转座子诱变甘蓝黑腐病菌所获胞外多糖突变体的类型

据对转转子Ｔｎ５ｇｕｓＡ５诱变甘蓝黑腐病民获得３９株胞外多糖突变休的３种胞外酶活性和在含２％葡萄ＮＹＧＡ培养基上的菌落形态的检测结果，将突变株分成５种类型。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明它们的突变位于基因组中的８个不同的位置，其中１个位于已鉴定的ｒｐｆ调控基因簇。     

铜绿假单胞杆菌调节基因突变株的分离及特性

铜绿假单胞杆菌ＰＡＯ１经过亚硝基胍诱变获得了弹性蛋白酶缺失的突变株。经弹性蛋白营养琼脂平板法，从１０次独立处理的６００００个菌落中得到７１株该酶缺失的突变株，其突变株对Ｎ－３－氧代己酰－Ｌ－高丝氨酸内酯（ＨＳＬ）诱导物有无反应分成２组。ＰＡＮＯ６７菌株在加入诱导物后能恢复该酶产生，经过菌落形态、生化特征和细胞膜蛋白质成份的分析，除该酶产生缺失外，突变株ＰＡＮＯ６７与亲本菌株ＰＡＯ１相同，结果表明，ＰＡＮＯ６７是弹性蛋白酶操纵子的调节基因发生突变的诱变菌株。     

糙皮侧耳菌木质素降解酶的比较研究

筛选出１６株ＲＢ显色能力较强的菌株,测试了１６株菌的三种胞外木质素降解酶活性,结果显示,侧耳菌侧５,侧耳ＡＸ３,侧耳８１０１所产生漆酶活性最高;侧耳ＡＸ３,侧耳８１０１,金凤２－５所产木质素过氧化物酶活性最高;侧耳８１０１,侧耳ＡＸ３,侧耳Ｐ４６锰过氧化物酶活性最高。综合结果表明,木质素降解酶活性最高的菌株是侧耳８１０１和ＡＸ３。     

胞外植酸酶高产酵母菌的选育

从酒糟样品中筛选得到五株胞外植酸酶活性较高的酵母，选择酶活最高的１－１作为出发菌株，经单倍体分离、原生质体制备、紫外诱变，最后得到一株突变株Ｍｓｐ－２１２８，其胞外植酸酶活力为２３．０８Ｕ／ｍＬ，比出发菌株提高了８２％，且产酶稳定     

胞外植酸酶产酵母菌的选育

从酒糟样品中筛选得到五株胞外植酸酶活性较高的酵母，选择酶活最高的１－１作为出发菌株，经单倍体分离，原生质体制备，紫外诱变，最后得到一株突变株Ｍｓｐ－２１２８，其胞外植酸酶活力为２３．０８Ｕ／ｍｌ，比出发菌株提高了８２％，且产酶稳定。     

不同品种香菇交配型基因的鉴定

利用原生质法单核体亲本交配型极性标记法,成功地鉴定出香菇－栽培株（Ｓ）与２野生株 （Ｑ＆Ｈ）的 ４种孢子单核体标准交配型基因,并以具有交配型基因的香菇栽培株的 ４种孢子单核体 与香菇２野生株４种孢子单核体轮配,而鉴定出香菇２野生株的４种孢子单核体相对交配型基因, 为香菇的遗传研究提供了可靠的遗传标记．结果显示栽培株Ｓ的４种孢子单核体的交配型分别为 Ａ１Ｂ１、 Ａ２Ｂ２、 Ａ１Ｂ２与 Ａ２Ｂ１,野生株 Ｑ的 ４种孢子单核体的交配型为 Ａ３Ｂ３、 Ａ４Ｂ４、 Ａ３Ｂ４与 Ａ４Ｂ３,野生株 Ｈ４４种孢子单核体的交配型为Ａ５Ｂ５、Ａ６Ｂ６、Ａ５Ｂ６与Ａ６Ｂ５．     

分解纤维素菌HT3的筛选及酶活力测定

从不同榈中分离出能分解纤维素菌２９株，经复筛得到产纤维素酶活力较高菌有６株，其中ＨＴ３细菌酶活力最高。该菌产酶为胞外分泌，在最适条件下培养，酶活力可达５．１Ｕ。     

药用真菌猪苓的紫外线及氦-氖激光诱变育种研究

目的选育药用真菌猪苓的速生高产菌株。方法采用氦-氖激光和紫外线对猪苓菌丝体进行诱变处理,以菌丝生长速率和胞外多糖含量为指标进行筛选。结果筛选出一株高产突变菌株LU-7,与出发菌株相比,其最大菌丝体干重高出25.1%,单位培养基胞外多糖含量增加了83.4%,而且具有良好的遗传稳定性。结论经氦-氖激光和紫外线诱变选育出了菌丝生长和胞外多糖产生能力都明显提高的猪苓突变菌株。     

几株光合细菌DAN的G＋Cmol%及DNA—DNA同源性的测定

对８株新分离的光合细菌从形态，生理及遗传学特性等方面进行了研究，结果表明，８株菌可以分为５个不同的ＤＮＡ同源群，其中菌株１３，１８，３７，４５可以划分为一个同源群，它们与沼泽红假单胞菌（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐａｌｕｓｔｒｉｓ）模式菌株ＡＴＣＣ１７００１的ＤＮＡ同源性在７０％以上，菌株８，４０，５２，５５分别形成另外四个同源群，菌株８与深红红螺菌（Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍｒｕｂｒｕｍ     

2株甲型肝炎病毒蛋白酶2A核苷酸序列的测定与比较

从甲型肝炎病毒２个不同株感染的ＫＭＢ１７细胞中提取总ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ特异性扩增出此２毒株病毒蛋白２Ａ基因,将２个２Ａ基因克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经ＤＮＡ序列测定,得到２个２Ａ基因的核心苷酸序列,序列比较发现它们及与ＨＡＶ野毒株相对应序列有突变存在,Ｈ２株与ＨＭ１７５相比有一个点突变,同源性为９９．７２％;与ＨＭ１７５比较,Ｈ２株和Ｌ８株第３１９７位核苷酸均由Ａ突变为Ｇ,相应的氨基酸由丝氨酸     

十字花科黑腐病菌一个致病相关基因的鉴定

十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,简称Xcc)8004菌株的一个转座子插入突变体186807,其Tn5gusA5插入位点位于一个推测的双组分调控系统的感受蛋白基因XC2229中.该突变体对寄主植物满身红萝卜的致病力显著降低.为了进一步证实XC2229基因与该菌致病力之间的相关性,本工作构建了该基因的缺失突变体DM2229.DM2229与186B07在寄主上的致病力基本一致,均显著低于野生型Xcc 8004.生化及表型检测结果表明,DM2229的胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)产量降低,细胞运动能力减弱.用带有完整XC2229基因的pLALR6互补DM2229,互补菌株CDM2229在EPS合成、细胞运动能力以及致病力方面与野生型Xcc 8004基本一致.这些实验结果表明,XC2229是一个与EPS合成、细菌运动相关的基因.推测该基因通过调控EPS的生成和运动能力而影响Xcc的致病力.     

田野菟丝子Cuscuta campestris的研究

本文描述了田野菟丝子的形态特征,研究了田野菟丝子的生物学特性与危害性,提出了检疫防治的对策.     

Pathogenicity of EPS-deficient mutants (gumB-, gumD and gumE - ) of Xanthomonas campestris pv. campestris

Three extracellular polysaccharide (EPS) -deficient mutants of the pathogen Xanthomonas campestris pv. campestris, gumB - , gumD - and gumE- were constructed by Tn5 gusA5 mutagenesis in this study. The results of pathogenicity bioassay showed that three mutants had the obviously decreased pathogenicity on radish ( Raphanus sativus L. ) leaves. Because dead body of the bacteria still caused symptoms, it seemed that some unknown factors on the bac terial cell surface might play certain roles in the pathogenicity of the pathogen. The extracted raw EPS could lead to the chlorotic symptom on radish leaves, and its virulence was increased with the increase of EPS dosage, which suggested that EPS was a main component that caused the danage on radish leaves.     

Regulation of eight avr genes by hrpG and hrpX in Xanthomonas campestris pv. campestris and their role in pathogenicity

Eight putative avirulence genes in Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) strain 8004 were characterized by Tn5gusA5 mutagenesis and gene expression analysis. The virulence test of mutants on Chinese radish showed that all mutants in individual avr genes except avrBs2 mutant were not significantly different from the wild type in virulence. The avrBs2 mutant showed reduced virulence and bacterial growth in planta. Gene expression analysis using β-glucuronidase as reporter indicated that avrBs1.1，avrBs1，avrXccB，avrXccC，avrXccE1 were regulated by hrpG, whereas avrXccA1, avrXccA2 and avrBs2 were not. RT-PCR analysis showed that all hrpG-regulated genes except avrBs1 were also regulated by hrpX. In addition, it was demonstrated that avrBs1　 was responsible for elicitation of a type III dependent hypersensitive reaction (HR) on nonhost plant pepper ECW-10R, and wild type Xcc 8004 was unable to cause HR on pepper ECW-20R.     

白菜型油菜自交不亲和性状的遗传分析

以青海大黄、青油241和黄籽沙逊为亲本材料,配制成2个杂交组合的各6个世代群体,即P1、P2、F1、F2、B1、B2,研究了白菜型油菜自交不亲和性状的遗传特点。结果表明:白菜型油菜不仅品种间自交亲和指数差异显著,同一品种内自交亲和指数变异幅度也较大,自交亲和品种中存在不亲和株,自交不亲和品种中存在高亲和株;自交不亲和性状和自交亲和性状受1对等位基因控制,自交不亲和为显性性状,自交亲和为隐性性状,青海大黄和黄籽沙逊均为隐性纯合体(SCSC)。     

野油菜黄单胞菌中胞嘧啶脱氨酶注释基因的功能鉴定

胞嘧啶脱氨酶广泛存在于细菌、真菌中,而植物缺乏胞嘧啶脱氨酶,提示胞嘧啶脱氨酶可作为病原细菌的潜在药物靶标.胞嘧啶脱氨酶催化胞嘧啶脱氨形成尿嘧啶和氨,是嘧啶补偿途径中的关键酶,对一些动物病原细菌的致病性至关重要.胞嘧啶脱氨酶催化5-氟胞嘧啶脱氨形成5-氟尿嘧啶和氮,而5-氟尿嘧啶对细菌是致命毒性的.在野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xcc)8004菌株的基因组中,XC0670注释为胞嘧啶脱氨酶基因.BLAST和SMART分析发现,XC0670、XC1949和XC3413编码的蛋白都具有核苷脱氨酶结构域.本工作分别构建了XC0670、XC3413的缺失突变体,从Xcc 8004突变体库中调出XC1949 Tn5插入突变体.由于各个突变体与野生型一样在含5-氟胞嘧啶的MMX培养基上不能生长,在以胞嘧啶为唯一氮原的NNM培养基上都能生长,而含有XC0670、XC1949、XC3413组成型表达构建的大肠杆菌在含5-氟胞嘧啶的LA培养基上都能正常生长,GUS活性检测显示这3个基因都不受胞嘧啶诱导.研究结果表明这3个基因都不具有胞嘧啶脱氨酶活性.致病性试验和致病生化因子检测表明,XC0670、XC3413与Xcc致病性、胞外酶、胞外多糖无关,XC1949与Xcc致病性相关,而与胞外酶、胞外多糖无关.     

紫菜苔Ogura细胞质雄性不育系花药发育的细胞形态学研究

通过甘蓝型油菜Ogura细胞质雄性不育材料与紫菜苔的种间杂交和连续回交,获得了稳定的紫菜苔Ogura细胞质雄性不育系,细胞形态学研究表明,该不育系的花药发育兼有无花粉囊型和单核败育型的特征,由于没有造孢细胞的形成或造孢细胞退化,不育系最多只有1－2个花粉囊,而可育系都是4个花粉囊,发育起来的不育系花粉囊里面的小孢子到单核期后不再向前继续发育,而是迅速退化以至解体,开花前彻底败育,在减数分裂前期,不育系绒毡层细胞中已经出现液泡,有肥大趋势,在单核小孢子退化以后绒毡层还很发达,而正常花药绒毡层的发育在减数分裂过程中达到高峰,四分体时出现退化迹象,开花前已完全解体。