山楂叶总黄酮防治大鼠胰岛素抵抗及脂肪肝的实验研究

观察山楂叶总黄酮(FHB)对胰岛素抵抗大鼠高血脂、氧化损伤及脂肪肝的防治作用,并对山楂叶总黄酮增强胰岛素敏感性和防治脂肪肝的作用机理进行初步探讨.高糖高脂饲料建立胰岛素抵抗大鼠模型,分为正常组、模型组、FHB组和阳性药物对照文迪雅组.12周末观察FHB对血清血糖、血脂、血清胰岛素含量、脂质过氧化和肝功能等的影响.结果表明,FHB组和模型组比较可以显著降低胰岛素抵抗大鼠血清FFA和TG水平,提高HDL-C水平;降低ALT和AST活性,降低肝指数,防止肝脏组织脂肪性病变,同时,明显提高总抗氧化能力和肝脏组织中SOD活性,降低MDA含量.由此得出结论,FHB对胰岛素抵抗大鼠高血脂和氧化损伤起到了良好的防治作用,能够改善病鼠胰岛素抵抗状态,增强其胰岛素敏感性,并具有良好的防治脂肪肝作用.     

植物叶细胞中超氧化物歧化酶分布及性质的研究

油莱叶细胞中超氧化物歧化酶(SOD)主要存在于细胞溶质部分,约占细胞内酶活性的73.9％,亚细胞颗粒中占26.1％。细胞溶质中SOD同工酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳及活性染色后呈现7条谱带,其中电泳迁移率最低的两条为Mn—SOD,其余为Cu—Zn—SOD。Mn—SOD在pH值低于4或高于10时活性明显丧失。酶液在4℃存放两天Mn—SOD活性有所下降,而Cu—Zn—SOD有较好的稳定性。用表面活性剂十二烷基硫酸钠或还原剂β—巯基乙醇、二硫苏糖醇等分别作用时,两种SOD活性均有不同程度的下降。     

薄荷提取物对提高秀丽线虫应激抵抗能力的影响

以秀丽线虫为模型,研究药食同源植物薄荷提取物对其应激抵抗能力的影响,并以紫外辐射为应激条件,进一步研究薄荷提取物抵抗紫外辐射的作用机制.结果表明:薄荷提取物可明显提高线虫抵抗紫外辐射、绿脓杆菌感染、35℃热应激和胡桃醌氧化的应激能力;薄荷提取物可明显降低紫外辐射后线虫体内活性氧(ROS)水平、提高超氧化物歧化酶(SOD...     

氧自由基对CAT、SOD和GPX的氧化修饰研究

以氧自由基产生系统作用于CAT、SOD和GPX，探索氧自由基的氧化修饰对CAT、SOD和GPX结构与功能的影响。结果：CAT被氧自由基氧化修饰后，改变了酶蛋白二级结构(α—螺旋百分含量减少)、空间构象(△Cp减少，分子粒晶直径增大)、辅基Fe(Ⅲ)微环境及酶、底物的亲和力和催化活性。过氧化氢，羟自由基系统可以使SOD酶蛋白氨基酸残基氧化产生羰基，并使SOD活性降低。过氧化氢／羟自由基可在His对SOD作用背景上更为严重地损伤SOD(活性降低幅度更大)。氧自由基对GPX有损伤作用：氧自由基可使GPX酶蛋白氨基酸残基氧化产生羰基，并可使GPX酶蛋白二级结构发生变化(α—螺旋百分含量减少)，这些可能是使GPX活性下降的原因。结果提示：氧自由基的氧化修饰，可对抗氧化酶CAT、SOD和GPX造成损伤。氧自由基使酶蛋白结构和辅基的微环境与价态发生变化，可能是酶活性降低的原因。     

基因转运载体的原子力显微镜研究

通过原子力显微镜观测阳离子脂质体及其与DNA复合物的结构。将一定量的阳离子脂质体以及阳离子脂质体／DAN复合物滴加到新解理的云母片上,干燥后用原子力显微镜观测。结果表明,阳离子脂质体在云母片上形成的颗粒为球形或椭圆形,粒径分布较为均匀;阳离子脂质体／DNA复合物在云母片上的颗粒形状不规则,粒径分布不均且比空白脂质体的粒径大。通过原子力显微镜可以快速有效地观测脂质体以及脂质体／DNA复合物的粒径、表面形态等,为分析脂质体的物理化学性质与基因转运效率的关系提供了一种研究方法。     

牛乳对大鼠应激性胃粘膜损伤期血清MDA含量及SOD活性的影响

研究观察了牛乳对大鼠应激性胃粘膜损伤期血清脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果显示:在应激前3h用0.5ml、1.0ml、2.0ml和应激前0.5h、1.5h、2.5h用2.0ml剂量牛乳分别灌胃,能有效防止胃牯膜损伤形成,血清丙二醛(MDA)含量和SOD活性明显低于和高于对照组,还呈现量—效关系。将1.0ml牛乳注入空肠,具有与灌胃相似的作用。提示在机体应激过程中牛乳可通过有效地降低机体脂质过氧化的产物MDA含量和提高SOD活性,来增强机体抗氧化能力,维持组织细胞的正常生理功能,减轻大鼠应激性胃粘膜损伤程度。     

镉和汞对中华圆田螺超氧化物歧化酶活性的影响

采用急性毒性试验方法,研究了不同质量浓度的镉离子(Cd2+)和汞离子(Hg2+)染毒对田螺肝胰脏超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响.结果表明:低浓度的Cd2+、Hg2+溶液对田螺肝胰脏SOD活性具有抑制—诱导—抑制作用;高浓度的Cd2+、Hg2+溶液有抑制作用,抑制作用随着时间的延长和浓度的增大而增强.可以通过检测中华圆田螺SOD活性的变化,来直接评价环境中重金属污染对生物的毒性效应.     

Zn(Ⅱ)配位脂质体用于高效且血清耐受的基因转染（英文）

近年来,阳离子聚合物、阳离子脂质体等非病毒载体在基因递送中的应用越来越受到人们的关注.然而,血清的存在会降低它们的转染效率,从而阻碍它们在临床中的使用.因此,非常有必要开发能抵抗血清干扰的非病毒基因载体.本工作合成了一种新型的锌离子配位的脂质,其与1, 2-二油酰-SN-甘油-3-磷酰乙醇胺脂质(DOPE)共自组装形成阳离子脂质体(Zn-DTAc脂质体).实验结果表明,Zn-DTAc脂质体可以有效地压缩质粒形成纳米复合物.即使在50%胎牛血清存在的情况下,该复合物也能进行有效的细胞内化和内涵体逃逸,并实现高效的基因转染.     

聚乙二醇修饰白藜芦醇脂质体的特性及其抗肿瘤实验研究

为了探索聚乙二醇(PEG)修饰白藜芦醇(resveratrol,RES)脂质体对提高RES脂质体稳定性、药物包封率和抗肿瘤活性的有效性,通过声波水合法设计的正交实验确定了最高药物包封率的RES脂质体中卵磷脂与胆固醇的摩尔比为3∶1,卵磷脂与白藜芦醇的摩尔比为3∶1,该条件下样品经PEG-2000修饰后仍能保持300 nm左右的大小,6 d后仍具有较高的包封率。此外,以人白血病K562细胞为例对PEG修饰白藜芦醇脂质体(PEG-RES-LIP)的抗肿瘤活性进行了验证。实验表明,PEG-RES-LIP对K562细胞的最佳药物浓度和作用时间分别为120μg/mL和48 h,最高抑制率为85.9%±1.9%,RES-LIP对K562细胞的最高抑制率为67.3%±2.3%。研究结果表明,用聚乙二醇修饰RES脂质体可以有效提高RES脂质体的稳定性、药物包封率和抗肿瘤活性,从而提供了一种可以有效维持其稳定性和抗肿瘤活性的RES脂质体制备方法。     

2型糖尿病伴随高脂血症大鼠模型的建立及二甲双胍的干预

目的研究5%蔗糖饮水和高脂饮食加链脲佐菌素诱导2型糖尿病伴随高脂血症大鼠模型的建立及二甲双胍的治疗作用。方法SD大鼠一次性腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素,给予高脂饮食和5%蔗糖水喂养68 d后进行糖耐量实验,采血检测空腹血糖、血脂、胰岛素、抗氧化水平。结果与对照组比较,模型大鼠空腹血糖、糖耐量试验2 h后血糖、糖化血红蛋白、血清胰岛素和胰岛素抵抗指数显著升高(P<0.05),胰岛素敏感指数显著降低(P<0.05),TG、TC和FFA含量明显升高(P<0.05),SOD活力明显降低(P<0.05),MDA含量显著增加(P<0.05);二甲双胍组胆固醇、游离脂肪酸、空腹血糖、糖耐量异常、糖化血红蛋白、血清胰岛素和胰岛素抵抗指数、MDA显著降低(P<0.05),胰岛素敏感指数和SOD活力显著提高(P<0.05)。结论5%蔗糖饮水能改善大鼠的厌食症状,加上链脲佐菌素的小剂量注射和高脂饮食,可成功复制2型糖尿病大鼠模型,伴随高脂血症和抗氧化损伤。二甲双胍具有降糖、降脂、抗氧化、改善胰岛素抵抗作用,可作为2型糖尿病伴随高脂血症大鼠模型研究的阳性治疗药物。     

超氧化物歧化酶修饰产物结构和性能研究

以β-环糊精的链状衍生物和环状衍生物分别修饰超氧化物歧化酶(SOD),生成SOD的两种修饰产物。采用化学分析方法测定衍生物的醛基、修饰产物的自由氨基以及SOD的活性,并利用红外光谱表征衍生物和修饰产物的结构。对修饰产物的性能研究发现,超氧化物歧化酶经β-环糊精环状衍生物修饰后耐酸性提高了3.6倍,热稳定性也有所提高,而链状衍生物修饰的SOD热稳定性降低了37%。红外光谱分析显示,两种修饰产物的红外谱图中均带有相应的环糊精衍生物的特征吸收带,表明β-环糊精对SOD的修饰是成功的。     

Expression of the SOD gene from Trichoderma harzianum in Saccharomyces cerevisiae

Superoxide dismutases are metalloproteins which play a major role in defense against oxygen radicalmediated toxicity in aerobic organisms. Such proteins are important endogeneity cytoprotection factor involving defence. A 751-bp full-length cDNA sequence of an SOD gene was isolated from the Trichoderma harzianum. The full-length cDNA of the SOD gene consists of one 465-bp open reading frame nucleotide, which encodes a 15.7-kDa polypeptide consisting of 154 amino acid residues. Sequence analysis revealed that SOD gene has more than 72%-86% amino acid sequence homology with those of other fungi. The SOD gene was integrated into the genomic DNA of pYES2 by insertion into a single site for recombination, yielding the recombinant pYES2-SOD. SOD expressed by pYES2-SOD was induced by galactose. We test whether SOD could offer abiotic stress resistance when it was introduced into yeast ceils. A transgenic yeast harboring T. harzianum SOD was generated under the control of a constitutively expressed GAL promoter. The results indicated that SOD yeast transformants had significantly higher resistance to salt and drought stress.     

人EC-SOD的克隆及高效表达

将编码人胞外超氧化物歧化酶（EC-SOD）成熟肽的cDNA插入含T7启动子的质粒pET-28a( )中构建表达质粒pET-EC-SOD，表达菌株用1mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导表达3h-5h后，产生较多的重组人EC-SOD，并形成包含体。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表明，表达的重组蛋白占菌体可溶性蛋白质的26%以上。经纯化和复性后的EC-SOD比活为每毫克纯化酶蛋白1200U。将EC-SOD转染粉纹夜蛾Tn-5Bl-4细胞，经扩增后在细胞内进行表达。SOS-PAGE分析结果表明，粉纹夜蛾细胞中表达一相对分子质量约为28ku的特异蛋白质带，Western blot分析表明，该特异条带即为EC-SOD蛋白，连苯三酚自氧化法测得表达产物比活为每毫克细胞裂解物260U。     

温州盘菜贮藏期间生理生化变化的研究

研究了温州盘菜贮藏期间含水量、电导率、丙二醛含量的变化及超氧化物歧化酶活性的变化 ,并应用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳技术对不同储藏期温州盘菜的超氧化物歧化酶同工酶进行了研究。结果表明 :随着贮藏期的延长 ,温州盘菜的含水量下降 ,盘菜块根浸泡液的相对电导率增大 ,丙二醛含量增加 ,超氧化物歧化酶的活性降低 ,同时超氧化物歧化酶同工酶谱带也有消失现象     

葛仙米中SOD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用PCR技术从葛仙米（Nostoc sphaeroides）总DNA中克隆了一段基因序列,该序列与基因库中已公布的编码普通念珠藻（Nostoc commnue）超氧化物歧化酶的氨基酸序列同源性为98％,将该基因插入含T7启动子的质粒pET-32a（＋）中构建表达质粒pET-sod,然后将该表达质粒转入大肠杆菌BL21中进行蛋白表达,表达菌株用lmmol／L1PTG诱导表达数小时后,产生较多重组的蛋白,且该蛋白以可溶性蛋白形式存在,SDS-PAGE分析表明：在相对分子量约为22kd的位置有一条明显蛋白质带,将诱导表达后的蛋白通过亲和层析的方法进行蛋白纯化;NBT光还原法测定表达产物的比活力,每毫克纯化蛋白约为2550U。     

猪血超氧化物岐化酶的研究(Ⅰ) 猪血超氧化物岐化酶分子量的测定及稳定性的研究

猪血SOD是铜锌酶,分子量31600,对温度敏感,PH7.6～9.0稳定,PH6.0以下,PH12.0以上不稳定。具较强的抗胃蛋白酶和胰蛋白酶水解能力。     

大豆、决明和玉米种子超氧化物歧化酶的同工酶分析

本采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析了大豆、决明和玉米种子超氧化物歧化酶的同工酶谱的种类和活性，结果表明：（1）大豆种子超氧化物歧化酶（SOD）同工酶谱带有7条，玉米和决明各有5条，并且大豆和决明有3条酶带的Rf值（0.33、0.55、0.80）值相同；（2）每种植物种子都含有自己特有的SOD；（3）SOD具有明显的种属特异性、植物鉴定中有参考价值。     

两类微生物SOD的比较研究

报道了酵母ＳＯＤ工程菌ＺＨ－１／ｐＳＨ１比耐高温细菌Ｂ．Ｓ２１１－１５的抗Ｈ２Ｏ２水平高，其单位体积培养液和酵得率约为细菌的二倍，但单位细胞酶的含量比细菌低，高温细菌的ＳＯＤ热稳定性和存放稳定比酵母工程菌好，二者在ｐＨ４－１０范围内都很稳定，但对蛋白的耐受性差异很大，其中酵母ＳＯＤ工程勤务产好。     

大蒜SOD的分离纯化及其低温胁迫下的酶活性

在低温条件下用CaCl₂浸种处理蒜瓣，通过“热击法”、“等电点法”、“丙酮分级沉淀法”的串联使用分离纯化SOD，并运用邻苯三酚的自氧化法测SOD的酶活性，研究钙对低温条件下大蒜SOD酶活性的影响.结果表明：上述3种方法串联能够有效地纯化超氧化物歧化酶，且其纯化程度比使用单一方法高.在低温胁迫条件下，钙离子浸种处理过的大蒜SOD酶活性下降的程度较未经处理的轻.说明钙离子对低温胁迫条件下的大蒜SOD酶活性有一定的保护作用，能够提高其抗冷性.     

转人Cu,Zn-SOD基因马铃薯的研究

采用RT—PCR技术从人肝总RNA中分离扩增了490bp的人铜锌超氧化物歧化酶(hCM，Zn—SOD)基因的cDNA序列，进行了序列测定，结果和文献报道的一致；构建了CaMv35S启动子驱动hCu，Zn—SOD基因的植物表达载体PBICuSOD；用三亲交配法将重组质粒PBICuSOD转化到农杆菌LBA4404，转化马铃薯得到转基因植株。PCR和Southern—blot分析证明，hCu，Zn—SOD基因巳整合到马铃薯基因组中。Western blot分析表明，hCu，Zn—SOD基因在转基因马铃薯植株中得到表达。用NBT光还原法测定转基因马铃薯植株中的SOD酶活力，叶的总酶活为1066．6U／g(湿重，下同)，块茎的总酶活为10llU／g。