15．99KD；雄性成虫则特异表达分子量为26．39KD的蛋白质．雌雄成虫总蛋白存在着差异，这为进一步研究中华卵索线虫的性别分化机制提供了基础数据．     

中华卵索线虫寄生对棉铃虫保护酶系的影响

为了解中华卵索线虫致死棉铃虫的机理,观测宿主死亡率发现其与中肠细胞凋亡程度相关,并进一步比较致死期宿主和对照组幼虫超氧化物歧化酶(SOD),过氧化物酶(CAT),过氧化氢酶(POD),谷胱甘肽转移酶(GST)活性及其基因表达.结果显示:线虫寄生3d时,宿主SOD和POD活性及其基因表达高于对照组且致6.75%的宿主死于黑化;93.25%的宿主于寄生7d后随线虫脱出死亡,其SOD、POD、CAT、GST活性及基因表达均极显著提高,表明线虫致死棉铃虫涉其氧化损伤加速细胞凋亡.此外,宿主丙二醛(MDA)含量未因线虫寄生而提高,提示该过程不产生脂质过氧化反应.本研究不仅有利于该天敌的应用开发,而且可为新型杀虫剂的合成提供参考.     

棉花腺体形成时均一化cDNA文库的构建

为克隆筛选棉花腺体形成相关的基因,运用SMART技术构建cDNA文库.首先抽提棉花腺体形成时期的mRNA,mRNA逆转录后合成cDNA,经均一化处理后,SfiⅠ酶切,连接质粒载体,电转化,成功构建了棉花腺体形成时期的cDNA文库.经鉴定原始文库滴度为5.8×105 cfu/mL,其重组率高达94%,插入片段的平均长度约为1.4 kb.     

中华卵索线虫感染棉铃虫后的血淋巴病理学研究

棉铃虫（Heliothis armigera）被中华卵索线虫（Ovomermis cinensis）感染之后，在第16小时左右血细胞总数明显增加，以浆细胞和粒细胞增多为主，通过比色法测定在感染后不同时期血淋巴的酯酶活性和可溶性蛋白质含量变化，结果表明在感染后的第4天变化极为显著，并采用凝胶电泳技术，进一步测定有关病理生化指标的变化。     

厦门卵索线虫生活史的初步研究

报道厦门岛西南部沿海寄生于蝗虫体内的厦门卵索线虫的生活史，对发育过程和发育各期的形态特征进行了较详细的描述。本种线虫生活周期为一年。     

寄生于蝗虫的卵索线虫属一新种

在厦门岛西南部菜地及田埂,采集到寄生于蝗虫的卵索线虫属一新种,命名为厦门卵索线虫新种Ovomermis xiamenensis sp.nov。     

中华卵索线虫生殖系统发育过程中形态和主要化学物质含量的变化

采用石蜡切片的方法,观察中华卵索线虫寄生期幼线虫、寄生后期幼线虫、成虫期（蜕皮后和交配后）成虫3个时期生殖系统发育的形态特征,并测定其主要化学物质含量的变化．寄生期幼线虫体内滋养物体发育明显,而生殖系统发育不明显;寄生后期幼线虫进行最后一次蜕皮变为成虫、雌雄成虫交配并产卵,在这一过程中线虫的主要生理活动是将滋养物体中贮存的营养用于生殖系统及卵的发育,因此生殖系统发育明显,而滋养物体逐渐被消耗．生殖系统发育不同时期,雌雄虫糖以及脂肪酸的相对含量均显示出显著差异;含水量和含糖量在寄生后期略有下降后明显上升,而蛋白质和脂肪酸相对含量变化不明显．     

烟草腺毛全长cDNA文库的构建

冻刷法收集烟草品种K326腺毛组织,Trizol法提取总RNA,采用SMART技术构建了烟草腺毛的全长cDNA文库.经鉴定表明,文库滴度为1.01×106pfu/mL,重组率为99.5%.随机选择24个阳性克隆进行插入片段测序,结果显示,插入片段长度在800~1 000 bp之间,将测得的序列进行Unigene归并和序列全长分析,得到了23条Unigene,21条序列有相关同源信息,其中14条为全长,完整性比率达到66.7%.结果表明,文库质量较好,可用于下一步基因克隆及基因表达谱的研究.     

堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建及鉴定

构建堆形艾美耳球虫(Eimeria acervulina)孢子化卵囊cDNA表达文库,以筛选其功能性基因.用TRI-ZOL Reagent试剂提取堆形艾美耳球虫总RNA,再用Oligo(dT)12-纤维素柱从总RNA中分离mRNA,以mRNA为模板,RT-PCR法反转录合成cDNA第一链,用LD-PCR法扩增合成双链cDNA,经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、CHROMA SPIN-400柱分离去除小于400 bp的片段后,将cDNA与已经SfiⅠ酶切的λTriplEx2载体按一定比例连接,经体外包装,建立堆形艾美耳球虫孢子化卵囊的噬菌体表达文库.随后测定文库容量为4.6×106pfu/mL,扩增文库的滴度为4.4×1010pfu/mL,重组率达到98%,插入片段大小为750~1 000 bp,并从扩增文库中扩增出了堆形艾美耳球虫巨噬细胞游走抑制因子基因片段.     

中华卵索线虫Ovomermis sinensis对蔬菜害虫的人工感染和菜田释放试验

1996—1997年,在福州,用中华卵索线虫Ovomermis sinensis(Chen et al)侵染期幼虫对当地主要蔬菜害虫,菜青虫、斜纹夜蛾和甜菜夜蛾等幼虫,在室内做人工感染试验。在室温20—28℃,寄生线虫与宿主昆虫的比例为为80:1的情况下,线虫对菜青虫、斜纹夜蛾和甜菜夜蛾幼虫的寄生率分别为50％,94％,92％。在当地土壤中无中华卵索线虫的空心菜田,设三个小区,每小区15m~2,各移植斜纹夜蛾2—3龄幼虫150头于菜株上,A区用12540条线虫侵染期幼虫混在2460克湿沙中,撤施于植株根部土面;B区用同样数量的线虫混在8公斤水中,喷洒在菜株上;C区为不释放线虫的对照区。于释放线虫后的第4天和第7天,从各小区随机回收斜纹夜蛾幼虫20头和30头,在室内单头饲养,检查线虫的寄生率和寄生强度。结果:第4天调查寄生效果相近,寄生率分别为61.1％,60％。第7天调查寄生率分别为76.7％,70％。而对照区的虫体中均未见有线虫寄生,寄生率为0。差别显著。在元白菜上释放中华卵索线虫侵染期幼虫,莱青虫的寄生率为6.6％。     

海鲈头肾cDNA文库的构建

本文以海鲈头肾组织为材料,分离出mRNA,合成cDNA双链后,收集500-4000bpcDNA片段,构建了λZAP表达型cDNA文库。初级文库的滴度为7×105pfu,随机挑选噬菌斑的插入片断在500~2000bp之间,证明建立的文库中所包含的重组cDNA分子种类具有一定的完整性,可作为海鲈头肾基因的重要资源。     

棉铃虫雌性成虫脂肪体cDNA文库的构建

用异硫氰酸胍 酚 氯仿 步法从棉铃虫雌性成虫脂肪体中提取总RNA ,经过Oligo(dT)纤维柱分离出mRNA .以mRNA为模板 ,Oligo(dT)为引物 ,在逆转录酶催化下合成单链cDNA(sscDNA) .然后在E .coliDNA聚合酶Ⅰ与RNaseH共同作用下 ,进一步合成双链cDNA(dscDNA) .平末端dscDNA与EcoRI/NotI接头连接 ,插入λgt11表达载体 ,经体外包装后转染Y10 90 r 宿主菌 ,构建成棉铃虫脂肪体cDNA文库 .该文库的滴度为 3.5× 10 5pfu/mL ,重组率为 10 0 % ,该文库适合于筛选低丰度mRNA的cDNA克隆 .     

杨树黑斑病感抗无性系cDNA文库的构建

为了分离与抗病相关的目的基因,以病原菌接种后对黑斑病具免疫力的美洲黑杨I 69及黑斑病的高感无性系欧美杨I 45的叶片为材料,在利用荧光差异显示反转录聚合酶链式反应(DDRT PCR)获得抗病相关cDNA片段的基础上,用试剂盒及同样的植物材料构建了两个cDNA文库L45 72及L69 72。两文库的滴度分别为3.44×109pfu/mL及3.94×109pfu/mL,大于500bp的片段分别占96.67%和73.33%。     

中华六索线虫的生物学观察

用光镜研究了中华六索线虫生活史各期形态,包括其生长和蜕皮;结合扫描电镜观察成虫期形态并应用组织切片技术研究其内部的组织结构。实验室人工感染成功 4 种昆虫宿主,其中家蚕(Bombyx mori)和伊蚊属(Aedes)幼虫为新纪录,同时也研究了相关的昆虫宿主病理及症状。     

旋毛虫新生幼虫cDNA文库的构建与鉴定

利用λZAPExpress载体成功地构建了中国猪株旋毛虫分离株Trichinellaspiralis新生幼虫的cDNA文库 ,并对其重组噬菌体质粒pBK—CMV进行酶切鉴定 .结果表明 :所构建的cDNA文库容量为 1 92× 10 6,重组效率为 98 6 % ,所有的克隆片段都在 0 5— 2 0Kb之间 ,说明此cDNA文库几乎覆盖了全部mRNA .