氯霉素残留胶体金免疫层析快速检测法的研制

建立一种快速、简易的检测样品中氯霉素残留含量的胶体金免疫层析法.将抗氯霉素单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的氯霉素抗原包被在硝酸-醋酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其与待测样品中氯霉素竞争结合胶体金标记的氯霉素单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测的结果.用GICA与ELISA试剂盒对比检测了...     

苦荞籽中黄曲霉毒素B1质量分数检测方法的研究

利用AFB1免疫亲和柱对苦荞籽进行前处理,使用高效液相色谱仪测定AFB1的质量浓度,建立了一种检测苦荞籽中AFB1质量分数的检测方法.采用该方法测定了凉山州不同区域苦荞籽中AFB1的质量分数.结果表明:新建方法的检测限为0.2 ng/mL,精密度良好,添加回收率平均为85.87％.利用此法测定了凉山州不同区域的苦荞籽,...     

大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析快速检测法的建立

建立一种大肠杆菌O157∶H7的胶体金免疫层析快速筛查方法.利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157∶H7,对该法进行敏感性、特异性和食品样品的适用性分析.该法能在10 min内完成检测;该试纸条仅与O157∶H7阳性样品发生特异性反应;大肠杆菌O157∶H7的最低检出浓度为1×105 cfu/mL.新建立的大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查.     

侧向层析试纸条现场检测牛奶中黄曲霉毒素M1

文章研究了一种可用于现场快速检测牛奶中黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1,AFM1)的方法,经测试该方法不需要任何的样品前处理,测试结果不受牛奶基质的影响.该实验分别在标准样品及牛奶样品中建立了线性方程,显示线性良好.测试结果表明AFM1快速检测试纸条的检测限为0.05 μg/L,检测时间为10 min.该方法准...     

心肌肌钙蛋白I胶体金免疫层析快速检测法的建立

为建立一种快速、简单实用的检测心肌肌钙蛋白I的胶体金免疫层析法(GICA),用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,用鼠源抗cTnI单克隆抗体进行胶体金标记,采用胶体金免疫层析技术及双抗体夹心法原理检测心肌肌钙蛋白I,并对该方法进行敏感性、特异性和稳定性分析.结果:该方法能在10 min内完成检测;该试纸条仅与心肌肌钙蛋白I阳性样品发生特异性反应;检测心肌肌钙蛋白I的最低检出质量浓度为1.0 ng/mL;与化学发光免疫分析法(CLIA)对比检测63份临床标本,阳性符合率97.0%,阴性符合率100%,总符合率98%,试纸条性能稳定.     

鸡传染性支气管炎病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制

[目的]建立一种快速、灵敏的胶体金免疫层析法(Colloidal-gold immunochromatography assay),用以检测禽类早期感染鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)和监测IBV疫苗接种免疫水平.[方法]将重组IBV核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白包被在在试纸条检测线,羊抗兔IgG包被在试纸条控制线,用胶体金-兔抗鸡IgG偶联物作为示踪剂,检测血清中IBV抗体.[结果]制备所得的胶体金免疫层析试纸条与IBV抗体阳性血清反应呈阳性,与鸡新城疫病毒抗体阳性血清、鸡传染性法氏囊病毒抗体阳性血清、鸡毒霉形体抗体阳性血清和SPF标准鸡血清未发生交叉反应;当IBV抗体阳性血清以1:35比例稀释后,依然可以用该试纸条检出;该试纸条在60 d的保存期内重复性良好;以从不同养殖场采集到的鸡血清样本作为测试对象,比较该试纸条和进口 ELISA试剂盒的检测结果,两者符合率为97.44％.[结论]成功制备了检测耗时短、检测限低、特异性强、稳定性好的IBV抗体检测胶体金免疫层析试纸条,为鸡传染性支气管炎的早期诊断以及免疫监测提供了简便高效的技术方法.     

生物素链霉亲和素联合免疫层析用于快速检测NT-proBNP

为提高常规免疫层析技术的检测灵敏度,引入生物素-链霉亲和素系统,以荧光微球作为标记物,建立了一种新型快速定量检测NT-pro BNP的方法.试验结果表明:新型试剂盒在0.02~30μg·L~(-1)范围能对NT-proBNP实现快速检测.在全血检测中,新型试纸条所测NT-pro BNP浓度与雷度快速免疫分析仪定量检测结果具有很好的一致性.新型免疫层析试纸条大大提高了快速检测的准确性,可广泛用于床旁检验(POCTs)等临床诊断阶段.     

唾液中HIV抗体快速检测诊断胶体金免疫层析试纸条的研制

制备一种适于早期HIV的大范围筛查使用的检测人唾液中抗HIV-1抗体的胶体金免疫层析试纸条.采用柠檬酸三钠还原法制备直径为19nm的胶体金颗粒,标记HIV-1gp41抗原,制备胶体金免疫复合物,按常规组装成免疫层析检测试纸条.结果表明:阳性HIV患者唾液中的抗HIV抗体与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的红色圆点.胶体金颗粒粒径均一,胶体金免疫复合物性能稳定,特异性强,试纸条检测时间只需10～20min.制备的胶体金免疫层析试纸条检测唾液中HIV抗体,使用安全,简便快速,结果准确,适用于基层医疗单位使用和对大量人群的规模筛查等.     

脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体胶体金检测试纸条的研制

目的:为研制快速检测脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体的胶体金试纸条.方法:以辛酸-硫酸铵沉淀法纯化脊髓灰质炎病毒Ⅰ型单克隆抗体,用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,胶体金标记单抗,再结合脊灰病毒抗原形成复合物,固定于金标垫上,将鼠抗人IgG和羊抗鼠IgG分别包被于试纸条的T (检测线)处和C (质控线)处,应用该试纸条进行性能检测.结果:以已知的脊灰病毒Ⅰ型阳性血清作为检测样品,试纸条检测的灵敏度为1:80;特异性试验证明该试纸条与甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒抗体阳性血清没有交叉反应;检测结果与脊灰病毒Ⅰ型疫苗抗体检测试剂盒(ELISA)试验的符合率为86.7%.结论:该试纸条检测脊灰病毒Ⅰ型的抗体水平具有较好的特异性与灵敏性,适用于大规模临床血清抗体水平检测,具有良好的应用前景.     

毛细管气相色谱法快速、低成本测定蔬菜中有机氯农药残留

对蔬菜中六六六(BHC)、滴滴涕(DDT)残留量的快速、低成本检测方法进行了研究.样品用正己烷-丙酮作提取剂,用快速混匀器快速提取,提取液中加入浓硫酸,然后用快速混匀器净化,氮吹浓缩,采用SPB-5弹性石英毛细管柱分离样品,GC-ECD检测BHC,DDT的残留量.方法的线性范围为4.5×10-13～3.5×10-11 g,最小检测量为1.2×10-13～6.6×10-12 g,加样平均回收率为87.4%～97.2% (RSD为1.0%～4.7%).本方法成本低,简便快速,在2 h内即可完成检测.     

黄曲霉素M1间接竞争ELISA的建立及其在牛奶中的应用

利用高特异性单克隆抗体,建立黄曲霉素M1的间接竞争ELISA检测方法。棋盘法优化了包被抗原及酶标抗体的最佳稀释倍数。包被抗原和酶标抗体的最佳工作浓度分别为1∶15000和1∶2000。该方法的线性范围为(0.1—8.1)ng·mL-1。除了与黄曲霉素B1的交叉反应为35%外,与黄曲霉素B2、黄曲霉素G1及黄曲霉素G2的交叉反应均小于1%。在牛奶实际样品检测的回收率均大于70%,而且检测过程在10min以内即可完成。该方法灵敏度高,特异性强,而且操作简单,适合多样本的快速筛查,为黄曲霉素M1的高效检测提供了一个良好的选择。     

应用流式微球检测黄曲霉毒素B1方法的建立

采用活性酯法,将AFB1-BSA人工抗原交联于含有羧基表面的荧光微球,通过与游离AFB1竞争抗AFB1单克隆抗体后,再与异硫氰酸荧光素标记二抗的反应,建立基于微球的间接竞争免疫检测方法.检测结果表明,流式细胞仪检测AFB1的检测限为0.03 ng·mL-1,检测范围为0.05～1.0 ng·mL-1.与黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2的交叉反应率均低于1.0%.在玉米样品中的加标回收率为87%～103%,变异系数为6.1%～8.4%.     

油页岩微生物总DNA的提取方法

为建立油页岩微生物总DNA提取方法,以两矿区的6个样品为材料,采用SDS高盐、SDS液氮研磨、SDS反复冻融、SDS异硫氰酸胍和试剂盒提取法分别对总DNA进行提取.结果表明,各方法提取效果差异很大,改进的SDS高盐提取法效果最好,各样品均得到约23kb较完整片段,且产率显著高于其他方法,达9144~38685ng·g-1干样;以未纯化的DNA为模板,对16SrDNA进行PCR-DGGE,得到了相应的扩增产物及DGGE指纹图谱,说明该法适合油页岩样品.SDS液氮研磨和SDS反复冻融提取法仅能得到部分样品总DNA,且产率和纯度较低,而SDS异硫氰酸胍和试剂盒提取法无DNA提出,不适合此类样品.     

国产抗HIV－1试剂盒对献血员血清检测

国产抗ＨＩＶ－１试剂盒对献血员血清检测陈长荣，戴永强（厦门市中心血站）（厦门新创科技有限公司）艾滋病＋（ＡＩＤＳ）是一种正在全世界广泛传播的疾病，其病毒（ＨＩＶ）是一种单链ＲＮＡ逆转录病毒．ＨＩＶ感染后２个月左右在血清中可检测出抗ＨＩＶ阳性，从感染到...     

抗丁草胺多克隆抗体的制备及应用

以牛血清白蛋白-丁草胺免疫抗原免疫家兔获得了抗丁草胺多克隆抗体,并建立了竞争酶联免疫吸附检测丁草胺(除草剂中的一种主要成分)分析方法。该方法的检测范围在1×10^-9～100×10^-9mg/mL之间,且和化学结构相似的甲草胺和乙草胺无交叉反应。该方法也可用于检测稻田水样中丁草胺的含量。     

禽流感病毒通用型荧光定量PCR检测试剂盒比对结果分析

对6种禽流感病毒通用型荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction),PCR检测试剂盒进行比对与科学评价,为实验室采购提供依据。利用禽流感病毒H5、H7、H9亚型标准品,鸡新城疫活疫苗与传染性支气管炎活疫苗对市售的6种品牌(分别记为A、B、C、D、E、F)禽流感病毒通用型荧光定量PCR检测试剂盒灵敏性与特异性进行了比对,并对97份临床样品进行了检测,筛选出禽流感病毒通用型最佳检测试剂盒。结果表明:A厂家试剂盒最低可检出1:100倍稀释的H7亚型标准品浓度,B厂家试剂盒最低可检出1:1倍稀释的H7亚型标准品浓度,C厂家试剂盒最低可检出1:10倍稀释的H7亚型标准品浓度,D厂家试剂盒最低可检出1:10倍稀释的H7亚型标准品浓度,E厂家试剂盒最低可检出1:1 000倍稀释的H7亚型标准品浓度, F厂家试剂盒最低可检出1:10倍稀释的H7亚型标准品浓度,6种试剂盒特异性均良好。综上,E厂家试剂盒优于其他厂家试剂盒,可以作为动物疫病检测实验室在实施监测任务中的首要选择。     

基于核磁共振弛豫谱的变压器油老化检测研究

针对目前常规的变压器油绝缘热老化检测中过程繁杂等问题, 提出一种基于低场核磁共振弛豫时间谱的检测方法。根据油品中烃类化合物在高压放电环境中出现裂解、结构发生改变的原理, 设计变压器油热老化核磁共振横向弛豫谱检测系统。采用自旋回波序列采集油样时域信号回波峰值点, 描述弛豫时间谱反演算法。利用山西省电力公司长治变电站110 kV高压变压器提取的油样(挂网运行年限分别为1, 10和20年), 进行检测装置性能的验证及测试。结果表明, 在17.173 MHz条件下, 该检测方法可以在1分钟内完成一次油样的信号检测与弛豫谱反演, 3种油样的弛豫时间峰值分别为203.83, 145.82和141.95 ms。可以看出, 随着年限的增加, 弛豫时间呈下降的趋势, 表明高温能够导致油品中分子化学键断裂, 析出气体。     

葵花籽油中掺入少量地沟油的检测方法

用三维荧光光谱法对葵花籽油中掺入少量地沟油进行了检测．结果表明,当加入地沟油的体积分数φ〉10％时,在λex=310nm,λem=345nm处,葵花籽油相对荧光强度I由7673迅速下降至3555,与新鲜葵花籽油相比,荧光强度下降了4118,由此可作为葵花籽油中是否掺入地沟油的判据．该方法灵敏、稳定,适合于葵花籽油中掺杂少量地沟油的测定．     

液相色谱指纹图谱在熟地黄质量稳定性中的应用研究

采用C18Betasil色谱柱,流动相乙腈-0.1%醋酸溶液,梯度洗脱,波长320 nm,流速1.0 mL.min-1.建立了熟地黄的HPLC色谱指纹图谱考察不同批次熟地黄饮片质量的稳定性和一致性.结果:对饮片厂提供的10批清蒸和10批酒炖样品进行了测定.精密度、重复性试验结果良好,样品测定结果表明所测定的饮片质量比较均一、稳定.HPLC指纹图谱是考察药材质量是否稳定、一致的有效手段.     

AOZ化学发光酶联免疫检测试剂盒的研制

以呋喃唑酮代谢物(AOZ)和卵清蛋白(OVA)偶联物为包被抗原,与AOZ样品或标准品竞争呋喃唑酮多克隆抗体,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔抗体(IgG),研制AOZ的化学发光酶联免疫检测试剂盒。以鲁米诺-过氧化氢为发光底物进行化学发光酶联免疫检测。结果表明:试剂盒分析灵敏度为0.005μg/L,比传统的ELISA试剂盒高出一个数量级,拥有更低的检测限,批内变异系数为2.1%～7.9%,批间变异系数为5.2%～9.5%,批内回收率为93%～113%,批间回收率为94%～110%。与呋喃西林代谢物(SEM)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)及呋喃妥因代谢物(AHD)之间无明显交叉反应。此试剂盒可用于水产品中AOZ的检测。