酵母全基因组新的ORF结构的预测

提出了一个预测DNA序列中无内含子的开阅读框架（ORF）的理论方法－终止密码预测法;用酵母全基因组中已知的6260个基因进行检验,预测成功率为99．9％;发现酵母基因编码区和已知的DRF的起始密码子总是位于长距离不出现终止密码的位置序列上游紧邻最后一个终止密码子的ATG;在酵母全基因组DNA中发现了新的长度不小于90个氨基酸的ORF结构2244个。     

酵母蛋白质的序列相似性分析

介绍了蛋白质序列相似性分析的进展,并以对酵母蛋白质所做的工作为例,详细说明了蛋白质序列相似性分析的过程和有关算法,阐明了将蛋白质的结构分析和功能预测结合起来对序列相似性分析的意义,还针对蛋白质结构分析和功能预测的方法,提出了一些目前存在的问题,作为以后研究工作的出发点。     

一种从基因数据库中识别反义snoRNA基因的新方法

报道一种从国际分子生物学数据库中识别反义ｓｎｏＲＮＡ基因的计算机新方法．介绍新方法的生物学原理及在反义ＳｎｏＲＮＡ新基因发现中的应用．     

啤酒酵母菌株V25T线粒体15SrRNA基因的一级结构分析

报道啤酒酵母菌株Ｖ２５Ｔ线粒体１５ＳｒＲＮＡ基因全长１６５１ｂｐ核苷酸序列，并与已发表的啤酒酵母其他四株菌株的线粒体基因一级结构进行了比较。     

粟酒裂殖酵母snR41 snoRNA的鉴定及其结构进化的意义

采用计算机分析和分子生物学实验的方法,在粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe中发现和鉴定了一种新的反义snoRNA,命名为snR41,与酿酒酵母Sacharomyces cerevisiae snR41同源分子比较,粟酒裂殖酵母snR41只具有一个指导rRNA核糖甲基化的反义序列,这一发现进一步揭示了反义snoRNA同源分子在一级结构上的多样性,为研究反义SnoRNA结构及进化提供了新的线索。     

反义PARP基因真核表达重组体的构建及其HeLa转化细胞系的建立

利用DNA体外重组技术将PARP基因cDNA部分序列反向克隆到真核表达载体pMAMneo上,构建成重组质粒pMAMneo－C1．4和pMAMneo－C0．3．将重组质粒pMAM－neo－C1．4转染HeLa细胞,经G418筛选,建成细胞系HeLa－C1．4－neo,Southern杂交结果表明,外源PARP基因cDNA部分序列已稳定整合到受体细胞基因组中,该细胞系的建立为研究聚ADP核糖基化作用在细胞内的功能打下了基础．     

蛋白质结构类预测的新方法：基于蛋白质二级结构序列的预测方法

提出了由蛋白质二级结构序列预测蛋白质结构类的新方法,并给出了预测蛋白质结构类的简明预测规则。     

一种可用于生物序列分析的轻量级索引结构

针对目前可用于重复片断查询的索引结构所需空间过大的问题,通过对序列中重复片断的分析提出一种轻量级数据结构———后继数组,它是基于基数排序方法建立的.后继数组也适用于多序列分析.理论分析表明了后继数组及多序列后继数组在存储空间上的优势.实验结果表明后继数组仅需要约原序列长度5倍的存储空间,在建立时间上后继数组也要优于后缀树等索引结构.     

啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)营养缺陷型的筛选及原生质体融合

本文采用营养缺陷型的互补进行了啤酒酵母原生质体融合产物的筛选。从DNA含量分析看,融合子多为三倍体,少数为四倍体,融合子的生长速度和酒精产率都比亲株高,种内原生质体融合率为1.21×10~(-4)。     

酿酒酵母中心代谢网络动力学建模

以酿酒酵母中心代谢网络为研究对象进行代谢网络动力学模拟,将酶反应速率方程改写成普适的形式,模拟了以葡萄糖为碳源的一次生长代谢状态,计算得到了代谢网络达到稳态的代谢流分布以及全部代谢物浓度随时间变化的情况,并将模拟得到的代谢流分布与实验结果进行了比较,结果具有一致性.     

从椭圆酿酒酵母中提取核酸

采用正交设计试验等方法研究了从椭圆酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中提取RNA的适宜条件为NaOH浓度1．5％,SDS浓度2％,NaCl浓度4％,抽提温度95℃,抽提时间2h。RNA粗品收率85．1％,纯度90．5％,可满足核苷酸的生产要求。     

蓝藻光合基因psaC在酵母中的转化和表达

聚球蓝藻（Synechococcus sp.PCC 7002）的psaC是光系统I的FA/FB脱辅基蛋白基因,其分子量8.9kD蛋白中含有2个4Fe-4S中心,构建了psaC基因的表达载体pYES2-psaC,将表达载体转化到酵母（Saccharomyces cervisiae）中,Southern杂交证明psaC基因已被转化,诱导培养后的蛋白电泳显示psaC基因获得高效表达。     

啤酒酵母和异常汉逊酵母属间原生质体融合

本文探索了用不可逆生化抑制剂(碘乙酸)抑制—亲株细胞某些酶活性的同时,利用两亲株细胞生理性差异作为啤洒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和异常汉逊酵母(Hansenula anomala)原生质体融合选择性标记的可行性。结果表明这一选择系统简便、可靠和适用。属间原生质体融合率为1.48-2.25×10~8。经菌落形态比较,碳化合物的发酵和同化,DNA含量测定,酯酶型分析,细胞核染色和自然核分离实验,结果表明从选择性培养基上筛选到的菌株分为三种类型:84.4％异常汉逊酵母型:10.4％啤酒酵母型:5.2％是真正核融合子型。本文还讨论了三种类型菌株出现的机理。     

过量表达鲁氏酵母耐盐基因GPDl对酿酒酵母的影响

GPDl是3撕酸甘油脱氢酶的编码基因,在酵母的耐盐通路中发挥着重要的作用．为了探讨耐盐酵母家族成员鲁氏酵母的GPDl对酿酒酵母的影响,本文利用分子生物学方法构建了质粒YEplacl95一GPDl,并将其转入到酿酒酵母菌株W303中,得到工程菌株WYS．研究发现在菌株WYS中过量表达鲁氏酵母的GPDl,其耐盐性、抗性及甘油产量均明显高于对照菌株wY,特别是在含盐量为18％的情况下菌株WYS甘油产量提高了14．35％．说明GPDl的过量表达是菌株耐盐性提高的重要原因．     

酿酒酵母金属硫蛋白的表达、纯化及活性检测

通过PCR从酿酒酵母基因组DNA上扩增得到酿酒酵母基因CUP1编码的金属硫蛋白序列.将其编码序列克隆到质粒pTWIN1构建重组表达质粒pTWIN1-MT,转化大肠杆菌感受态细胞ER2566.重组融合蛋白CBD-intein1-MT在IPTG的诱导下得到表达,经SDS-PAGE和蛋白质印迹鉴定.用重组菌分别进行铜离子耐受...     

酿酒酵母吸附Zn2+的特性及其动力学研究

为利用啤酒酵母生物吸附去除重金属离子,以酿酒酵母为例,研究了无缓冲溶液体系对Zn离子的吸附特性和动力学。结果表明,当Zn2 的初始浓度是5.23~52.32 m g.L-1,酵母浓度约1.0 g.L-1时,初始pH值约5.6,反应38 h时,酵母对Zn2 吸附量为2.57~42.82 m g.g-1,去除率达到76.4%~92.8%,pH值升高0.55~1.28。酵母吸附Zn2 的动力学过程复杂,高浓度条件下脱附现象严重,仅部分反应时段符合准二级动力学方程。Zn2 初始浓度越高,准二级速率方程的常数越低,初始反应速率越快。酿酒酵母可以用于吸附除去水体中的Zn离子。     

人类超氧化物歧化酶在酿酒酵母系统中的高效表达

超氧化物歧化酶(SOD)是一种在生物界广泛存在的抗氧化酶,在抗衰老、抗肿瘤、抗免疫疾病和电磁辐射上都起着重要的作用．对一从人类胎肝cDNA文库中筛到的SOD基因片段进行重组、克隆,并得到带有启动子PADHZ—GAPDH和终止子TADHI的高效稳定的酿酒酵母表达载体pHC11-hSOD．转化酿酒酵母DCO4后获得工程菌DCO4／pHC11-hSOD．表达产物经破壁后SDS-PAGE电泳检测为20ku的条带;酶活性测定结果表明发酵液有40万U／L的hSOD活性．此外,还研究了工程菌的发酵条件和hSOD产物的纯化方法．纯化产物在SDS-PAGE上和Superdex分子筛检测显示,所得产物的纯度已达95％以上．     

二氧化碳对酿酒酵母生长代谢的抑制

在发酵生产中,酿酒酵母有时处在高浓度的CO2环境下,而高浓度的CO2会影响酵母代谢,抑制酵母生长,造成发酵缓慢或停滞。因此,全面了解CO2对酵母生长代谢的抑制机制,系统分析各种机制间的相互关系,对控制发酵过程,优化发酵工艺有重要意义。