斑马鱼HAS2基因的克隆、抗体制备及分析

HAS2是斑马鱼心脏发育的一个标志基因,为了利用斑马鱼动物模型进一步研究HAS2基因在心脏发育中的功能,采用生物信息学结合RT-PCR的方法获得了斑马鱼HAS2基因的片段.将所得的片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并将重组质粒(pGEX-4T-1-HAS2)转化大肠杆菌(E.coli)BL21,IPTG诱导表达GST-HAS2融合蛋白;通过尿素洗涤沉淀蛋白并切胶回收纯化融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western blot检测抗体活性.生物信息学分析结果表明:斑马鱼HAS2基因的开放阅读框含有1658 bp,编码552个氨基酸;SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导表达的融合蛋白相对分子质量约为4.5×104;Western blotting分析表明,制备的抗体具有良好的特异性.     

CCoAOMT基因反义表达载体的构建及转化苎麻的研究

采用RT-PCR的方法,克隆烟草木质素合成关键酶咖啡酰甲基转移酶(CCoAOMT)基因并测序．构建CCoAOMT基因反义表达载体,通过农杆菌介导法对苎麻进行遗传转化,得到转基因植株．采用PCR方法对其进行分子检测．为利用基因工程技术,创造适合我国国情的环保型低木质素苎麻转基因新品种奠定了基础。     

化学合成虎纹捕鸟蛛毒珠—Ⅱ基因的克隆

报道了全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素－Ⅱ基因,在克隆载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中的克隆。但ＨＷＴＸ－Ⅱ基因在表达载体ｐＧＥＸ－ＫＴ中几乎无表达,根据以前成功地表达全化学合成虎纹捕鸟蛛毒素－Ⅰ基因的实验结果,对在同一表达系统所构建的ＨＷＴＸ－Ⅰ与ＨＷＴＸ－Ⅱ基因的表达产物进行比较,认为ＨＷＴＸ－Ⅰ与ＨＷＴＸ－Ⅱ在原核表达系统的表达行为上的差异有助于我们进一步探讨ＨＷＴＸ－Ⅱ的活性。     

草鱼(Ctenopharyngodon idella)组织蛋白酶L基因克隆及表达特性分析

为探究组织蛋白酶L(Cathepsin L,CtsL)是否在草鱼(Ctenopharyngodon idella)体内发挥免疫功能,根据已构建的草鱼肌肉转录组数据库中unigene序列,采用RACE技术首次克隆得到全长为1 496 bp的草鱼组织蛋白酶L基因(CiCtsL)cDNA序列。序列分析和同源建模显示该基因编码的蛋白具备组织蛋白酶前体抑制结构域I29和木瓜蛋白酶家族半胱氨酸蛋白酶Pept_C1结构域。系统进化分析表明,CiCtsL与斑马鱼CtsL聚为一支。CiCtsL mRNA在7个组织中均有表达,其中肝脏中的相对表达水平最高。感染GCRV后,CiCtsL在各组织中的表达量显著上调,呈现先上升后下降的趋势。研究表明CiCtsL参与了草鱼抵抗GCRV的免疫应答反应,可在草鱼先天免疫调控中发挥重要作用。     

Pericardin蛋白的表达纯化以及多克隆抗体的制备

Pericardin 基因是果蝇心脏发育的标记基因,在果蝇心脏发育过程中起着重要的作用.从果蝇体内提取出总RNA,反转录得到果蝇的cDNA,将其作为模板.通过生物信息学分析,选择Pericardin 基因抗原亲水区,选取特异性高的片段.将PCR片段克隆到原核表达pET28a(+)载体上,转入E.coli后通过IPTG(Isopropyl β-D-thiogal actoside)诱导表达His融合蛋白,蛋白经分离纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.经Western Blot 检测抗体的效价和特异性.结果显示,获得了Pericardin原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Pericardin 多克隆抗体,为Pericardin 功能的进一步研究奠定了基础.     

斑马鱼心脏标记基因pitx2的多克隆抗体的制备

pitx2基因是一类bieoid相关的同源异型框因子成员,介导心脏左右不对称发育和内脏器官的偏侧化.pitx2基因位于Nodal信号途径的下游,直接由Nodal信号分子控制.用PCR技术扩增斑马鱼pitx2基因的部分编码区,并将其插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,经过酶切和测序鉴定后,将重组质粒(pGEX-4T-1-pitx2)转入B121感受态细胞,通过IPTG诱导表达融合蛋白.用GST珠亲和纯化,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体.获得了pitx2原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗pitx2多克隆抗体.提取斑马鱼不同器官和组织蛋白,用自制的多克隆抗体检测pitx2基因在斑马鱼中的表达情况,发现pitx2基因特异性地在心脏、脑、肌肉、小肠和肝脏表达,尤其在心脏中有很高的表达,表明制备的抗体特异性非常好.     

TNFAIP1基因通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡

将TNFAIP1基因成功克隆到真核表达载体pCMV—Myc中,研究TNFAIP1基因诱导细胞凋亡的机制．Hochest33258和流式细胞计数实验发现,过表达TNFAIP1能够诱导HeLa细胞凋亡．通过对凋亡相关基因的研究,发现过表达TNFAIP1能够抑制Bcl-2的mRNA水平和蛋白表达,推测TNFAIP1基因可能通过抑制Bcl-2的表达诱导细胞凋亡．     

金鱼胰岛素样生长因子2基因克隆与组织表达

采用PCR方法,扩增并克隆了金鱼的IGF2基因.序列分析结果显示:金鱼的IGF2基因共包括有4个外显子和3个内含子,开放阅读框长606 bp,编码201个氨基酸;编码序列与斑马鱼有85%一致性;蛋白质序列与斑马鱼的有80.9%的一致性.RT-PCR证明金鱼IGF2基因在鳃、心脏、肾、肌肉、尾鳍、雌雄性腺等组织中均有表达.     

果蝇Mef2基因多克隆抗体的制备及检测

为了在果蝇模型中进一步研究Mef2基因的功能,制备了Mef2多克隆抗体.以果蝇cDNA文库为模板,PCR扩增出亲水性和特异性均好的果蝇Mef2基因片段,将其克隆入pET-28a原核表达载体,然后将重组质粒转化入大肠杆菌菌株Rossetea,用IPTG诱导表达融合蛋白.融合蛋白先经Ni-IDA凝胶柱纯化,再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,然后用不同浓度的抗体分别进行Western-blot实验检测抗体效价.所得结果显示获得了较高效价的果蝇Mef2多克隆抗体.     

ChsA启动子驱动的IPT基因植物表达载体的构建

为研究异戊烯腺苷类细胞分裂素与花衰老进程的相关性,本研究通过PCR方法从矮牵牛中克隆到花瓣特异性表达的矮牵牛查尔酮合成酶基因A（ChsA）的启动子PchsA,并以其取代植物表达载体pBI121中的组成型启动子CaMV35S,然后将IPT基因插入到PchsA启动子下游,测序结果显示花瓣特异性启动子驱动的IPT植物表达载体构建成功.     

《化学与环境》网络课程的设计与制作

以Dreamweaver、Flash、Photoshop为主要工具,开发了《化学与环境》网络课程。该网络课程采用模块化设计和有效的超文本结构,具有灵活自主性和可扩展性,能够不断适应教学内容、学科知识的变化,满足教学需要。直观友好的交互界面、简洁清晰的导航系统、多媒体技术的综合应用有利于调动学生的学习积极性,加深对教学难点的理解,实现最佳的学习效果。     

生物入侵种的危害和防治

生物入侵给人类和社会造成非常严重的灾害，同时也破坏生态平衡。因此对生物入侵要引起高度重视和警觉并且严加防范、防治、抑制和根制，以免外来种生物种群的发展和扩散，减轻或减少其所引起的危害。     

激光光源的稳恒控制分析与设计

本文设计了一种激光光源系统，其能为半导体激光器提供高稳定度的驱动电流，恒温控制(ATC)和自动光功率控制(APC)，提高了半导体激光器的使用寿命和输出波长的单一性．并给出了驱动电流的稳定度实验测量。     

诗词教育与语文能力的培养

诗词教育是对传统诗教的新的超越。历代诗词吸纳、熔铸汉语言学的精华，是学习汉语和培养语能力乃至不断提高语修养的最好的教材。造就现代化人，建设语生态明正是诗词教育的根本目的和意义所在。     

“高等数学”考试试卷的统计分析

利用教育统计与测量的方法,对《高等数学》试卷进行定量化分析,并且用难度、区分度、(?)度、信度、效度等定量化指标对97级第一学期试卷进行统计分析.分析表明;本次考试基本上反映了学生的实际学习情况.     

多功能多制式数字彩色电视接收机的设计与研制

本文提出了本机设计的方框图，并对视频，音频和同步偏转信号的数字处理，以及画中画，图文电视，红外遥控和上述各电路的微机控制等的工作原理作了简要叙述，最后报告了样机收，测情况。     

地方高校科技开发工作的主要障碍及其对策

目前地方高校科技开发工作存在一些障碍,制约科技开发优势的发挥。应转变观念,制定合理的激励政策,走产、学、研之路,多方筹集资金;启动学科建设等方面促进地方高校科技开发工作的开展。     

论高校学报的地位和作用

笔者从宏观和微观两个方面,简要地分析了高校学报的地位,以及学报对高校的教学、科研工作乃至整个社会所产生的重要作用.同时指出了办好学报必须具备的一些基本条件.     

果蔬生理生化理论及实验教学创新研究

分子生物学实验技术作为生命科学研究的基本手段,是每个与生物学相关专业的研究生必须掌握的实验技术.实验教学对于培养学生的实践能力和创新能力具有不可替代的作用.果蔬生理生化理论及实验技术课程的开设,可以提高研究生的动手能力,为开展其后续的研究项目和论文写作奠定理论和实验基础.因此,对该课程进行了一系列的创新尝试,取得了很好的效果,提出并制定了适应新形势下的教学内容和模式.主要表现在2个方面:实验模块创新和课程建设创新.通过这些创新教学,使课程教学效果突出,学生创新能力进一步提高,从而促进教学质量迈进了新的台阶.     

照片档案损坏的理化因素及防护方法

阐述了照片档案损坏的理化因素，并采取相应的防护措施，以最大限度地延长照片档案的使用寿命．