用改进的酚-氯仿法提取榕小蜂基因组DNA及SRAP分析

以传粉榕小蜂为材料,用改进的酚-氯仿法对不同保存条件下的样品提取基因组DNA,并进行分光光度、琼脂糖凝胶电泳、SRAP扩增等方法的鉴定.结果表明:改进的酚-氯仿法均可从4种保存条件下的样品中提取出DNA,新鲜样品和体积分数95％乙醇固定样品提取效果比其他2组提取效果好.选择体积分数95％乙醇固定所提取的DNA为模板进行...     

酒精和冷冻处理对肌肉组织基因组DNA提取的影响

提取基因组DNA的质量对于后续的基因扩增、酶切以及测序等分子生物学研究具有关键的影响,对肌肉组织进行不同的酒精和冷冻处理会显著影响提取DNA的质量。经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品解冻,取肌肉组织放入75%酒精处理后提取的基因组DNA完整性差、降解厉害;经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品直接取肌肉组织提取的基因组DNA比较完整、降解程度低;活体采取的黄鳝新鲜肌肉组织样品经过75%酒精处理,在-80℃超低温冷冻数日然后提取的基因组DNA质量也较好,电泳条带明晰而锐利,弥散降解带较少。后两种处理方法对黄鳝肌肉组织中DNA酶活性降低显著,因此提取的肌肉组织基因组DNA质量较高,可以有力支持后续的酶切、PCR扩增等分子生物学实验。     

黑麂粪便DNA的简易提取方法

收集九龙山自然保护区野外自然条件下的黑麂粪便样品,用无水乙醇保存于-70℃冰箱,经十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）裂解液温浴粪便、酚／氯仿抽提及聚合酶链反应（PCR）纯化试剂盒纯化等步骤提取黑麂粪便DNA,并扩增线粒体DNA细胞色素b基因和2个微卫星位点进行检测;同时提取黑麂肌肉和皮毛样品的DNA作为对照．结果显示,该方法可以从粪便中提取到高质量的黑麂DNA,并可进行有效扩增,为黑麂及其他濒危鹿科动物的非损伤取样提供了一种简易方法．     

3种不同方法对标本基因组DNA固定和抽提效果研究

利用常规基因组DNA抽提方法,对分别用甲醛、乙醇、聚乙二醇3种固定液固定的鲫(Carassius auratus)肌肉样品基因组DNA提取进行了比较研究。结果表明:5%甲醛保存的样品很难提取到完整的基因组DNA,乙醇95%和聚乙二醇(分子量为600)保存的样品均能成功提取出基因组DNA,并能成功地进行18S rDNA的扩增。同时探讨了不同固定方法对基因组DNA提取的影响。     

人面果叶总黄酮的提取工艺研究

目的:优化人面果叶总黄酮的提取工艺.方法:利用单因素和正交实验法,以干膏得率和总黄酮得率为评价指标,考察了乙醇浓度、料液比和提取温度等因素对提取效果的影响.结果:乙醇浓度70%,提取温度80℃,料液比1:6,提取时间0.5 h,为人面果叶总黄酮的最优提取参数.按该工艺提取次数1次,总黄酮得率可达4.96%.结论:该工艺优化了人面果叶总黄酮的提取过程,并验证了其重现性.     

刺五加总黄酮提取工艺优化研究

采用均匀设计四因素三水平正交实验方法,对刺五加总黄酮最佳提取工艺进行优化研究,正交实验结果表明:温浸法中四因素对刺五加总黄酮提取的影响顺序为:浸泡时间>乙醇浓度>水浴温度>料液比,刺五加总黄酮的最佳提取工艺:8倍体积80%乙醇浸泡1.5 h水浴温度70℃,这些提取条件的确定为中药刺五加的大规模开发和应用提供了科学资料和依据。     

橙皮、柚皮、桔皮抗氧化活性物质的提取与保存条件优化

实验提取了橙皮、柚皮和桔皮中的活性物质,以DPPH自由基清除能力和羟基自由基抑制能力为考察指标,分析比较了三者的抗氧化能力,并通过正交试验优化了其提取工艺和保存温度.结果表明,3种果皮中桔皮在pH值为3的70%乙醇的溶液中,以料液比为1∶20的条件下提取,提取物保存于25℃,清除DPPH自由基和抑制羟基自由基的效果最佳.     

茶树花黄酮的提取及对羟自由基的清除效果

通过对茶树花物料粒度、不同提取剂和提取方式的比较,研究茶树花黄酮的最佳提取工艺;并比较不同提取方法获得的茶树花黄酮提取物对羟自由基(·OH)的清除效果.结果表明:乙醇热回流提取的最佳工艺条件为:体积分数95%的乙醇,料液比1∶15,80℃下批次提取90 min;超声波振荡提取最佳工艺为:体积分数95%的乙醇,料液比1∶30,提取温度45℃,批次提取80 min.超声波结合热提法获得的茶树花黄酮提取物对·OH的清除效果最好.     

沙棘叶水溶性多糖的提取工艺

通过采用95%乙醇回流脱脂-热水提取-乙醇沉淀的提取方法,在单因子实验的基础上进行正交实验,确定沙棘叶水溶性多糖的最佳提取工艺条件为温度70℃,时间2h,料液比为1:8.多糖最大得率为24.02%.     

不同保存方式下金龟甲虫DNA提取方法及28S rDNA序列分析

通过电泳检测和PCR扩增28SrDNA核基因序列的结果,比较了无水乙醇、75%乙醇、针插干制3种金龟甲虫标本的保存方式和SDS-蛋白酶K法、CTAB法、饱和NaCl法3种提取DNA方法.结果显示,SDS-蛋白酶K法、CTAB法提取3种保存方式的标本时,可成功提取DNA并有效扩增目的基因;饱和NaCl法仅能提取无水乙醇保存标本的DNA并扩增目的基因,而75%乙醇保存标本和干制标本的DNA提取和基因扩增均不理想.