大熊猫肌肉肌酸激酶的纯化与性质

用改进的Ｋｕｂｙ等人方法从大熊猫骨骼肌中纯化了肌酸激酶，并对此酶的某些性质进行了研究。纯化倍数为 ３５．７；收率１７．３％；比活力为 ５５．３Ｕ／ｍｇ；等电点为 ６．６０。聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为一条带。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为４２ ０００，总分子量为 ８４ ０００，该酶是由两个相同亚基组成的二聚体。酶对肌酸的Ｋｍ 为 ５．２６ｍｍｏｌ／Ｌ；对ＡＴＰ的 Ｋｍ为 ０．７４ｍｍｏｌ／Ｌ，酶的最适温度是 ３０～３６℃；酶的最适ｐＨ大于８．０。     

Characteristics of Two Intermediates Trapped in the Unfolding Pathway of Arginine Kinase Induced by Guanidinium Chloride

Equilibrium guanidinium chloride （GdmCl）-induced unfolding of arginine kinase （AK） was investigated by enzymatic activity, intrinsic fluorescence, 8-anilinonaphthalene-1-sulfonic acid （ANS） fluorescence, circular dichroism （CD） spectrum, and size-exclusion chromatography. The measurements showed that AK unfolded through two equilibrium intermediates： the molten globule state and the partly folded state. Both intermediates have no enzyme activity. The molten globule state exists at 0.4-0.8 mol/L GdmCi, perhaps after the N-terminal domain has unfolded but the C-terminal domain is still intact. The partly folded state occurs at 1.1-1.5 mol/L GdmCI with a hydrodynamic volume no more than 1.6-fold larger than the native state and a pronounced far UV-CD signal. Its ANS fluorescence intensity is about 50% of the molten globule state. This partly folded state shares similarities with the “burst” kinetic intermediate of protein folding.     

乳酸对肌酸激酶活性抑制作用的研究

应用酶活测定的方法分析了肌酸激酶在不同浓度乳酸中的活性变化．实验结果说明在失活过程中没有蛋白质的聚沉；肌酸激酶的失活遵循一级反应的一相过程；失活与乳酸浓度和作用时间呈正相关．通过对比实验结果显示，乳酸是通过其解离状态的H^ 改变了机体PH值而影响肌酸激酶活性的，并且就乳酸对肌酸激酶影响及其意义进行探讨．     

磁场对肌酸激酶的影响

建立了流动注射和光纤光度法测定肌酸激酶（Ｃｋ）活性的方法。求测了Ｃｋ催化反应的米氏常数ｋｍ和反应活化能Ｅ,研究了磁场对Ｃｋ催化活性的影响。较长时间磁化Ｃｋ溶液和测活溶液,分别可使Ｃｋ加速失活和活性升高,１００ｍＴ磁场磁化处理测活液１５ｈ可使Ｃｋ催化反应速度增加４３．７％。     

Effects of Glycerol in the Refolding and Unfolding of Creatine Kinase

IntroductionProtein folding is the process by which the aminoacid sequence of a protein determines the three-dimensional conformation of the functionalprotein[1 ] . The elucidation of the molecularmechanism of protein folding from a disorderedpolypeptide chain to the specific native stateremains one of the major challenges inbiochemistry[2 ,3] ,namely,deciphering the secondhalf of the genetic code[4 ] .Molecular chaperonesplay an importantrole in protein folding in vivo aswell asin vitro.A cha…     

大熊猫肌酸激酶热变性中活性与构象变化的比较

比较了大熊猫肌酸激酶在各种不同温度下热变性时，活性变化与构象变化的速度常数。结果表明在较低温度下，酶的失活速度与构象变化速度相当．而在较高温度下变性时酶的失活速度快于构象变化速度。这表明酶分子的活性部位的微区构象比整个分子的构象具有更大的易变性或柔性。     

大熊猫肌酸激酶热变性时活性与构象变化的比较

比较了热变性时大熊猫肌酸激酶的构象与活性的变化，结果表明：酶在４０℃ 及 ４０℃以下温度保温 １０ ｍｉｎ，酶的活性及构象均无明显改变； ４０℃以上酶的活性及构 象发生改变，在４５～５５℃之间，酶的活性与构象发生急剧变化，５５℃时酶活性已完全 丧失，用ＣＤ、荧光及表面流基暴露等手段监测的酶分子的构象也发生很大变化，但尚未 完全，随温度的上升继续发生变化。上述结果表明：酶活性部位的微区构象比较脆弱或 比较柔性，并且酶分子的空间结构是酶具有的活性的基础。     

Structure Characterization of the Folding Intermediates of Proteins

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＳｍａｌｌｓｉｎｇｌｅ ｄｏｍａｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓｕｓｕａｌｌｙｕｎｆｏｌｄｒｅｖｅｒｓｉｂｌｙｂｙａｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｗｈｉｃｈｐａｒｔｉａｌｌｙ ｆｏｌｄｅｄｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｆｕｌｌｙｆｏｌｄｅｄ ,ｎａｔｉｖｅｓｔａｔｅａｎｄｔｈｅｆｕｌｌｙｕｎｆｏｌｄｅｄｓｔａｔｅａｒｅｎｏｔｓｔａｂｌｅａｔｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ .Ｕｎｄｅｒ ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ,ｓｏｍｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓｈａｖｅｃｏｎｆｏｒ…     

血清磷酸肌酸激酶BB的薄层等电聚焦分析法

通过对载体两性电解度,电极液,电泳功率和时间及加样方法,灵敏度等影响因素比较分析,对薄层等电聚焦血清磷酸肌酸激酶－ＢＢ的实验方法进行了探讨,并在此基础上对脑缺血病变时ＣＫ－ＢＢ亚型变化进行了初探。     

大鼠离体心脏缺灌和再灌早期乳酸脱氢酶和肌酸激酶的释放规律

用Ｌａｎｇｅｎｄｏｅｆｆ法灌流雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠心脏，平衡１０ｍｉｎ，缺灌１０ｍｉｎ，于再灌３ｍｉｎ内每隔１５ｓｅｃ收集一次冠脉流份，连续检测冠脉流份中ＣＫ、ＬＤＨ以及ＧＯＴ的活性（Ｕ／Ｌ），比较它们释放的动态特征。结果表明，再灌３ｍｉｎ内，３种酶都呈双相释放。第１峰出现在再灌１５ｓｅｃ，酶活性为对照值的５一９倍，它主要反映缺灌损伤。再灌９０一１２０ｓｅｃ又出现第Ⅱ峰，主要代表再灌损伤。无论是再灌３ｍｉｎ内酶释放总量，还是第Ⅰ，第Ⅱ峰的峰值，依酶活性高低排列的次序都是ＣＫ＞ＬＤＨ＞ＧＯＴ。此外，在部分动物身上进行了反复两次缺灌再灌实验，结果发现，第二次缺灌后ＣＫ释放量明显高于第一次缺灌值。ＬＤＨ的Ⅰ峰和Ⅱ峰出现时间与第一次无差别，只是３分钟内酶释放总量高于第一次。说明在本实验条件下，未见预缺灌处理对随后再次缺灌有保护作用。缺灌期心率逐渐减慢，收缩力逐渐减弱，但多数标本仍有微弱的收缩。这使缺灌期冠脉流份的酶活测定成为可能。实验发现，早在缺灌１ｍｉｎ时心肌细胞释放的酶，其活性可达对照值的２倍（ｐ＜０．０５），至缺灌１０ｍｉｎ时ＣＫ和ＬＤＨ的值可达对照值的１０倍左右。这一现象进一步证实，再灌１５ｓｅｃ内大量酶的     

用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶及其折叠中间体的分子构象变化

目的用参数Z表征疏水色谱中脲变α-糜蛋白酶(α-Chy)及其折叠中间体的分子构象变化。方法用疏水色谱法对不同脲变条件下的α-Chy进行分离,对收集的不同馏分用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(HPHIC-MALDI-TOF-MS)进行检测,并用紫外和荧光光谱对其分子构象变化进行了验证。结果确认了脲变α-Chy中仅有一个稳定的折叠中间体存在,发现二者的Z值均随脲浓度的增加而减小。在脲浓度范围为0~3.0 mol.L-1时,α-Chy折叠中间体的Z值远小于天然α-Chy的Z值,而脲浓度为4.0 mol.L-1和5.0 mol.L-1时,折叠中间体的Z值稍大于天然α-Chy的Z值。结论α-Chy折叠中间体的分子构象随脲浓度改变基本呈连续性变化,而天然α-Chy的分子构象随脲浓度呈不连续性变化。进一步发现α-Chy的Z值与其复性回收率之间存在着相似的变化规律。中间体的保留机理服从计量置换保留理论(SDT-R),且得到的参数Z可用来表征天然α-Chy和其折叠中间体的分子构象变化。     

一步法合成线性聚二氯磷腈中间体及表征

以PCl3和NH4Cl为原料直接合成了线性聚二氯磷腈（PDCP）,而无需通过六氯环三磷腈（HCCP）开环热聚合制备,对PDCP的特性进行表征;通过大量的反复实验,深入探讨了影响实验结果的几个重要因素,并与传统的合成方法及产物进行了对比．结果表明,一步法合成PDCP能够提高产率、缩短反应时间,从而节约了成本．     

对肌酸补充时间和量的研究

肌酸是一种安全有效的助力剂已为世人所认可,正确合理的运用它的确能帮助运动员提高机体的抗疲劳能力和运动能力,不过如果补充的时间和量把握不准,将可能影响它的效果甚至适得其反.就肌酸补充的时间和量进行研究,希望为教练员和运动员提供参考.     

交换折叠交叉立方体的连通度和超连通度

交叉立方体CQn和交换交叉立方体ECQ(s,t)是计算机系统里常用的2个拓扑结构.CQn中系统地移除了一些边后,获得了交换交叉立方体ECQ(s,t).在ECQ(s,t)的基础上增加了一些边,就获得了一个新的互连网络交换折叠交叉立方体EFCQ(s,t).连通度和超连通度是衡量互连网络可靠性和容错性的2个重要参数.证明了EFCQ(s,t)的连通度和超连通度分别等于其最小度和最小边度.     

粉煤灰合成沸石中间体的表征与性质

本文以热电厂粉煤灰为原料,通过控制碱处理条件合成沸石中间体,利用XRD、FE-SEM和吸附-脱附过程对物相、粒子的形貌以及材料的性质进行表征,吸附实验表明所合成沸石中间体对阳离子染料有明显的脱附作用.     

折叠式MEMS弹簧弹性系数研究与有限元分析

用卡氏第二定律和胡克定律推导出折叠式MEMS弹簧弹性系数的计算公式。ANSYS的仿真结果表明两者的相对误差低于1%。在计算公式和仿真的基础上,研究了各种结构参数对弹性系数的影响规律。最后对设计的弹簧质量块系统分别进行了模态分析和谐波响应分析。分析结果和理论一致。研究结果为其他结构的MEMS弹簧的分析和设计提供了一定的借鉴。     

高纯部分稳定二氧化锆微粉的制备工艺

高纯Zr02微粉作为高温高强特种陶瓷和耐火材料等的重要原料，由于晶型转变所引起的体积效应而影响其耐高温性能，限制其应用范围，因此必须进行晶型稳定化处理．本文介绍了以氧化钇为稳定剂的高纯部分稳定二氧化锆微粉的制备技术及产品质量标准．     

Evidence for the Existence of Cross-Linked Intermediates during Unfolding and Refolding of CK in UGGE

IntroductionCreatine kinase ( CK) plays an important role incell energy metabolism[1] .It catalyses thereversible transfer of a phosphoryl group fromATP to creatine generating phosphocreatine andADP.Owing to its importance in bioenergetics,CK has been extensively studied.There are fourisoforms of the enzyme:muscle type( MM) ,braintype ( BB) ,hybrid type ( MB) ,and mitochondriatype( Mi Mi) .Muscle- CK is a dimer composed of twoidentical subunits,both with relative molecularmass of4.3×…     

一个新的人类精子发生相关蛋白激酶cDNA的克隆

蛋白磷酸化被认为在精子发生过程中起重要作用,从人类胎脑cDNA文库中得到2个克隆,分别长1840bp和1571bp,后者仅比前者在3非翻译区少了约300个核苷酸,二者拟编码322个氨基酸残基,基序分析发现其中含有1段明显的蛋白激酶其序,Northern杂交显示其在睾丸中有显著表达,暂命名为精了发生相关蛋白激酶,原位杂交表明精子发生相关蛋白激酶基因在性成熟小鼠睾丸中主要表达在生精小管的外层细胞中,而这一层细胞主要包含分裂的精原细胞的初级精母细胞,提示精子发生相关蛋白激酶可能在精子发生过程中起着比较重要的作用。