猪脾血红素加氧酶的纯化和某些性质研究

通过DEAE——纤维素层析.羟基磷灰石层析及Sepharose CL-6B层析,从猪脾中获得了纯的血红素加氧酶。纯化的酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳及SDS-聚丙烯酰胺电泳中均呈现现单一条带。测得该酶分子量约为30500道尔顿,含272个氨基酸残基。氨基酸组成分析表明该酶中谷氨酸、谷氨酰胺含量丰富,而半胱氨酸和色氨酸含量低。在280nm处具有较低的消光系数(E1%1cm=8.12),而在406nm处具有强烈的光吸收。Triton×-100和EDTA对酶有稳定作用。     

猪肾溶菌酶的纯化和部分性质研究

猪肾溶菌酶提取液经过正丁醇脱脂,（NH4）2SO4沉淀,得到粗酶液,再经过CM—Sepharose FF阳离子层析柱和Sephacryl S-100凝胶过滤层析纯化得到电泳纯的溶菌酶．该酶的比活力为162．45,提纯倍数为113．6,回收率为16．89％．该酶对溶壁微球菌作用的最适温度为45℃,最适作用的pH为6．0,在50℃以下和pH4．5～9．0之间都有较好的稳定性．酶分子量约为15．0kd,其米氏常数为0．0135g／mL．     

猪肾溶茵酶的纯化和部分性质研究

猪肾溶菌酶提取液经过正丁醇脱脂,(NH4)2SO4沉淀,得到粗酶液,再经过CM-Sepharose FF阳离子层析柱和sephacryl S-100凝胶过滤层析纯化得到电泳纯的溶菌酶.该酶的比活力为162.45,提纯倍数为113.6,回收率为16.89%.该酶对溶壁微球菌作用的最适温度为45℃,最适作用的pH为6.0,在50℃以下和pH 4.5～9.0之间都有较好的稳定性.酶分子量约为15.0 kd,其米氏常数为0.013 5 g/m L.     

核酸酶P1的纯化和酶学性质研究

桔青霉发酵液通过硫酸铵分级沉淀、凝胶层析和离子交换纤维素层析等生化分离步骤，得到的核酸酶P1比活力为711U/mg，纯化倍数1500。纯化的酶蛋白纯品经SDS－聚丙烯酰胺电泳，呈现一条单带。该酶催化反应的最适pH范围为6－8，最适温度在70℃，在60℃以下时酶活较为稳定，锌离子对此酶有明显的激活作用，而铜离子具有明显的抑制作用。     

呋喃丹水解酶的分离纯化及性质

从长期受农药污染的土壤中分离得到一株能高效降解氨基甲酸酯类农药的假单胞菌AEBL3，它在呋喃丹的诱导下能产生较高活性的呋喃丹水解酶。通过硫酸鱼精蛋白处理、(NH4)2SO4分级沉淀、DEAE纤维素离子交换层析和苯基交联琼脂糖层析，从菌体中纯化得到凝胶电泳均一的呋喃丹水解酶，纯化倍数为30.33倍。用SDS-PAGE测得该酶的分子质量约为85ku，酶作用的最适温度为40℃，最适pH值为4.5和6.5，30℃下保温30min，酶活力基本不变，高于50℃酶活力则迅速下降；K^ 和Na^ 等对酶有激活作用，Hg^2 、Zn^2-、Cu^2 和Mn^2 等对酶有抑制作用。     

抗坏血酸和血红素加氧酶系引起血红素降解的比较研究

本文报导了由抗坏血酸(维生素C)和血红素加氧酶系引起血红素降解的比较研究结果.由抗坏血酸引起的血红素降解是非特异性的,产物是胆绿素异构体的混合物;而血红素加氧酶系引起血红素的降解是立体特异性的,产物是专一性的胆绿素Ⅸ_α.     

番薯过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从番薯皮中分离和纯化番薯过氧化物酶,对其酶学性质进行表征,分析了温度、pH对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.分离纯化过程包括匀浆、水提、双水相萃取、Sepharose CL-6B凝胶层析、Phenyl Sepharose 6 fast flow疏水层析、Con A Sepharose 4B亲和层析.经纯化的番薯过氧化物酶比活力为6 930 U/mg,SDS-PAGE显示一条带,分子量为34 000,RZ值为2.酶反应的最适pH在5.5附近,最适温度为70℃;在中性偏碱性条件下酶的稳定性非常高,60℃保温1 h,酶活力残余60%.结果表明番薯过氧化物酶是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶.     

番薯过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从番薯皮中分离和纯化番薯过氧化物酶,对其酶学性质进行表征,分析了温度、pH对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.分离纯化过程包括匀浆、水提、双水相萃取、Sepharose CL-6B凝胶层析、Phenyl Sepharose 6 fast flow疏水层析、Con A Sepharose 4B亲和层析.经纯...     

对硝基酚磷酸酶的原核表达、纯化及性质研究

克隆到脂肪芽孢杆菌Bacillus stearothermophilus中的对硝基酚磷酸酶(p-nitrophenylphosphatase，pNPPase)基因，将其编码区eDNA连接到pQE30表达载体中，在E．coli M15中经IPTG诱导得到高效表达．用Ni-NTA Superflow层析柱对表达产物进行了分离纯化，初步测定了pNPPase的酶学性质．发现它的反应最适pH是10．0，最适反应温度是55℃，热稳定性Tm值为52℃，Mg^2 、Mn^2 和Co^2 对pNPPase的活性有一定的促进作用，而Zn^2 和Ni^2 对pNPPase没有影响．纯化后其比活为120U／mg．     

猪肝胆绿素还原酶的纯化及某些性质的研究

通过高速离心(105,000×g),硫酸铵分级分离、NADP—agaxose层析和SephadexG—100层析,从猪肝的胞浆中分离获得胆绿素还原酶.经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,该酶达到均一程度,分子量约为47,000道尔顿.酶被纯化4200倍,回收率为38%.这种酶利用NADPH和NADH作为电子供体,对巯基试剂特别敏感.如DTNB、NEM、pCMB及IDA等,都能不同程度地抑制该酶的活性.由HgCl_2处理,该酶活性的抑制是不可逆的.该酶用NADPH或NADH作电子供体时的最适pH分别是pH7.4和pH7.0.     

烟草过氧化物酶Ⅰ的分离纯化及部分光谱特性研究

烟草过氧化物酶同工酶Ⅰ (TOPⅠ )的分离纯化过程 ,主要包括匀浆、超声破碎、过滤、(NH4) 2 SO4分级沉淀、DE 5 2纤维素阴离子交换层析、SephadexG 75凝胶层析、DEAE SephadexA 5 0阴离子交换层析 .经纯化的TOPⅠ ,纯化酶的比活力为 482 6U/mg ,在SDS PAGE上显示出一条蛋白带 ,分子量在 2 1 0 0 0左右 ,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI$CTOF MS)测得TOPⅠ分子量为 2 1 888.5 ,等电点pI为 3.5 ;光谱学分析揭示 ,在 40 2nm处有一典型的Soret带 ,在 498nm和 636nm处有特征吸收峰 ,表明TOPⅠ为一含血红素的酸性蛋白酶 .酸度对TOPI的在紫外可见区的特征吸收峰及荧光光谱均产生一定的影响 ,反映了TOPⅠ分子独特的光谱学特性     

青霉葡萄糖氧化酶的分离纯化及性质研究

从青霉(Penicillium amagasakiense)发酵液中分离纯化葡萄糖氧化酶(简称GOD),通过DEAE-32离子交换柱层析、Sephacryl S-200分子筛凝胶过滤柱层析纯化,获得比活力为472 U/mg电泳单一纯酶制剂,采用SDS-PAGE电泳,表明该酶含有两个同型的亚基,分子量为150 ku.酶学性质研究表明:该酶催化葡萄糖氧化酶反应的最适pH为5.6,最适温度为40℃.酶的热稳定性研究表明:该酶在pH 5.5～8.5区间和温度低于50℃下稳定.金属离子对酶活力的影响表明:Na+、K+、Ca2+、Pb2+、Mn2+等对酶活力基本没有影响;Al3+、Zn2+对酶有一定的激活作用;Ag+、Hg2+、Mg2+、Cd2+、Cu2+、Co2+等对该酶活力有不同程度的抑制作用.该酶以葡萄糖为底物的米氏常数Km值为122.6 mmol/L,Vm为25.52 μmol/(L·min)(pH 7.0,37℃).     

荧光假单胞菌产木聚糖酶的纯化和性质

有硫酸铵分级沉淀,葡聚糖凝胶分离技术,对荧光假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕ．）所产的半纤维素酶进行分离纯化,得到单一组分的木聚糖酶。通过凝胶电泳法,测得其摩尔式量为３３０００。研究表明,该酶的最适ｐＨ值为６．０,最适温度６０℃。酶的动力学研究测出米氏常数Ｋｍ值为４．７６ｍｇ／ｍｌ。     

黄鳝超氧化物歧化酶的纯化和部分性质研究

黄鳝超氧化物歧化酶粗酶液，经过正丁醇脱脂，丙酮分级沉淀，DEAE-琼脂糖离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤，从黄鳝中分离纯化获得铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)，并对其性质进行研究，最终该酶的比活力为1500U／mg，提纯倍数为368．5．回收率为24．7％．该酶对KCN不敏感．而对H2O2敏感，对热较稳定，对酸碱有较强的耐受性，抗胃蛋白酶的破坏，聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦电泳结果表明：纯化酶蛋白呈一条带，酶分子量约为85kD，亚基分子量约为16．5kD，等电点为7．15。     

鱼皮胶原蛋白的纯化及酶解性质的研究

分别对鲨鱼、鲢鱼、草鱼、罗非鱼鱼皮的胶原蛋白进行提取、纯化并进行SDS PAGE电泳分析,对它们的酶解性质进行研究.结果表明,提取的胶原蛋白有较高纯度,是典型的I型胶原蛋白.4种鱼皮胶原蛋白均能被胰蛋白酶和蛋白酶K水解,两种酶酶切位点有差异.不同鱼种鱼皮胶原蛋白的一级结构不同.本实验的酶解条件是适宜的.     

灵芝漆酶的分离纯化及其部分酶学性质研究

将灵芝（Ganoderma lucidum）漆酶经过Sephadex G-75和DEAE-Sepharose Fast Flow两步纯化,获得具有3个同工酶的组分,并且纯度提高了81倍,酶活回收率高达83.9%。以ABTS为底物,漆酶最适pH值是2.2～2.6,在pH值4.6～7.8范围内稳定;最适温度45℃,在低于45℃时较稳定。大部分金属离子、酸根离子对灵芝漆酶普遍有抑制作用,除盐可以提高漆酶活力。     

脉孢菌纤溶酶的纯化和性质初步研究

应用超滤、盐析、凝胶过滤和疏水相互作用层析对脉孢菌产纤溶酶初步纯化后,活性电泳证实获得单一的纤溶活性组分。对该纤溶组分的基本酶学性质作了进一步的研究,结果表明该纤溶酶的最适作用温度和最适pH分别是46℃和7.8,在40℃以下和pH6.2~7.8时稳定,该纤溶酶具有直接和间接的纤溶活性。