单克隆抗体技术

1975年,科勒(Khler)和米尔斯坦(Milstein)证明,小鼠骨髓瘤细胞和用羊红细胞事先免疫过的小鼠脾细胞经过融合,可以从中获得分泌抗羊红细胞同源抗体的杂交体。这种杂交细胞可以在体外连续培养并产生大量的同源抗体。因为这个技术的基本环节在于淋巴细胞之间的融合,故称为“淋巴细胞杂交瘤技     

带有preS抗原决定簇的乙肝表面抗原的DNA免疫研究

构建了３种融合了ｐｒｅＳ抗原决定簇的乙肝表面抗原的表达质粒。在ＣＯＳ－Ｍ６细胞中暂时表达的结果显示,在ＣＭＶ启动子转录调控下融合基因表达的蛋白可以有效地分泌至细胞外,并且同时具有ＨＢｓＡｇ,ｐｒｅＳ１和ｐｒｅＳ２抗原性。带有ｐｒｅＳ抗原决定簇顺序的质粒ＤＮＡ直接免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后,能诱发小鼠产生抗Ｓ抗体,抗体滴度高于仅带有Ｓ基因的表达质粒。     

2-细胞小鼠胚胎电融合后的体外发育

细胞融合是研究细胞调节机理和多倍体对发育作用的技术。研究多倍体胚胎常用的手段是采用灭活的仙苔病毒(ISV)融合法、聚乙二醇(PEG)诱导融合法、细胞松弛素B(CB)介导法和电融合(EF)法。国外学者采用这4种方法均获得小鼠、大鼠和兔融合胚胎,分别研究了融合胚胎在体内或体外的发育。目前国内对小鼠多倍体胚胎研究的报道很少。黄少华等报道的小鼠电融合胚胎在体外培养时分裂率很低,未能从核型证明融合胚胎为四倍体,因为只有个别分裂胚胎在体外发育到8-细胞阶段。本实验采用电融合法研究2-细胞小鼠胚胎融合后的体外分裂及发育,并利用细胞遗传学方法分析融合后胚胎体外发育而成的附植前胚胎的染色体分裂相和分裂球数目,证明胚胎的多倍性及分裂率;通过与正常1-细胞和2-细胞小鼠胚胎体外发育结果进行比较,揭示电融合胚胎在体外分裂与发育的规律,为进一步研究多倍体胚胎发育机制提供参考。     

细胞原本会发音

细胞是生物体的基本结构和功能单位,其形状多种多样,分别担负着运动、营养、免疫、繁殖等机能.可最近科学家们发现,细胞还有一项特殊的功能,就是它还会发出各种不同的声音.     

介导肝脏损伤与再生的天然免疫识别机制

近10年来, 天然免疫识别受体群的发现和肝脏免疫学的兴起, 即发现肝脏天然杀伤(natural killer, NK)细胞和NK样T细胞(NK like T cells, NKT)是其他器官含量的5~10倍, 掀起了继20世纪70年代中期NK细胞发现之后的天然免疫研究的“第二次浪潮”. 天然免疫研究的这两个突出进展有可能重新解释某些肝脏疾病的免疫致病机理, 也可能丰富天然免疫学的内涵. 经过10年的研究, 本研究小组发现, NK细胞和NKT细胞天然免疫识别介导了小鼠肝脏免疫损伤. 我们通过Toll样受体3 (Toll-like receptor-3, TLR-3)活化途径成功建立了NK细胞介导的小鼠自身免疫性肝炎模型, 可模拟肝炎病毒携带者; 观察到NK, NKT或枯否(Kupffer)细胞间的天然免疫调节网络参与肝脏免疫损伤, TLR-3活化枯否细胞可防止细菌毒素爆发性肝炎; TLR-3活化NK细胞可抑制由NKT细胞介导的致死性肝炎; 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)转基因鼠肝脏易于免疫损伤与该鼠NK和NKT细胞NKG2D (natural killer cell group 2D)受体免疫识别异常有关; 该鼠肝脏再生能力下降与NKT细胞过度免疫识别CD1d有关; 阻断NKG2D或CD1d识别可缓解免疫性肝损伤. 同时, 对NK细胞调节性亚群(NK1, NK2, NK3, uNK细胞)进行了深入研究和发现内分泌激素瘦素(Leptin)和催乳素(Prolactin)可调控人类NK细胞分化; 白细胞介素15(IL-15)通过抗凋亡促进人CD56^dim NK亚群发育.     

体外定向诱导胚胎干细胞为造血细胞

采用分阶段诱导小鼠和人胚胎细胞分化的培养体系,用流式细胞仪,免疫组织化学及Ｗｒｉｇｈｔ染色鉴定细胞,探索体外定向诱导小鼠及人的胚胎干细胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ,ＥＳ）为造血细胞的方法,为胚胎干细胞来源的造血细胞应用于临床,以及研究造血细胞发育机制奠定基础。     

恶性疟原虫DNA疫苗的初步研究

采用遗传工程技术克隆了编码含有恶性疟原虫子孢子期及红内期表位的基因片段，与霍乱毒素Ｂ（ＣＴＢ）亚基基因或白介素２（ＩＬ２）基因融合基因的重组质粒。将纯化的质粒免疫Ｂａｌ ｂ／ｃ纯系小鼠，３次免疫后诱导机体产生了体液免疫和细胞免疫，抗ＣＴＢ抗体滴度平均为１：１２８０，抗ＮＡＮＰ及抗ＡＷＴＥ抗体平均滴定为１：１０００，免疫的小鼠进行疟原虫子孢子攻击实验，保护率在５０％左右。     

LIF, VEGF, CD57和CD68在大鼠胚胎移入小鼠子宫后的表达

种间妊娠失败是异种克隆的主要障碍. 为探讨种间妊娠失败的原因, 将大鼠囊胚移入假孕第3天的小鼠子宫内. 以前的研究显示, 大鼠胚胎只能在小鼠子宫内发育到第9天. 本实验结果表明, 异种胚胎移植后母胎界面CD57和CD68分子表达较同种移植的增强. 免疫组织化学和免疫印迹研究均显示, 异种胚胎移植后白血病抑制因子(LIF)表达增强, 但血管内皮生长因子(VEGF)表达下降. 在体外共培养系统中, 大鼠外胎盘锥在小鼠子宫蜕膜细胞上黏附率、扩展率和扩展面积较同种的显著降低. 这些结果提示, 大、小鼠种间妊娠中免疫排斥反应增强, 异种胚胎侵入能力降低, 可能是导致大、小鼠种间妊娠失败的重要原因.     

人纺锤体素cDNA 的克隆定位和组织表达谱分析

纺锤体是细胞有丝分裂及配子成熟分裂过程中特有的亚细胞结构,它的结构和功能物正常与直接影响生物个体的发育、分化、生长和繁殖、最近的研究表明,小鼠Ｍｏｓ／ＭＡＰＫ途径对纺锤体的作用与纺锤体素蛋白的磷酸化过程密切相关,采用同源筛选方法从人睾丸ＣＤＮＡ分子克隆到一个与小鼠纺锤体素基因编码序列高度同源,长１９２９ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,计算机软件分析发现,该ｃＤＮＡ的２７１－９８４ｎｔ是一个完整的开放阅读框（Ｏ     

抗人乳腺癌单克隆抗体BG_6的制备与鉴定

本文报道一株用新的联合免疫方案制备得到的抗人乳腺癌单克隆抗体BG_6(简称单抗BG_6)及其初步鉴定结果。用乳腺癌患者转移淋巴结单细胞悬液对BALB/c小鼠进行初次免疫,3周后改用人乳腺癌细胞系MCF-     

癌细胞和免疫细胞融合

<正>小鼠结肠癌细胞能与巨噬细胞融合,导致肿瘤生长的变化。俄勒冈健康科学大学癌细胞生物学家阿兰·希尔克认为细胞融合可能是癌细胞用来改变和获得优势的另一种工具。巨噬细胞通常是人体的保护者,它们吞噬病原体,清理死细胞和碎片。但是根据去年12月15日在新奥尔良举行的美国细胞生物学学会年会上展     

共表达口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性

将FMDV衣壳蛋白P1-2A和蛋白酶3C基因单一/共同插入到鸡痘病毒载体pUTA-2和pUTA- 16LacZ中, 构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2P1和pUTAL3CP1, 分别与鸡痘病毒282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞, 经RT-PCR, IFA及Western杂交等方法筛选后成功获得携带有FMDV免疫原基因的两株重组鸡痘病毒株vUTA2P1和vUTAL3CP1. 应用2株重组鸡痘病毒株免疫小鼠, 经对免疫小鼠脾细胞中T细胞亚类计数、脾细胞CTL杀伤活性以及FMDV抗体的检测, 证明这2株重组鸡痘病毒可以诱导小鼠产生明显的细胞免疫和体液免疫反应. 以鸡痘病毒为载体进行FMD基因工程活载体疫苗的研究为FMD的最终防治探索一种新的候选疫苗.     

病毒的反防御手段

多细胞生物在长期的进化过程中逐渐演化出一套复杂的免疫防御机制去抵抗各种病原体的入侵，细胞免疫足机体防御病毒感染的主要机制。而病毒在巨大的生存压力下也演化出若干反防御手段，力求在机体细胞内生存和繁殖。本文就病毒的种种反防御手段简述如下。     

小鼠骨髓基质巨噬细胞系的建立及鉴定

将小鼠骨髓细胞进行体外长期培养 ,逐渐换液去掉悬浮造血细胞和多次传代 ,建立了一株小鼠骨髓基质细胞系 .目前在体外培养 15个月 ,传代 6 5次 ,细胞获得了永生化 ,我们将该细胞系命名为QXMSC1细胞 .该细胞平均染色体数为 6 6± 4 .光学显微镜下细胞为椭圆形 ,有多个伪足和单个细胞核 .透射电子显微镜下细胞浆内有许多脂质体和吞噬小体 ,细胞间无桥粒连接、无大量均匀脂滴 ,无中间丝 .组织细胞化学分析为波形蛋白 (Vimentin)阳性、角蛋白 (Keratin)阴性 .非特异性脂酶染色阳性 .该细胞与鸡红细胞共同孵育后可吞噬鸡红细胞 .上述结果表明 ,QXMSC1为小鼠骨髓巨噬细胞 .QXMSC1骨髓巨噬细胞系的建立为进一步研究巨噬细胞在造血与免疫功能重建中的作用创造了条件     

反义CENP-B对HeLa (Tet-off)细胞增殖状况的影响

为了检测反义转染引起的细胞着丝粒蛋白CENP－B表达的变化情况,用原核表达的融合蛋白GST－CENP－B免疫Balb/c小鼠,制得抗CENP－B的鼠抗血清（MaCenpB）。转染了含有反义CENP－B表达载体pBI-EGFP-as-CenpB的HeLa-Tet-off细胞（HaCb）,用Northern blot和Western blot研究了转染后细胞内源CENP－B基因表达的抑制情况,生长曲线表明,反义CENP－B抑制HeLa(Tet-off）细胞增殖,使倍增时间延长了32.8h流式细胞光度术分析表明,较之HeLa（Tet-off）细胞,HaCb的G1期比例增加（△G＝9％）,S期比例减少（△S＝11％）。同时,有丝分裂指数（MI）大大降低;间接免疫荧光分析表明,HaCb的着丝粒组装受到抑制。这说明,CENP－B的正常表达对于细胞的增殖是必要的。     

肝干细胞在小鼠脾脏中集落样生长

为了得到肝干细胞存在的直接证据,对小鼠胎肝细胞进行了长期体外培养,分离到AFP,CD34及ALB等特异性分子标志阳性、并呈集落样生长的原始细胞系。进而采用体内移植实验,发现小鼠的脾脏明显增大,有多个大小不等的结节出现,而且统计学分析显示,形成的脾结节数与移植的胎肝细胞数之间呈正相关关系。组织病理学和免疫组织化学分析表明,结节中的细胞形态多样,增殖旺盛,部分细胞胞质较丰富,具有肝原始细胞的形态学特征,而且AFP,CD34等分子标志为阳性。这些结果证实在小鼠胎肝中存在着具有多分化潜能的肝干细胞。     

运动使骨骼中的免疫细胞增殖

正骨髓里很拥挤,各种干细胞、祖细胞,包括免疫细胞的前体细胞,全都挤在骨髓腔里。周围的细胞能够营造特殊的环境来支持、保护这些细胞,这一特殊的具有保护性的环境被称作"干细胞龛"。我们对干细胞龛,或者称之为间质细胞,与免疫细胞干细胞的早期前体细胞在骨髓里的相互作用知之甚少。沈博(Bo Shen)等人在小鼠身上发现运动能够刺激一种间质细胞和免疫干细胞之间的信息交流,使小鼠具有更强的抵抗力。这一研究结果发表于《自然》杂志。     

肿瘤对衰老研究的启示

肿瘤和衰老的研究是生物学及医学中的重大课题。癌细胞具有极强的分裂和繁殖能力。它们侵润机体组织,压迫脏器,阻碍血液循环和神经的信息传递,破坏正常细胞的生存环境,危及人的健康和生命。目前认为,肿瘤细胞在机体中可能随时产生,同时又被免疫监     

SARS-CoV灭活疫苗制备及小鼠免疫研究

用Vero细胞大量增殖SARS-CoV病毒, 使用β-丙内酯作为灭活剂灭活病毒后, 用Sepharose 4 FF层析柱纯化病毒颗粒得到灭活疫苗, 并经Western-blot, 质谱, ELISA和电子显微镜检测证实. 用纯化的灭活疫苗加入或不加入氢氧化铝佐剂, 以不同的剂量免疫小鼠, 能够诱导小鼠产生抗体, 加入氢氧化铝佐剂组所产生的抗体高于不加入佐剂组.     

CD4 T细胞转化的DN T细胞对小鼠EAE发病的预防

利用CD4 T细胞体外转化获得具有下调免疫作用的双阴性T细胞(DN T细胞),利用DN T细胞预防性治疗常规变态反应性脑脊髓炎(EAE)小鼠(Mus musculus)模型.观察EAE造模组和DN T细胞预防治疗组两组小鼠EAE评分、体重、关键淋巴细胞因子、组织切片的区别,探索DN T淋巴细胞发挥功能的可能机制.首先诱导获得了抗原特异性的DN T细胞;其次发现一次DN T淋巴细胞的过继输注可以显著降低EAE造模的发病程度,缓解小鼠因为EAE发病而造成的体重减轻;同时和造模组相比,DN T细胞预防组脑部组织淋巴细胞浸润略有减轻,血浆中IL-2和IL-4的分泌也有一定程度的降低;最后通过CFSE增殖实验证实DN T细胞可以显著抑制EAE模型中致炎CD4 T细胞的增殖.本研究证实体外转化的DN T细胞可以减轻EAE模型的发病程度,这种预防作用与DN T淋巴细胞可以抑制致炎CD4 T淋巴细胞的增殖相关.