一种新的长毛对虾球状病毒的观察与分离

一种新的长毛对虾球状病毒的观察与分离陈晋安，张驰，许宏毅，苏文金（生物学系）自１９９２年以来，福建省养殖对虾遭受了严重的对虾病毒病。据统计死亡率皆达９０％以上，经济损失巨大［１］．为预防养殖对虾病毒病的发生与传播，我们从１９９３年底以来，在有关方面的...     

感染暴发性流行病病毒的中国对虾形态学研究1.幽门胃的显微和超微结构

为探讨对虾暴发性流行病的致病机理,进行人工感染实验,并对感染中国对虾的胃组织进行了显微和亚显微结构特征的系统观察.观察结果表明胃是该暴发性流行病病毒首先感染的主要的靶器官之一,暴发性流行病病毒能侵入胃壁多种细胞并在其中复制,其中,胃上皮细胞是该病毒的主要的靶细胞.     

对虾疫病病毒的实验室常规检测方法

对虾疫病病毒的快速检出，是防治暴发性流行病的关键所在。本文简述了利用电镜负染技术，电镜超薄切片技术和聚合酶链反应邓ＰＣＲ技术等检测对虾疫病的具体方法，并且对结果进行了讨论。     

养虾水体环境因子变化与对虾病毒病之间的关系

研究养虾水体的盐度、溶氧量及pH值等主要理化指标的变化与对虾暴发性病毒病害大流行之间的关系．以低剂量病毒感染中国对虾(Penaeuschinensis),人工改变海水盐度、溶氧量、pH值等理化指标,发现其变化与对虾发病死亡之间存在明显的诱发关系．结果对阐明对虾暴发病毒性流行病成因及指导虾农科学养虾具有重要参考价值．     

浙江地区凡纳滨对虾苗3种对虾病毒携带情况研究

对虾养殖过程中病毒病的频发是导致对虾养殖失败的最重要原因之一,其中对虾的白斑综合症病毒病(White spot syndrome virus,WSSV)、对虾传染性皮下及造血组织坏死病病毒(Infectious hypodermal&haematopoietic necrosis virus,IHHNV)和对虾桃拉病毒(Taura syndrome virus,TSV)每年给海水养殖造成的经济损失巨大.对2009-2010年间浙江地区近22家对虾苗种生产场的对虾苗种携带WSSV、IHHNV和TSV病毒情况进行调查,并对采用携带病毒的苗种进行养殖的3个对虾养殖场进行后期跟踪调查.调查共采集凡纳滨对虾苗种样品118份,其中80％样本来自福建,10％来自海南,10％来自广东.检测方法采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的PCR方法,检测结果显示:被检样品中32份呈现WSSV阳性结果,占27.1％;46份呈现IHHNV阳性,占38.98％; WSSV和IHHNV同时呈现阳性的有20份,占16.95％,而TSV均未分离到.后续跟踪调查发现采用携带WSSV病毒苗种进行养殖的对虾养殖塘均在8月上中旬陆续爆发对虾白斑病,造成极大经济损失.     

云南地方性暴发性心肌炎的病毒病原学研究概况

目的：为云南地方性暴发性心肌炎的病毒学说提供佐证,并指导今后的工作.方法：收集、整理及分析该病以往研究资料.结果：用组织分离法和动物分离法,已先后从患者和密切接触者外周静脉血、粪便和心血等460份标本中分离到53株柯萨奇病毒（阳性率为11.5%）,并对部分患者和健康人群作了血清学调查.结论：云南地方性暴发性心肌炎是一种新的地方性心肌疾病,其病毒病原有待于作深入研究.     

病毒的强力杀手氨基酸碘在广东研制成功

广东省化学家,十年磨一剑,研制成功病毒的强力杀手——氨基酸碘amino-acid iodine complex,AA-Ⅰ。这是营养素型的药物,开创了药物发展的新方向,对病毒、病菌和原虫均高度敏感,低剂量可杀灭,既可外用又可口服,无抗药性。 氨基酸碘AA-Ⅰ起源于对虾病毒病研究。1993年我国虾病大暴发,经查明是病毒病,主要是白斑症病毒white spot syndrome     

白斑综合症杆状病毒对对虾和罗氏沼虾致病性的研究

对比研究白斑综合症杆状病毒对斑节对虾、日本对虾、南美白对虾和罗氏沼虾的致病性，其生产养殖结果表明：第一次在廉江龙营围虾场养殖的南美白对虾，在养殖了27天以后开始爆发白斑综合症病毒病，患病的南美白对虾、斑节对虾、日本对虾病症相同，其甲壳特别是头胸壳具有白色斑点。养殖的罗氏沼虾没有出现病症。人工感染实验结果表明：白斑综合症杆状病毒能引起南美白对虾90％左右的死亡率，引起罗氏沼虾大约50％的死亡率。电镜观察结果表明：这三种对虾感染的病毒都是白斑综合症杆状病毒。     

国内外对虾病毒病研究概况与分析

对国内外对虾病毒病研究了进行了综述分析，概括了九种对虾病毒病的诊断方法，九体症候，侵染靶器官，分布与形态等特征。初步报道了ＭＤＶ幼虫和中草药ＤＳ防治对虾病毒病的野外实验。     

沙滤对白斑综合症病毒和细菌的过滤效果

研究了沙滤对游离白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)和细菌的过滤效果.以凡纳对虾、Litopenaeus vannamei作为感染对象,用游离病毒2.4×105拷贝/mL浸泡感染对虾(感染初期投喂人工配合饲料),17 d内死亡率100%,第1尾对虾死亡时间为36.5 h,最后1尾死亡时间为402 h,平均死亡时间124 h;相同浓度的游离病毒经沙滤后人工浸泡感染对虾,16 d内死亡率100%,第1尾受感染对虾60h死亡,最后1尾死亡时间为374 h,平均死亡时间168.6 h;病毒沙滤后平均死亡时间延长26.8%.1.2×104拷贝/mL游离病毒浸泡感染对虾,18 d内受感染对虾死亡率100%,第1尾死亡时间为111 h,最后1尾死亡时间为415 h,平均死亡时间274.7h;相同浓度游离病毒经沙滤后浸泡感染组养殖18 d,仅1尾死亡,时间为448 h.1.2×103拷贝/mL病毒组和1.2×102拷贝/mL病毒组直接感染和沙滤后感染养殖20 d,均未出现死亡.对细菌沙滤效果研究结果表明,从2003年8月11日-12月28日连续27次检测,细菌过滤率最低为30%,最高为98.14%,平均为63.33%;其中弧菌最低为5.26%,最高为97.2%,平均为66.46%.研究结果认为沙滤对游离病毒和细菌过滤有一定的作用.为防止对虾从海区海水污染感染病毒病和细菌病,建议对虾养殖过程中,外海水采用沙滤加蓄水池中间沉淀消毒以保证养殖用水的安全.     

中国对虾杆状病毒病的初步研究

１９９３～１９９５年中国对虾发生暴发性流行病,经对患病对虾作组织病理学研究和电镜观察,发现此病以消化系统病变更为严重,肝胰腺,胃及肠道上皮层发生变性和坏死,上皮细胞破坏,细胞核肿大;结缔组织发生水肿,血淋巴细胞浸润,在电镜下,病变组织的细胞核内充满一种杆状病毒,大小为２６０～３１０ｎｍ×９０～１１０ｎｍ外被双层囊膜,不形成包涵体,纯化的病毒经负染后在电镜下见到的大多数是病毒核衣壳,大小为２８６ｎｍ     

中国对虾暴发性流行病病原的免疫组织化学研究

对未感染中国对虾，实验感染暴发性流行病病原体后3h,12h,24h和36h及96h和136h，进行了系统的免疫组织化学研究，结果显示感染病虾的多种组织细胞呈阳性反应，说明暴发性流行病病原体具有广泛的宿主靶细胞，其中最易感的靶细胞是鳃、胃、后肠中具有合成和分泌几丁质动能的细胞，于暴发性流行病病原体侵入虾机体的体途径，使对虾致病和死亡的原因进行了探讨。     

对虾中肠腺脂肪酸组分的检测

目的：探讨对虾中肠腺脂肪酸与病毒病之间的关系。方法：应用气相色谱法分别检测了人工养殖的健康斑节对虾,健康日本对虾、斑节对虾杆状病毒（ＭＢＶ）轻度感染斑节对虾、ＭＢＶ重度感染斑节对虾及患中肠腺坏死杆状病毒（ＢＭＮＶ）病日本对虾中肠腺脂肪酸的组成及含量。结果：养殖健康斑节对虾中肠腺中的饱和脂肪酸以棕榈酸为主（２０．６４％）,一烯酸为油酸含量最高（２３．０７％）,多烯酸则以亚油酸所占的比重量大（２１．７     

斑节对虾白斑症的发病历程

目的：探讨对虾白斑症的病程及病症特点,方法：对健康斑节对虾进行人工感染,同时用套式ＰＣＲ检测感染后斑节对虾血液中病毒核酸的相对含量,结果：斑节对虾感染白斑症病毒后,依次表现出厌食,不活动、体色变红、甲壳出现白斑,反应迟钝直至侧卧死亡,濒死对虾的典型症状为空胃、红体、甲壳白斑、甲壳下水肿及甲壳易剥离;感染对虾出现拒食后,其血液中白斑症病毒（ＷＳＳＶ）ＤＮＡ的相对含量急剧增加。结论甲过同步不肿和甲壳易     

淡水池养南美白对虾白斑综合症病毒的分离及其回攻试验

从苏州市某淡水养殖池塘中采得南美白对虾（Penaeus vannamei）病虾,从病体中分离出一种杆状病毒,纯化的病毒粒子经电镜观察发现其大小（50nm×375nm）、形态特征（杆状）与对虾白斑综合症病毒（White Spot Syndrome Virus,简称WSSV）极其相似,克氏原螯虾（Procambarus clarki）回归试验及病毒分离、观察实验,初步表明采集的病料为对虾白斑综合症病虾．     

PCR法制备地高辛标记探针斑点杂交检测白斑综合症病毒（WSSV）

用PCR法成功制备了DIG标记探针,探针长度为547bp,探针的产量为21．6mg/μL。此探针与随机引物合成探针检测样品灵敏度相近。用此探针核酸斑点杂交法检测了54尾中国对虾。结果表明：此探针在对白斑综合症病毒的检测、对虾暴发性流行病的诊断等方面具有很高的应用价值。     

定量PCR法判定对虾白斑杆状病毒早期的感染和增殖

对虾白斑杆状病毒又称白斑综合症病毒,是对虾养殖业危害最严重的病原体,至今未找到有效的防治方法.充分了解病毒的分子生物学特性和分子致病机理,是病害防治的根本途径,了解病毒的动态增殖特征是该研究的基础.本文采用定量PCR技术,研究对虾白斑杆状病毒人工注射感染后,早期的增殖规律以及感染致死对虾的病毒累积.并对对虾感染病毒后存活时间与个体大小的关系进行了观察.研究发现初期感染病毒含量有短期下降,然后才呈现递增的过程.死亡对虾病毒累积量大于1011病毒粒子/毫克组织(P<0.01).而在4.6～11.6g范围内,感染对虾存活时间与对虾质量不存在相关性(P>0.2).     

感染暴发性流行病病毒的中国对虾形态学研究 3.病虾鳃的显微与超微结构

在光镜和透射电镜下，观察经实验感染暴发性流行病病毒中国对虾的鳃组织，发现鳃丝扁平上皮细胞及少量的网状隔膜细胞被感染而引起血隙狭小，以及巨噬细胞样无颗粒细胞的趋化作用导致鳃丝扁平上细胞增厚而影响其代谢功能，另外，还观察到巨噬细胞样无颗粒细胞有强烈的吞噬作用，小颗粒细胞也具吞噬作用，在染色质凝聚结构等刺激下胞吐小颗粒，大颗粒细胞也具有胞吐大颗粒功能，与上述无颗粒细胞相比，胃结缔组织血窦内的浆细胞样无颗粒细胞其释放与病毒结合参与体液免疫。     

对虾桃拉病毒(TSV)RT-PCR快速诊断技术的研究

对虾桃拉病毒(Taura Syndrome Virus，TSV)最早于1992年在凡纳对虾(Penaeus vannamei)体内发现，此病毒是对虾养殖业危害较严重的病毒之一．将该病毒基因组的一段序列克隆至转录载体pSP64(PolyA)上。经体外转录、磁珠法分离、纯化获得了人工的TSV-RNA模板；用定量的TSV-RNA阳性对照模板进行RT-PCR条件优化。灵敏度检测以及样品制备方法等试验，结果表明：RT-PCR检测的灵敏度可达到0．1fg，相当于100个病毒粒子；所制备的样品对病毒RNA的逆转录及扩增无抑制，适合于对虾桃拉病毒快速检测．     

养殖中国对虾肝胰脏细小病毒病的免疫金银染色法诊断研究

８０年代以来，肝胰脏细小病毒病在养殖中国对虾中广泛流行并造成了一定的损失。作者采用免疫金银染色（ｉｎｍｍｕｎｏｇｏｌｄ ｓｉｌｖｅｆｒ ｓｔａｉｎｉｎｇ，ＩＧＳＳ）技术，对患病对虾肝胰脏中的细小病毒（Ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｐａｒｖｏｖｉｕｓ，ＨＰＶ）进行了免疫组织化学的研究。结果表明，经ＩＧＳＳ染色的病虾 胰脏上皮细胞核内出现了黑色、圆形或椭圆形、大小为３～１５μｍ的结构。由于该结构与