采用末稍血检测乙型肝炎表面抗原的研究

目的：本研究旨在评价末稍血替代静脉血检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。方法：采用酶联免疫吸附试验对100例健康体检者，100例非乙肝患者（乙肝血清标志物全部阴性者），100例HBsAg携带者，102例乙肝患者行血清，末稍全血HBsAg检测。结果：末稍血用两种不同洗板方法检测HBsAg，结果有极显著性差异（P＜0．01），末稍血用本室洗板方法与静脉血清HBsAg检测结果无差异（试验诊断指数均200％）。结论：采用末稍血用本室洗板方法可替代静脉血清对HBsAg检测。     

应用ELISA双抗体夹心法检测奶牛轮状病毒

在实验室条件下,采用快速轮状病毒诊断试剂盒应用ELISA双抗体夹心法对甘南某地区(新城)黑白花奶牛轮状病毒感染情况进行调查,发现目前该地区黑白花奶牛轮状病毒感染情况较为严重,检测阳性率为83.3%,且以3月龄内的犊牛为主,并且在诊治时往往易与其他腹泻性疾病相淆.     

斜纹夜蛾(Prodenia litura)NPV多角体蛋白的微量免疫测定的研究

用差速离心和庶糖梯度超速离心方法,分离提纯斜纹夜蛾核多角体病毒,碱解后经超速离心提取多角体蛋白,用以免疫家兔,采用对流免疫电泳和ELISA方法检测定量多角体中的多角体蛋白,结果表明:用对流免疫电泳方法检测的最低灵敏度是0.025mg多角体/ml,而用ELISA方法则可以测出10ng多角体/ml,其光吸收值(OD_(490))与多角体的浓度(mg/ml)的负对数值之间呈明显直线关系。回归方程为y=1.5335-0.2342x。     

血清灭活法对消除ELISA假阳性结果的比较研究

目的建立一种简便、易行的方法,对酶联免疫吸附试验的结果进行质量控制。方法依据国标ELISA方法对578份小鼠血清进行11种病毒抗体检测,共检测抗体3677份。对初步检测出的242份抗体阳性血清,经56℃30min水浴灭活处理后进行复检。结果可疑阳性血清经灭活处理后复检,正常抗原孔A值和特异抗原孔A值明显低于初检的正常、特异抗原孔A值,差异显著(P<0.05);初检和复检的特异抗原孔A值与正常抗原孔A值的比值有显著性差异(P<0.05);血清灭活前后阳性率有显著性差异(P<0.01),分别为6.58%和2.86%。阳性对照灭活前后A值无显著差异(P>0.05)。结论血清经灭活处理后,使检测结果的假阳性率显著降低。     

ELISA检测姜片虫病患者抗体的研究

研究了姜片吸虫成虫冷浸抗原检测姜片吸虫病患者血清抗体的敏感性和特异性及其在流行病和临床上的应用价值．超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原．以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性．按常规ELISA方法操作,目视与酶标仪判断结果．普查2189人中姜片吸虫卵阳性者168例;168例中165例ELISA阳性,ELISA与改良加藤法的阳性符合率98．21％;健康居民血清147份,阳性6份,阳性率4．08％;与血吸虫病交叉阳性为9．38％,肺吸虫病交叉阳性为5．36％．姜片吸虫成虫冷浸抗原1：3500工作浓度包被酶标板,检测姜片虫病血清抗体具有敏感性高、特异强和交叉反应率低的特点．     

ELISA和PCR法在研究乙肝病毒传播途径中的应用

应用HBV表面抗原酶标试剂盒和诊断HBVDNA的PCR试剂盒分别检测可能污染有HBV的不同来源标本30份，结果ELISA法检出HBsAg阳性5例，检出率16．7％；PCR法检出HBVDNA阳性12例，检出率40％，明显高于ELISA法，提示应用PCR技术探讨乙肝病毒传播途径似乎效果更好。     

比色时间对ELISA结果判读的影响

目的:探讨比色时间对酶联免疫吸附试验(ELISA)结果判读的影响.方法:用酶免试剂盒对HBsAg阳性标本40份和高值阴性(其OD值在0.8×cutoff～cutoff之间)标本6份进行检测.加终止液后用双波长(450nm/630nm)在不同时间段读取各孔OD值.结果:比色时间延迟10min后,各时间段与第一次相比,结果有明显变化.部分高值阴性标本出现了假性检出.结论:比色时间对ELISA的检测结果影响明显,应对其作有效限定.     

叠氮钠（NaN3）对ELISA检测酶活影响的探讨

用抗促黄体激素(LH)单克隆抗体为试样,进行了叠氮钠(NaN_3)在ELISA检测中影响辣根过氧化物酶(HRP)活性的研究。实验结果表明,当酶标二抗工作液中不舍NaN_3时,含0.02％NaN_3的ODP底物工作液能将其中的HRP全部失活;而当底物工作液中不舍NaN_3时,含0.02％NaN_3的酶标二抗工作液中的HRP有30％～60％失活。提出在以HRP作为标记酶的ELISA检测所用的部分缓冲液中废止使用NaN_3作为防腐剂。     

不同小鼠肝炎病毒对ELISA方法检测其血清抗体的影响

目的 建立小鼠肝炎病毒（Mouse Hepatitis Virus,MHV）血清抗体ELISA检测方法,用于本地区MHV的日常监测,以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断。方法 选取3种MHV毒株MHV1、MHV-JHM和MHV-A59,通过L929细胞扩增培养获得纯化浓缩抗原并筛选适合包被抗原类型;免疫BALB/C小鼠,获得高效价免疫阳性血清;优化ELISA反应体系建立规范化的ELISA试剂盒并用于临床小鼠血清样品的检测。结果 筛选出适合本地区的MHV包被抗原类型为MHV1,建立了病毒扩增及浓缩纯化方法,制备的MHV抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为标准化质控血清。包被抗原、待检血清和酶结合物最佳工作浓度分别为4. 0μg/m L (10 -7. 73 /0. 1 m L TCID50)、1∶40和1∶4 000稀释;批次内和批次间平均变异系数分别为5. 13%和5. 57%;检测灵敏度为1∶4 000稀释;与小鼠仙台病毒（SV）、小鼠肺炎病毒（PVM）、呼肠孤病毒III型（Reo3）、小鼠细小病毒（MVM）和鼠痘病毒（Ect）阳性血清均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于10%。对165份血清样品进行检测,阳性血清相符率97. 37%（37/38）,阴性血清相符率92. 19%（118/127）。结论 本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清MHV抗体具有较高的特异性、敏感性和结果可重复性,可以用于本地区MHV日常病原学监测,以便对小鼠感染状况作出准确判断。     

片形吸虫成虫虫体抗原制备及ELISA实验研究

目的:研究人体片形吸虫病ELISA检测试剂盒的检测效果。方法:采用云南大理本地采集的牛体片形吸虫成虫制备可溶性粗抗原,包被反应板,采用人体片形吸虫病ELISA法(FAWA-ELISA)进行研究,分别检测26份片形吸虫患者血清、102份其他寄生虫病患者血清和25份健康人血清,评价检测试剂盒的检测效果。结果:检测试剂盒的敏感性为100.0%、特异性分别为95.28%(95%CI:98.9%~91.2%),约登指数分别为0.95。结论:FAWA-ELISA试剂盒检测效果较好,且成本相对较低,可适宜用于云南片形吸虫病流行区流行病学筛查,减轻病原学检测的工作量。     

重组碱性成纤维细胞生长因子ELISA检测方法的建立

小鼠或家克经重组bFGF免疫后产生高滴度的抗血清,用此血清建立了间接ELISA检测方法,检测bFGF的灵敏度达10ng/ml.     

用ELISA法测定SPA与多种动物IgG的结合特性

应用酶联免疫吸附试验对兔、大鼠、小鼠、小牛、绵羊、鲫鱼、鸭、蟾蜍和黄鳝9种动物血清IgG与SPA的结合特性进行了研究。酶标SPA浓度梯度,IgG包被浓度梯度及特异性自体和异体IgG阻断试验的结果表明:兔、大鼠、小鼠、小牛、绵羊及鲫鱼的IgG能与A蛋白结合,而鸭、蟾蜍及黄鳝的IgG不能与A蛋白结合。这些结果对进一步用葡萄球菌A蛋白作免疫测定和纯化IgG具有实用意义。     

胭脂红酸ELISA检测试剂盒的制备及应用

为了快速高效检测肉类食品中胭脂红酸含量,制备了胭脂红酸ELISA检测试剂盒,检测了市售肉类样品中胭脂红酸含量,并通过高效液相色谱法进行了验证。结果显示试剂盒的检测限为1 ng/mL,线性范围7. 8～1 150 ng/mL,灵敏度IC50值为95. 2 ng/mL;该试剂盒中的检测抗体对胭脂红的交叉反应率为108. 7%,但与其他4种色素添加剂均未见交叉反应。检测市售肉类样品的批内回收率在79. 1%～103. 1%之间,批间回收率在81. 6%～98. 8%之间;批内、批间试验的相对标准偏差基本小于10%,且与HPLC方法具有良好的一致性(R2=0. 927),说明该试剂盒具有灵敏、准确、简便、快速的特点,为胭脂红酸免疫学快速检测方法的建立提供了技术基础。     

鱼肉中LMG的分子印迹仿生ELISA检测方法

针对水产品中隐性孔雀石绿(leuco malachite green,LMG)残留的问题,建立了鱼肉中LMG的分子印迹仿生酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法。以LMG为模板分子,在p H=8. 5的Tris-HCl介质中,多巴胺(dopamine,DA)经氧化自聚合4 h即可在微孔板表面形成聚合物膜,经V(甲醇)∶V(乙酸)=9∶1混合溶液洗脱模板分子后,形成LMG分子印迹聚合物膜(membrane of molecularly imprinted polymer,MIP)。以LMG-MIP膜为仿生抗体,建立了鱼肉中LMG残留的仿生ELISA检测方法。该方法灵敏度为5. 18μg/L,检出限达0. 03μg/L。利用隐性结晶紫和孔雀石绿这2种LMG的结构类似物进行方法的特异性试验,交叉反应率为21. 3%。实际样品加标回收实验表明,方法的回收率为71. 8%～73. 5%,RSD≤4. 2%。结果表明,该检测方法可用于鱼肉中LMG残留的快速筛查。     

ELISA法检测乙肝患者血清乙肝病毒前S1蛋白

目的探讨检测乙型肝炎病毒前S1蛋白(Pre-S1)的临床意义.方法本文用酶联免疫分析(enzyme linked immunoadsorbed assay,ELISA)法对22例急性乙型肝炎患者及160例慢性乙型肝炎患者进行Pre-S1蛋白及HBV标志物检测,同时用荧光定量PCR法(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)检测HBV-DNA.结论在急性乙型肝炎中,Pre-S1转阴,提示疾病的预后良好;Pre-S1蛋白和HBV-DNA相关较大,能反映HBV复制,有可能作为体内HBV复制的实验室指标.     

ELISA法检测乙肝患者血清乙肝病毒前S1蛋白

目的:探讨检测乙型肝炎病毒前S1蛋白(Pre-S1)的临床意义。方法:本文用酶联免疫分析(enzymelinkedimmuno-adsorbedassay,ELISA)法对22例急性乙型肝炎患者及160例慢性乙型肝炎患者进行Pre-S1蛋白及HBV标志物检测,同时用荧光定量PCR法(fluorescencequantitativepolymemsechainreaction,FQ-PCR)检测HBV-DNA。结论:在急性乙型肝炎中,Pre-S1转阴,提示疾病的预后良好;Pre-S1蛋白和HBV-DNA相关较大,能反映HBV复制,有可能作为体内HBV复制的实验室指标。     

动物牛皮蝇蛆病诊断方法的进展(综述)

综述了牛皮蝇蛆病临床诊断的方法以及一些免疫学诊断方法：免疫电泳、双向免疫扩散试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验。并重点介绍了国内外在酶联免疫吸附试验的进展,介绍了采样的方法、对血清和牛奶的检测以及检测循环抗原HC的夹心ELISA,并对该病未来诊断方法的发展做了展望。     

环氧基化磁性微球的制备及表征

采用反相聚合包埋技术制备以Fe3O4为磁核,琼脂糖为壳层的琼脂糖磁性微球,用环氧氯丙烷对其进行表面化学修饰后制得环氧基化磁性微球.通过傅里叶变换红外光谱、热重分析和振动样品磁力测定等表征其结构和性质,采用酶联免疫吸附试验检测其对乙肝表面抗原的固定能力.结果表明,环氧基化磁性微球平均粒径为30.3μm,环氧基含量为140.19μmol·g-1,磁含量为50.53%,饱和磁化强度为11.25emu·g-1,对乙肝表面抗原的固定能力明显高于琼脂糖磁性微球,具有良好的单分散性、超顺磁性和生物兼容性,可作为筛选乙肝表面抗原特异性核酸适配体的载体.     

高迁移组染色体蛋白-17的分离提取及其抗体ELISA测定方法的建立

纯化高迁移组染色体蛋白－１７（ＨＭＧ－１７）,建立检测抗ＨＭＧ－１７自身抗体的ＥＬＩＳＡ方法,探讨抗ＨＭＧ－１７抗体与临床疾病的关系。用水煮沸法提取,甲酸－吡啶缓冲液酸化和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤技术,自小牛胸腺组织中分离ＨＭＧ－１７,用此纯化物包被,方阵滴定,建立测定抗ＨＭＧ－１７抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法,并进行方法学考核和临床标本检测。纯化的ＨＭＧ－１７抗原经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析,呈现一条分子量约９２００的蛋白带;建立的ＥＬＩＳＡ方法批内平均变异系数（ＣＶ）为５．８％,批间ＣＶ值为９．６％,ＥＬＩＳＡ抑制试验最高抑制率达８７．２％;临床检测结果表明,在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）、混合性结缔组织病（ＭＣＴＤ）和干燥综合征（ＳＳ）患者中分别有１７．４％～３７．３％的抗ＨＭＧ－１７抗体的阳性检出率（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）,而在其他自身免疫病和内科疾病者中,抗ＨＭＧ－１７抗体均为低水平。抗ＨＭＧ－１７抗体ＥＬＩＳＡ测定法具有较好的特异性和重复性,便于常规检测,该类抗体的存在似与某些自身免疫病（尤其是ＳＬＥ）的关系较为密切