拟步甲昆虫基因组DNA提取的比较研究

对拟步甲科8种昆虫的新鲜标本及无水乙醇浸泡标本，分别用SDS-蛋白酶K消化法和乙酸钾抽提法进行基因组总DNA的提取．经5次重复实验，结果表明，用两种方法均能从新鲜标本中获得较完整的DNA，且DNA得率较高；而对于无水乙醇保存的标本，提取出的DNA用琼脂糖凝胶电泳检测不出DNA条带，说明标本在保存过程中DNA可能发生了变化，致使提取出的DNA量太少或未分离出DNA．通过对比实验，分析原因，阐明了两种方法的优缺点，并提出了该类昆虫用于DNA提取的标本的保存方法．     

3种不同方法对标本基因组DNA固定和抽提效果研究

利用常规基因组DNA抽提方法,对分别用甲醛、乙醇、聚乙二醇3种固定液固定的鲫(Carassius auratus)肌肉样品基因组DNA提取进行了比较研究。结果表明:5%甲醛保存的样品很难提取到完整的基因组DNA,乙醇95%和聚乙二醇(分子量为600)保存的样品均能成功提取出基因组DNA,并能成功地进行18S rDNA的扩增。同时探讨了不同固定方法对基因组DNA提取的影响。     

一种简易的昆虫基因组DNA提取方法

报道了一种改进的昆虫基因组DNA 的提取方法.结果表明,该方法可在常温条件下,对多种昆虫及人体组织进行酚/氯仿抽提,DNA 得率较高,OD260/280 的值在1.6～1.9 之间.     

对动物组织DNA提取方法的改进及PCR检测

以小型哺乳动物社鼠为例,通过调整酚与氯仿的比率、减少抽提次数及消化时间,对采用-70℃超低温冰箱、-20℃低温冰箱、70%乙醇液浸泡、95%乙醇液浸泡和含50 mmoL/L乙二胺四乙酸二钠的70%乙醇液浸泡等不同方法保存的社鼠肌肉组织提取基因组DNA,并对其进行微卫星指纹图谱分析,研究了改进方法对不同方法保存的社鼠肌肉组织提取DNA的效果,并比较了不同保存方法对DNA提取效果的影响.结果表明:改进方法可行,完全可以满足微卫星等分子标记技术的需要.     

不同保存条件下白刺属植物基因组DNA的提取

以硅胶干燥的白刺叶片为材料,分别在-84℃、-20℃冰箱保存和常温保存,对三种不同保存条件下的白刺叶片进行DNA的提取,结果表明,在-84℃和-20℃冰箱里保存1～2年的材料均可采用3×CTAB法有效去除多糖、酚及蛋白质,可获得高质量基因组DNA,而常温保存半年的材料无法获得DNA．通过进行ISSR—PCR实验,提取的DNA扩增均可得到稳定、清晰、多态性好的PCR扩增图谱,-84℃保存的材料所得到的DNA在ISSR—PCR扩增中条楷数目和清晰唐明昴优于-20℃保存的材料．     

摇蚊基因组DNA的提取方法研究

采用动物基因组DNA快速抽提试剂盒法、SDS法、CTAB法、NaCl法4种方法提取摇蚊基因组DNA.通过紫外分光光度计分别检测所得样品DNA在波长为260nm和280nm的吸光值,根据A260/A280的比值检测其纯度和浓度.采用PCR技术获得摇蚊COI基因,用琼脂糖凝胶电泳检测PCR-COI.综合分光光度法与电泳结果筛选出最适合提取摇蚊基因组DNA的方法.结果表明:SDS法所得样品DNA纯度最高,试剂盒法所得DNA浓度最大.同时综合比较DNA纯度与浓度分析得出:试剂盒法SK8222(改良)提取摇蚊基因组DNA为最佳方法,其次为SDS法或CTAB法(改良).     

用改进的酚-氯仿法提取榕小蜂基因组DNA及SRAP分析

以传粉榕小蜂为材料,用改进的酚-氯仿法对不同保存条件下的样品提取基因组DNA,并进行分光光度、琼脂糖凝胶电泳、SRAP扩增等方法的鉴定.结果表明:改进的酚-氯仿法均可从4种保存条件下的样品中提取出DNA,新鲜样品和体积分数95％乙醇固定样品提取效果比其他2组提取效果好.选择体积分数95％乙醇固定所提取的DNA为模板进行...     

螽斯总科昆虫基因组DNA的提取和种内雌雄及体色表现型不同个体间RAPD带型变异的研究

报道了不同保存材料的基因组DNA提取的材料学研究以及对四种螽斯种内雌雄及体色表现型不同个体间RAPD带型变异研究 .结果表明 ,新鲜材料、冰冻保存材料、80 %～ 1 0 0 %酒精浸泡保存标本及烘干标本均可提取出较好的基因组DNA ,同种内雌雄及体色表现型不同个体采用RAPD技术均能准确检出     

螽斯总科昆虫基因组DNA的提取和种内雌雄及体色表现形不同个体间RAPD带型变异的研究

报道了不同保存材料的基因组DNA提取的材料学研究以及对四种螽斯种内雌雄及体色表现型不同个体间RAPD带型变异研究，结果表明，新鲜材料、冰冻保存材料、80％－100％酒精浸泡保存标本及烘干标本均可提取出较好的基因组DNA，同种内雌雄及体色表现型不同个体采用RAPD技术均能准确检出。     

用Chelex-100法大规模快速提取牦牛肌肉中基因组DNA

旨在建立快速、大规模提取牦牛(Bos grunniens)肌肉中基因组DNA的方法.试验样品为冰冻保存的九龙牦牛背最长肌(n=10).采用两种取样方法(镊子取样和枪头取样)采集冰冻的肌肉样品,用Chelex-100方法提取其中的基因组DNA,并进行PCR扩增.结果显示,镊子取样和枪头取样提取的基因组DNA,均可用于两个核基因和一个线粒体基因的PCR扩增,但枪头取样简便易行,提取的DNA用PCR扩增细胞色素b,扩增35个循环数的PCR产物可直接测序.表明Chelex-100法可用于快速提取牦牛肌肉中基因组DNA,操作简单,成本低廉,适用于大规模提取组织中的DNA.     

蚂蚁DNA提取方法的研究

针对不同体型的蚂蚁,提出了一套实用的总DNA提取方法.该方法依照虫体大小,分别采用冰冻固定后捣碎和剪刀剪碎两种方法破碎虫体,使材料利用充分,提高了提取效率.探讨了组织匀浆、DNA沉淀及溶解等实验中常见问题.结果表明,采用盐析法提取DNA,较传统的酚-氯仿抽提法简单、高效.     

克隆植物珠芽蓼基因组DNA的提取及RAPD鉴定

高原植物体内所含有的酚类、多糖、色素等次生代谢物质严重影响提取其基因组DNA的得率和纯度,是导致后续分子操作失败的主要原因.运用一种新改进的CTAB法对变色硅胶保存的高原植物珠芽蓼(Polygonumviviparum)叶片进行基因组DNA的提取,采取常温下沉淀DNA,增加洗涤沉淀的体积分数为70%乙醇用量和洗涤时间等措施,有效地去除了酚类、多糖、色素等物质的干扰,减少了褐化现象的发生.样品检测所得DNA片段均在48 kb左右,电泳谱带呈线状,无拖尾现象;紫外分光光度计检测,A260nm/A280nm值在1.7~1.9之间.RAPD扩增结果表明,此方法提取的DNA无论在质量和纯度上都较理想.     

猫儿山天牛科名录补遗及一中国新记录属种记述

补充报道了采自广西猫儿山国家级自然保护区的天牛科昆虫17种,其中2属8种为广西新记录属、种。对该保护区天牛科昆虫的垂直分布及柄天牛害虫作了简单的介绍。另外记述天牛科昆虫一中国新记录属、种,即异带天牛属P areutaen ia B reun ing和阿诺异带天牛P areutaen ia arnaud i B reun ing。     

稻蝗属基因组DNA提取方法

运用一种改进的方法对稻蝗属新鲜标本、酒精浸泡标本及干标本进行基因组 Ｄ Ｎ Ａ 提取．样品经检测,谱带基本呈线形,无拖尾, Ｏ Ｄ（２６０／２８０ ｎｍ ）值６６７％ 在１６～１８ 之间．     

重庆四面山自然保护区天牛区系研究

整理、鉴定分布于重庆四面山自然保护区的天牛标本137号48种,隶属于天牛科5亚科32属,其中重庆市特有种2种,重庆市新记录种2种,并对其区系结构进行了分析.结果表明:东洋区系成分30种,占62.50%;古北区系成分2种;占4.17%,南北区系特征不明的14种,占29.17%;全国广布种2种,占4.17%.四面山天牛以东洋区系成分占明显优势.     

重庆缙云山自然保护区天牛区系研究

鉴定、整理重庆缙云山自然保护区天牛标本794号,共鉴定出61种,隶属于鞘翅目天牛科的4亚科42属,其中重庆市新记录种4种,并对其区系结构进行了初步分析.结果表明:东洋区系成分37种,占60.66%;古北区系成分4种,占6.56%,南北区系特征不明的17种,占27.87%;全国广布种3种,占4.92%.缙云山天牛以东洋区系成分占优势.     

酒精和冷冻处理对肌肉组织基因组DNA提取的影响

提取基因组DNA的质量对于后续的基因扩增、酶切以及测序等分子生物学研究具有关键的影响,对肌肉组织进行不同的酒精和冷冻处理会显著影响提取DNA的质量。经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品解冻,取肌肉组织放入75%酒精处理后提取的基因组DNA完整性差、降解厉害;经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品直接取肌肉组织提取的基因组DNA比较完整、降解程度低;活体采取的黄鳝新鲜肌肉组织样品经过75%酒精处理,在-80℃超低温冷冻数日然后提取的基因组DNA质量也较好,电泳条带明晰而锐利,弥散降解带较少。后两种处理方法对黄鳝肌肉组织中DNA酶活性降低显著,因此提取的肌肉组织基因组DNA质量较高,可以有力支持后续的酶切、PCR扩增等分子生物学实验。     

玄参新鲜根和干燥根总DNA提取方法的比较研究

用十二烷基磺酸钠法分别提取玄参新鲜根及干燥根的DNA.电泳结果显示,从玄参新鲜根中可提取到完整DNA,而从"发汗"后的玄参干燥根中提取的DNA已降解.使用紫外分光光度法对新鲜根中提取的DNA进行纯度鉴定,A260/A280为1.83.结果表明,所采用的十二烷基磺酸钠法可经济高效地从玄参根部提取到高质量的DNA.     

非伤害性取样方法获取的拟穴青蟹DNA质量研究

选取5只采自广西北海的野生拟穴青蟹(Scylla paramamosain),分别采用非伤害性(血淋巴)和伤害性(肌肉组织)取样方法提取基因组DNA进行COI扩增和ISSR扩增,检测DNA质量。结果表明,非伤害性(血淋巴)和伤害性(肌肉组织)取样方法获得的拟穴青蟹全基因组DNA的OD260/OD280分别为1.75~2.01和1.81~1.94,全基因组DNA纯度均较高,质量不相上下。同时,两种取样方法获取的DNA扩增片段大小均在600bp左右,同一个体扩增带型也是一致的。非伤害性(血淋巴)取样方法提取的基因组DNA,在质量上可以媲美伤害性取样(肌肉组织)提取的DNA,可以用于其它分子生物学实验研究。     

从动物血液中提取基因组DNA方法的比较研究

从血液中提取基因组DNA的传统方法是先得到淋巴细胞,再用蛋白酶K、SDS消化,然后用酚、氯仿抽提,乙醇沉淀．CTAB法提取基因组DNA多应用于植物和微生物,从全血中提取基因组DNA报道甚少．采用改良的CTAB法从全血中提取基因组DNA,并以传统方法和TAKARA Blood Genome DNA Extraction Kit作对照．结果表明：CTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA,并且纯度达到1．8～2．0,可以满足PCR扩增和限制酶切等实验的要求．