丝瓜核糖体失活蛋白的研究进展综述

丝瓜核糖体失活蛋白是一类具多种生物学功能和活性的蛋白,本文在阐述了该类蛋白的理化性质的同时，综述了该类蛋白的酶学机制、活性位点和用做免疫毒素等方面的研究进展。     

丝瓜和苦瓜核糖体失活蛋白的比较研究

从丝瓜和苦瓜种子中分离得到的丝瓜子和苦瓜子蛋白，均是含糖的单链核糖体失活蛋白，等电点在9-10之间，在抑制蛋白合成中丝瓜子蛋白的毒性高，而在抗生育活性中，苦瓜子蛋白较好。     

苦瓜籽核糖体失活蛋白的基本性质研究

经硫酸铵分级沉淀、SP-Sepharose FF离子交换层析、Blue Sepharose CL-6B亲和层析和Superdex 75分子筛层析从苦瓜籽中纯化出苦瓜核糖体失活蛋白.纯化的蛋白经IEF、梯度PAGE、SDS-PAGE和Periodate-Schiff分析均为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带.根据SDS-PAGE计算其相对分子量为3.0×104 Da,IEF显示其pI为9.0.N端测序结果为Asp-Val-Ser-Phe-Arg.采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)和圆二色谱(CD谱)对纯化RI     

苦瓜籽核糖体失活蛋白的基本性质研究

采用 Affi- Gel亲和层析和 Sephacryl S- 10 0分子筛层析等方法获得苦瓜籽核糖体失活蛋白 (RIP) ,经 SDS- PAGE,PAGE,IEF和 PAS方法分析均表明为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带 .根据 SDS- PAGE测得表观分子量为 30 0 0 0 ,经 IEF- PAGE结果计算其 PI为 9.0 ,对无细胞系统中蛋白质生物合成抑制活性明显 ,其 IC50 为 5.3× 10 -10 mol/ L左右 .体外生物活性试验结果表明其对人肝癌细胞 ,Vero,SP2 / 0 ,3T3,Kb,Navana,S- 180等肿瘤细胞株和麻疹病毒均表现有不同程度的抑制作用 ,而对完整人胚肺二倍体细胞却毒性极小 .     

植物核糖体失活蛋白的生物学活性研究进展

核糖体失活蛋白是一类广泛存在于高等植物细胞中,能专门作用于真核细胞损伤核糖体功能的毒蛋白．对植物来源的核糖体失活蛋白的抗病毒、抗肿瘤、诱导细胞凋亡等生物学活性研究进展做了概述,并就其今后的研究工作进行了展望．     

三角梅核糖体失活蛋白在转基因番茄中的功能

根据已报道的三角梅(Bougainvillea spectabilis Willd)的核糖体失活蛋白(RIP)基因序列,以厦门本地艳紫三角梅(B. glabra Choisy cv. Sanderiana)为材料,通过RT-PCR技术扩增到其RIP成熟蛋白的基因序列BouM并成功转化番茄.经检测,BouM转基因番茄对蚜虫、蚂蚁及番茄灰霉菌都有很好的抗性作用,显示了其在植物抗病抗虫中的应用前景.但是同时转基因番茄对小白鼠的生长有一定的抑制作用,因此将其作为植物抗病虫基因利用时,其生物安全性也是一个值得重视的问题.     

间接酶联免疫法检测麻疯树核糖体失活蛋白

建立了基于单克隆抗体的间接非竞争酶联免疫法用于检测麻疯树核糖体失活蛋白的含量.优化单克隆抗体最佳工作浓度为312.5ng/mL,辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG最佳工作浓度为200ng/mL.该方法的线性范围为25~300ng/mL,线性回归方程为y=0.0024x+0.0322,相关系数R2=0.9985,定量检测限25ng/mL,定性检出限3.0336ng/mL.试验证明该方法准确度较高,且具有较好的重复性和特异性,可以用于实际检测麻疯树种仁核糖体失活蛋白的含量.     

一种快速微量的非放射性核糖体失活蛋白活性检测方法

建立了一种非放射性的利用兔网织红细胞裂解液（Rabbit Reticulocyte Lysate）无细胞翻译系统和荧光素酶检测系统（Luciferase Assay System）的核糖体失活蛋白检测方法,快速检测了两种方法提取的麻疯树核糖体失活蛋白（RIPs）Curcin的无细胞蛋白质翻译抑制活性,测得离子交换层析法纯化Curcin的IC50＝0.045±0.009nmol/L,分子筛层析纯化Curcin的IC50＝0.217±0.026nmol/L;该方法避免了放射性同位素的使用,使检测过程简便、快速     

川滇琼地区麻疯树种子核糖体失活蛋白资源调查

本研究对西昌、攀枝花、仁里、海口、三亚、东方六地的麻疯树种子进行资源调查研究,结果显示六个地区麻疯树种子胚乳核糖体失活蛋白含量均值为1.8770~2.5602mg/g,由高到低依次为西昌、三亚、海口、仁里、攀枝花、东方,且地区间差异较大.各地区内部种子胚乳核糖体失活蛋白含量数据分析显示,仁里地区种子胚乳核糖体失活蛋白含量变异系数最大,为14.6189;海口地区的变异系数最小,为7.1876.麻疯树种子性状相关性分析结果显示胚乳核糖体失活蛋白含量与百粒重、出仁率值在0.01水平上没有相关性,与含油率相关性不显著,与可溶性蛋白含量在0.01水平上低度负相关.综合各项指标认为西昌地区的麻疯树种子核糖体失活蛋白含量较高,可作为现阶段核糖体失活蛋白应用的材料来源之一.     

麻疯树核糖体失活蛋白curcin基因的原核表达及其抗真菌活性的研究

通过PCR方法,将麻疯树核糖体失活蛋白curcin的开放阅读框片段从麻疯树总DNA中扩增出来.并将该克隆基因片段连接到原核表达载体pQE-30中,成功构建了重组质粒pQE-C,转化大肠杆菌M15菌株.经IPTG诱导后,curcin重组蛋白在大肠杆菌中成功表达.然后通过纯化原核表达产物,得到纯化的curcin重组蛋白,并以纸片法进行体外抗菌活性检测,发现其具有较强抗真菌活性.     

热激蛋白的分子进化研究

热激蛋白是细胞内含量最丰富的蛋白质之一,在各种生物体内广泛分布.近年来对热激蛋白的研究已深入到结构、性质、功能等各面,其研究主要集中在:1)作为分子伴侣协助细胞内肽链的折叠;2)参与MHCⅠ类的分子呈递;3)使抗原通过内吞作用进入靶细胞;4)肿瘤免疫和分子疫苗开发.然而,虽然热激蛋白的研究已成为医学、生物学上的热点,其在分子进化上的研究也日渐增多,但这方面的报道仍然较少,本文主要从热激蛋白分子进化方面作一综述,这对理论研究、生物进化分析上都有着重要的意义.     

人类核糖体蛋白加工假基因在进化中的熵变

用生物信息学方法计算出人类核糖体蛋白加工假基因(RP加工假基因)的进化距离.假定在统计意义上,不同进化距离的假基因可粗略代表假基因的进化历程.在此假定基础上从信息论的角度去研究假基因在进化中的熵变.结果发现,1) 假基因序列的紧邻碱基关联随进化逐步增强;2) k-mer信息熵中,小k-mer(k=1,2,…,5)信息熵随进化减少,大k-mer(k=7,8)信息熵随进化先迅速减少,随后增加;3) 关联信息熵随进化减少,其中紧邻碱基关联信息熵的减少幅度最明显.这些可能与背景突变压力作用有关.     

被子植物胚胎发育的分子遗传学研究

被子植物的胚胎发育有许多自身特点，它可分为形态发生，种子后熟两个阶段，前不仅产生了特定的组织器官或其原基，而且形成了根分生组织与茎端分生组织这两个主体模式元件，更重要的是决定了植物个体发育的程序与整体结构模式，体胚发生与合子胚发育经历相似的过程，体胚发生技术被广泛地用作检查合子胚发充早期子生物学事件的一种实验系统，但由于体胚发生与合子胚发育的基因表达也存在差异，对采用体胚发生技术研究合子胚发育机理的恰当性众说不一。除此之外，较有希望的研究方法还有遗传解剖法，人们已分离了大量与植物胚胎发育胶 有关的单基因突变体，对其研究的目的在于克隆与发育相关的那些基因，并进一步对之进行分析与鉴定以理解胚胎发育的分子机理，由于难以得珐足够量的材料用于分析，已分离到的大多数基因是胚发育较晚期特异性表达的基因，如种子储藏蛋白和LEA蛋白的基因，对它们的研究揭示了胚发育中基因表达调控的一些机理，如今已克隆到一些胚发育早期的基因，如与顶基轴向或辐射径向模式形成有关的基因，与细胞伸长，分裂，分化相关的基因等，本对被子植物中的胚胎发育及其研究进行了综合性阐述。     

两种麻疯树核糖体失活蛋白基因Curcin和Curcin C在种子萌发过程中的表达模式研究

为了研究和开发丰富的麻疯树资源,本研究以四川省西昌市金沙江干热河谷地区的麻疯树种子为材料,将种子浸水萌发后收集各组织用于实验。qRT-PCR结果显示胚乳中Curcin、Curcin C基因表达先增加后减少,在子叶中Curcin C基因的表达也是如此。Western Blot结果显示Curcin蛋白在根、下胚轴、真叶、子叶中不表达,Curcin C蛋白在根和下胚轴中也不表达,而在真叶、子叶中表达。生物信息学软件预测及亚细胞定位结果都显示Curcin:GFP和Curcin C:GFP融合蛋白定位在细胞壁上。本研究初步阐明了两种麻疯树核糖体失活蛋白Curcin、Curcin C的表达模式并对其进行了亚细胞定位。     

麻疯树核糖体失活蛋白Curcin和Curcin C与腺苷及腺嘌呤的互作方式分析

麻疯树核糖体失活蛋白Curcin和Curcin C均具N-糖苷酶活性,然而两者的体外翻译抑制能力却具有明显差异,这暗示着两者的N-糖苷酶活性也存在差异.为了探究造成这一差异的结构基础,本研究使用trRosetta对两种蛋白进行了三级结构的预测,通过PROCHECK和Qmean对预测得到的三级结构模型进行了质量评估,利用Chem3D对小分子配体腺嘌呤和腺苷进行了结构优化,借助UCSF Chimera对Curcin及Curcin C活性位点的氨基酸组成进行了预测.最终使用分子对接软件AutoDock将预测得到的模型与小分子腺嘌呤及腺苷进行分子对接.对接结果显示,两种蛋白与腺嘌呤的相互作用模式具有较高的相似性,但Curcin的关键氨基酸Arg并未参与到与配体的相互作用.此外Curcin C与腺嘌呤和腺苷之间的结合能都低于Curcin,且其和腺苷与腺嘌呤之间结合能的差值也要高于Curcin.这一结果暗示着Curcin和Curcin C之间的活性差异与其活性位点处的结构特征有关,Curcin C中的关键氨基酸Arg与腺嘌呤及腺苷的结合位点更为靠近,从而导致Curcin C与底物之间的结合能更低,...     

胃癌中p53基因失活及其蛋白产物的免疫组化分析

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂我及免疫组化等方法同步研究２５例胃癌标本的ｐ５３基因突变，杂合性丢失及蛋白持表达，在２２例胃癌中同时获得有关ｐ５３基因突变和杂合性丢失的检测结果，被检出ｐ５３基因突变的５例胃癌中，２例伴有杂合性丢失，３例仅有ｐ５３基因突变。     

钙调素分子进化的研究

本文以计算机为工具，对不同生物来源钙调素一级结构全序列保守性和变异性进行了数量分析，并与细胞色素ｃ的保守性进行了比较，表明ＣａＭ保守性强于同类生物的细胞色素ｃ；同时对钙调素分子的进化速率进行了比较，发现钙调素是除组蛋白和Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ以外目前已知最保守的蛋白质     

真核生物中支架蛋白家族(IQGAP family)的分子进化分析

支架蛋白家族(IQGAP family)广泛存在于真核生物中,在细胞的信号转导、骨架运动、细胞分裂的过程中都有着重要功能.研究分析IQGAP蛋白家族的分子进化,有助于深入全面地了解整个IQGAP蛋白家族在不同物种中功能.通过使用相关数据库,在35个真核生物物种中检索到了70个支架蛋白家族成员的序列信息,并对其进行了系统的分子进化研究.我们发现:支架蛋白家族基因广泛存在于后生动物(Metazoan)、真菌(Fungi)、变形虫界(Amoebozoa)以及其他一些真核生物中,提示支架蛋白存在于最后的真核生物的共同祖先(Last Eukaryotic Common Ancestor,LECA).系统发育分析表明脊椎动物的IQGAP蛋白和非脊椎动物中代表性IQGAP基因共享一个共同的祖先基因,单个的IQGAP祖先基因在早期脊椎动物中(在四足总纲和硬骨鱼纲的分离之前),发生了两次基因复制事件,导致现存的脊椎动物中3组IQGAP基因(IQGAP1,IQGAP2,IQGAP3)产生.     

负载型光催化剂的失活研究

考察了TiO2光催化剂降解亚甲基蓝时，pH值、TiO2预处理、制备条件及反应操作方式等对光催化剂稳定性的影响，对以玻璃弹簧为载体，采用浸涂-烧结法制备的纳米TiO2负载型光催化剂的失活现象进行了初步研究。结果表明：反应副产物在光催化剂表面的强吸附或积累是造成光催化剂失活的主要原因，并且在碱性条件下失活进一步加剧。