NC膜富集法、实时荧光PCR法、培养法检测志贺菌的比较研究

观察、比较硝酸纤维素膜富集法、实时荧光PCR法及传统培养法对志贺菌阳性检出率的不同.对137例临床样本分别采用硝酸纤维素膜富集法、实时荧光PCR法、传统培养法进行检测.3种方法检测结果阳性率分别为13.14%、20.44%、8.03%.硝酸纤维素膜富集法是在培养法基础上进行了一些改进,采用"先分离再培养"的方法,与传统培养法比较,检测结果阳性率明显提高,两者比较,差异有统计学意义(P0.05).另一方面,硝酸纤维素膜富集法耗时较短,特异性高,成本低并且无需特殊设备,特别适宜基层检测单位和健康筛查单位使用.实时荧光PCR法检测结果阳性率最高,但同时假阳性率也最高.传统培养法检测结果阳性率最低,但现今在临床工作中仍以传统培养法作为志贺菌检测的标准方法.研究结果显示,硝酸纤维素膜富集法检测志贺菌,明显提高了检测结果的阳性率,且特异性高、耗时较短,具有很好的临床应用前景.     

PCR技术检测致病真菌感染的研究

目的建立适合临床实践的常见致病真菌的PCR检测方法。方法根据真菌的保守基因设计不同的特异性引物,对152例临床标本进行PCR检测,与传统检验方法的结果进行比较。结果真菌培养阳性46例;真菌PCR检测阳性57例,分别为白色念珠菌感染30份、烟曲霉感染9份、黄曲菌感染8份,其他真菌感染10份。两种方法比较,检出率差异无统计学意义。结论 PCR法可快速、特异、灵敏地检测致病真菌,适合临床实验室的快速诊断。     

血清中支原体污染的检测及其方法分析

血清作为疫苗生产中的主要原辅材料,很容易被支原体污染.为了更好、更准确地检测血清中支原体的污染情况,本试验对血清中支原体污染的检测及方法进行了分析.分别用直接培养法、DNA荧光染色法和PCR法对17批新生牛血清样品进行了支原体检测.直接培养法检测结果有15批支原体阴性,2批阳性,阳性率为11.8%;DNA荧光染色法和PCR法检测结果均为14批支原体阴性,3批阳性,阳性率为17.6%.以上结果表明培养法与DNA荧光染色法或PCR法之间存在明显差异.对血清支原体进行检测时,应用直接培养法和DNA荧光染色法或PCR法同时联合应用,以提高对血清中支原体检测的准确性.     

人博卡病毒微滴数字PCR定量方法的建立

为准确、快速地从临床鼻咽拭子样本中筛选出人博卡病毒(HBoV)感染的阳性样本,以HBoV-sh9基因的保守区序列为检测靶标合成引物和探针,建立了微滴数字PCR(dd PCR)检测HBoV的方法.结果表明:HBoV dd PCR方法具有较高的特异性,在(0.5~6.8)×10~3copies/μL HBoV DNA浓度范围内,具有良好的线性和精确度,定量限低至0.5 copies/μL.182份临床样本检测结果显示:HBoV感染的阳性率为8.24%.此建立的HBoV dd PCR方法在定量限、准确性和重复性上较常规PCR优势明显,不受样品基质和扩增效率的影响.     

聚合酶链反应检测幽门螺杆菌感染的临床价值

目的:应用聚合酶链反应(PCR)方法检查幽门螺杆菌(Hp)以探讨在临床诊断中的价值.方法:44例上消化道症状进行胃镜检查者取胃粘膜组织44份.唾液38份.结果:其阳性率分别为72.73%和28.28%.胃粘膜尿素酶试验阳性率为52.27%.胃粘膜组织PCR检测阳性和尿素酶阳性有显著性差异(P<0.01).取唾液的38例患者、其中胃粘膜阳性30例中有11例唾液Hp阳性.结论:用PCR检查临床标本中的Hp有高度敏感性和特异性.同时也证实口腔中确实存在Hp.     

从业人员预防性健康体检沙门/志贺氏菌检验PCR方法快速筛查的应用

采用实时荧光定量PCR方法快速检测食品等从业人员肠道致病菌,并与培养法进行比较,了解实时荧光定量PCR方法的应用价值.方法:随机采集96 752份从业人员肛拭子标本分别进行实时荧光定量PCR方法和培养法检测沙门氏菌和志贺氏菌,比较两种方法对两种肠道菌的检出率.结果:96 752份标本中,实时荧光定量PCR方法共检测出91份标本沙门氏菌阳性,其中83份分离阳性,41份志贺氏菌阳性,其中30份分离阳性.而传统培养法检测未检出.结论:实时荧光定量PCR方法可以很好的应用在从业人员肠道致病菌的筛查,并且可以提高从业人员肠道致病菌的检出率和准确性,节省劳动力,降低工作人员的工作强度.     

仙台病毒荧光定量 PCR 检测方法的建立及初步应用

目的 建立敏感特异的仙台病毒( SeV)荧光定量 PCR 检测方法,并初步应用。 方法 将不同株 SeV 病毒序 列进行比对,选择对保守区域设计合成引物。 人工合成 SeV 基因组 12 181 ~ 12 480 DNA 序列,转入质粒中,作为仙 台病毒质粒标准品,建立 SYBR 染料法荧光定量 PCR 方法,并对样本进行 SeV 测定。 结果 建立了特异性的检测 SeV 的 SYBR 荧光定量 PCR 方法,该方法对 SeV 最低检测限度为 10 copies / μL。 将所建立的实时荧光定量 PCR 方 法用于 40 只 SPF 小鼠和 58 只裸鼹鼠的肺组织样本的检测,检测结果为仙台病毒核酸阴性;检测 4 只成年屏障环 境饲养黄鼠肺组织和 5 只清洁级小鼠肺组织,检测结果为仙台病毒核酸阳性率 100% 。 结论 该研究建立的 SYBR Green 染料法荧光定量 PCR 方法能特异敏感地检测仙台病毒。     

牛疱疹病毒Ⅰ型PCR检测方法的建立及在牛源样本检测中的应用

目的建立牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)PCR检测方法,用于临床牛样本中BHV-1的检测。方法根据已发表的BHV-1 gB基因保守区域设计合成引物,建立BHV-1 PCR方法,对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行方法学评价,并用建立的PCR方法检测64份牛临床样本。结果建立的BHV-1 PCR检测方法与牛副流感病毒Ⅲ型(BPIV3)、猪伪狂犬病毒(PRV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、犬疱疹病毒(CHV)、均无交叉反应;可检测病毒最小滴度为5lg TCID50/mL,对应的DNA模板浓度为5.26×10~2拷贝/μL;BHV-1 DNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带。应用建立的方法检测145份牛源组织样本,BHV-1核酸阳性率为15.2%。结论建立的BHV-1PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,适合于临床牛样本BHV-1的感染的检测。     

三重PCR方法对猪、鸡源细菌中四环素类药物耐药基因的检测

针对GenBank上已公开的四环素类耐药基因tetA、tetC、tetM序列进行比对分析,设计特异性扩增引物,建立三重PCR法快速检测方法.结果表明,单重PCR和三重PCR的符合率为100%.应用本检测方法和传统药敏试验方法(药敏纸片法)对412猪、鸡源细菌的四环素耐药基因和表型同时进行检测.PCR检测实验结果显示,在412株待检细菌中,tetA、tetC、tetM的检出率分别为47.57%,38.35%和34.95%.药敏实验结果表明,待测细菌对四环素的耐药率最高,为95%;对多西环素的耐药率次之,为92%;对米诺环素耐药率相对最低,为84%.比较两种方法,发现其检出结果的符合率为88%.说明两种方法具有较高的一致性.本研究建立了一种猪、鸡源细菌四环素类药物耐药基因三重PCR检测方法,并进行了初步应用.     

反向线性探针杂交技术检测慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药研究

目的:建立起简单、快速、灵敏、准确的慢性乙型肝炎病毒拉米夫定耐药位点的反向线性探针(reverse line probe,RLP)检测方法.方法:根据HBV野生及耐药基因序列设计通用探针、3'、5'对称加有poly-C的特异性探针和5'标记生物素的扩增引物.将探针线性固定在硝酸纤维膜上,使HBV PCR扩增产物与探针进行杂交.通过优化杂交条件,建立RLP检测方法.利用该方法对重庆地区86个慢性乙肝病人进行检测,同时与直接测序结果比较.结果:半巢式PCR可对103拷贝/ml的血清样本进行有效特异扩增,新建的RLP检测方法可对PCR扩增产物在1 ng/ml以上,或血清样本中突变型DNA占野生型DNA比例为5％以上的均可有效检测,86例临床的检测灵敏度为100％,野生型和耐药型的检测准确性分别为98.09％(103/105)、100％ (43/43),与直接测序法比,RLP检测野生与耐药混合型准确性更好.结论:反向线性探针杂交检测方法检测HBV拉米夫定耐药位点方便、灵敏、准确,是HBV拉米夫定治疗有效的监控工具,该方法适合临床应用.     

用RT-PCR方法检测血液及尿液中肾综合征出血热病毒

目的应用逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)对临床诊断或拟诊为肾综合征出血热(HFRS)的患者的血液及尿液标本进行检测.方法对临床拟诊断或拟诊HFRS患者198名(Ⅰ型为147例,Ⅱ型为51例)的血清、尿液标本进行RT-PCR方法抗体检测,并设置对照血清.结果紫外灯下,165例在237 bp处出现橙黄色带,阳性率为83.3%,对尿液进行检测,其结果均为阳性.标准病毒株、阳性对照血清为阳性.阴性对照、健康人血清、尿液标本均为阴性;免疫荧光抗体检测,血清抗体阳性173例,阳性率为87.2%.尿液阳性仅为116例,阳性率为58.4%.结论用RT-PCR方法检测HFRSV具有灵敏度高、特异性好、快速等优点,方法简便,适于临床应用.     

3种松材线虫分子检测技术的比较分析

分别用特异性引物法、ITS-PCR-RFLP法和实时荧光PCR法对松材线虫进行了检测,通过检测时间、检测精度和操作情况等方面的比较得出:特异性引物PCR法操作简便、成本低,是目前的常规检测技术;ITS-PCR-PFLP法可以鉴定到小种,相比特异性引物法更具说服力,但耗时较多,适用于线虫种群分化研究和种类鉴定,而不适合作为一种快速检测技术;实时荧光PCR法耗时短,灵敏度高,操作简便安全,只是仪器设备要求较高,适合松材线虫的口岸检验检疫工作.     

多重PCR检测病死鸡中沙门氏菌方法的研究

为了建立能够同时检测病死鸡样品中的沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多重PCR 方法.采用煮沸法提取 DNA 做为模板,选择分别针对沙门氏菌属、鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的特异性基因(invA、fliC、sdfⅠ)设计引物,优化反应体系和反应参数,建立多重PCR检测方法.应用该方法对国内17家鸡场369份病死鸡样品进行沙门氏菌的检测,检测结果与传统细菌培养法的结果进行比较.结果表明,优化过的多重 PCR 可同时对沙门氏菌种、属进行鉴定,灵敏度为4.6×102 CFU/mL;多重 PCR 方法共检测出沙门氏菌34株,其中鸡白痢沙门氏菌21株、肠炎沙门氏菌5株,与传统细菌培养法检测结果的符合率分别为91.2%、90.5%和80.0%.     

不同微生物测定方法对阴道内念珠菌感染检验的效果比较分析

探究不同测定方法对阴道内念珠菌感染的检出效果。以阴道炎患者120例作为研究对象,开始时间为2018年6月,结束时间为2019年5月,均在入院后采集阴道分泌物标本,并分别接受凝集法以及培养法2种不同的微生物检验方式,统计阳性检出率,并进行对比分析。凝集法阳性检出率为80.0%(96/120),培养法的阳性检出率为65.0%(78/120);经比较,凝集法的阳性检出率明显高于培养法,P0.05。在对阴道内念珠菌感染的微生物测定方法中,相较于培养法,凝集法具有着更高、更快,更便捷的阳性检出率,因此,在对阴道念珠菌感染的微生物检测方法中,凝集法值得在临床中推广应用。     

应用改良导流杂交法检测103例妇女HPV基因型

目的:探讨改良导流杂交法在宫颈病变患者的人类乳头状瘤病毒(HPV)基因型检测中的应用价值.方法:应用改良导流杂交法检测103例宫颈癌筛查患者(宫颈癌组29 例,炎症组33例和正常组41例)的宫颈细胞21种HPV基因型, 并对其中的宫颈癌组同时采用杂交捕获二代系统(HC-II)行13种高危基因型HPV检测.比较两种方法检测不同HPV基因型的阳性率差异.计算用改良导流杂交法检测的各组患者不同HPV基因型的阳性率.结果:在103例研究对象中,改良导流杂交法HPV基因型检测的阳性率达46.6%, 宫颈癌组、炎症组及正常组的阳性率分别为96.6%、39.4%和17.1%, 各组间差别有显著性差异(P＜0.005); 宫颈癌患者前10位的基因型是HPV-16(16.5%)、HPV-58(7.8%)、HPV-52(7.8%)、HPV-18(5.8%)、HPV-31(5.8%)、HPV-6(4.9%)、CP8304(4.9%)、HPV-39(3.9%)、HPV-68(3.9%)和HPV-11(3.9%), 而且存在HPV双重以上的感染.与HC-II检测结果的符合率达96.6%(28/29).结论:改良导流杂交法与HC-II检测结果无差异性,可用于检测宫颈病变患者的HPV基因型.本组宫颈癌患者最常见的5种HPV基因型可能是HPV-16、HPV-58、HPV-52、HPV-18和HPV-31, 且存在更多的HPV双重以上的感染.     

连接酶检测反应技术应用于乙型肝炎病毒拉米夫定耐药和阿德福韦耐药突变的研究

目的:研究高温连接酶检测反应技术(LDR)技术检测乙肝病毒拉米夫定耐药和阿德福韦耐药突变的可行性.方法:应用LDR技术和多聚酶链式反应(PCR)技术,在乙肝病毒基因相关区域设计引物和探针检测突变位点.结果:该方法能很好的区分野生型质粒和突变型质粒;90例临床样本的测序结果与LDR检测结果基本一致.结论:LDR技术可以应用于临床乙肝病毒样本的拉米夫定耐药和阿德福韦耐药的检测.     

图像边缘检测中的改进算法

针对传统的蚁群边缘检测算法存在耗时长和易受噪声影响的缺点,提出了一种改进的蚁群边缘检测算法.该算法对蚂蚁路径选择中的启发式信息值的计算方法进行改进,使其计算基于邻域中节点的梯度,能更好地引导蚂蚁向边缘节点进行移动.通过仿真实验表明:该算法与传统的蚁群算法相比,能够减少耗时、抑制噪声及准确快速地检测出图像边缘.     

芯片法和培养法对结核分枝杆菌耐药检测的对比研究

选取临床疑似结核病患者聚合酶链反应(PCR)检测阳性标本,分别用芯片法和培养法检测其耐药性以探讨这2种方法对结核分枝杆菌耐药检出率的差异.实验中共选取了228例标本,以异烟肼和利福平为研究对象,利用芯片法和培养法分别统计了样本对这两种药物的耐药性.研究结果表明芯片法和培养法对异烟肼耐药检出率存在统计学差异(P0.05),对利福平耐药检出率没有统计学差异(P0.05).与培养法相比,芯片法有效缩短了对利福平耐药检出率的检测时间,具有快速简便等优点,但对异烟肼耐药检出率存在一定差异.     

婴儿肝炎综合征患儿CMV的动态监测及临床意义

目的:探讨应用实时荧光定量PCR法(Real Time Quantitative PCR)检测婴儿尿液中CMV-DNA含量在诊断和动态监测婴儿CMV感染中的意义。方法:应用PE5700全自动PCR扩增分析仪检测80例婴肝患儿和40例对照组患儿尿标本中HCMV-DNA的拷贝数及HCMV-IgM,并对其中48例CMV肝炎患儿在出院半年和一年后进行尿标本HCMV-DNA含量和肝功的动态监测。结果80例患儿尿标本HCMV-DNA阳性率为63.8%(51/80),40例正常对照婴儿尿标本中HCMV-DNA阳性率为10%(4/40),统计学分析表明:婴肝患儿组HCMV-DNA阳性率明显高于对照组,差异有显著性(=31.032,P<0.01);80例患儿血HCMV-IgM阳性率为46.25%(37/80),40例正常对照儿童HCMV-IgM阳性率为2.5%(1/40),统计学分析表明婴肝患儿组血HCMV-IgM阳性率明显高于对照组,差异有显著性(=23.588,P<0.01);通过对出院后的48例CMV感染的婴肝患儿进行一年的随访,发现部分患儿肝功恢复正常后,HCMV不能完全转阴,并有复发的可能性,所以对CMV感染婴肝患儿...     

血清降钙素原检测联合微生物培养的临床应用价值探讨

目的探究血清降钙素原检测联合微生物培养的临床应用价值。方法将2016年1月—2017年3月于我院进行血清降钙素原检的870例患者纳入研究,其中接受过血培养检测和(或)细菌培养的患者451例,采集其临床资料及检测结果进行统计分析。结果此次试验共870例患者接受PCT检测,阳性率为40.00%(348/870),共350例患者接受血培养检测,阳性率为20.29%,远低于PCT检测。在PCT检测的各项参数上,其敏感度为77.46%,特异度为55.20%,阳性预测值为30.56%(55/180),阴性预测值为90.59%(154/170);共71例血培养阳性患者,PCT阳性率为77.46%;共257例细菌培养阳性患者,PCT阳性率为52.92%;共84例真菌培养阳性患者,PCT阳性率为48.81%。结论血清降钙素原检测具有敏感度、特异度高的优点,操作便捷快速,可用作常规实验室检测。