三种新鲜长骨DNA提取方法的比较

目的：研究对新鲜长骨DNA的快速高效提取.方法：采用Chelex-100法、核酸提取仪法、改良法提取肋软骨和新鲜长骨的DNA,对检测所得STR数据进行统计分析.结果：改良法对肋软骨和新鲜长骨样本的检出率均是100％.结论：改良法能快速高效地获得新鲜长骨DNA.     

光滑载体上人体脱落细胞的DNA检验

目的：对运用EZ1磁珠法和QIAquick@Spin Columns硅膜法提取光滑载体上人体脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为优化提取方法提供参考.方法：选取案件受理检材33例,应用二步棉签擦拭法收集各类光滑载体上的微量脱落细胞DNA,采用EZ1磁珠法和QIAquick@Spin Columns硅膜法提取纯化后,进行常规STR检测.结果：光滑载体上人体脱落细胞DNA材采用2种方法提取DNA,所得结果有较大差异;采用QIAquick@Spin Columns硅膜法提取的效果明显优于EZ1磁珠法.结论：相对而言,QIAquick@Spin Columns硅膜法更具优势.     

PCR-RFLP中Chelex-100制备DNA模板的方法建立及其条件优化

目的:建立一种快速、可靠、经济的DNA纯化技术用于分子流行病学调查及群体遗传学的研究.方法:根据MMP3基因外显子2中rs679620的SNP区域(-Lys45Glu-)设计引物,采用Chelex-100法从微量全血中提取人基因组DNA,利用PCR-RFLP对其进行检测,观察基因分型结果.结果表明:取10μL全血,加入200μL 5%Chehx-100溶液,56℃水浴保温30 min后,100℃水浴8 min,离心取上清为最佳用于PCR的DNA模板提取条件.经PCR扩增及酶切验证,其DNA条带特异、清晰,适用于基因分型.结论:提取人基因组DNA的Chelex-100法所需血样微量、操作简单,快速、可靠、经济,特别适合于大量样本的DNA提取,可用于人群分子流行病学调查及群体遗传学的研究.     

用Chelex-100方法从牦牛乳中提取总DNA扩增线粒体DNA序列

旨在建立一种从牦牛乳中快速提取总DNA并扩增线粒体基因的方法.实验以20头麦洼牦牛的乳为试验材料,用Chelex-100方法提取总DNA,扩增线粒体DNA(mtDNA)的D-loop区和细胞色素b基因(Cytb).结果显示,Chelex-100法能利用20μL全乳或脱脂乳快速制备总DNA,用于mtDNA的D-loop区和Cytb基因的PCR扩增,条带清晰并能直接测序.该方法的PCR扩增一般需要45个循环,扩增效果存在一定的个体差异,且全乳优于脱脂乳,半奶牦牛乳优于全奶牦牛乳.建立的方法既可使用全乳,也可采用脱脂乳大规模提取总DNA,并扩增线粒体基因用于后续研究.     

解胶剂对脱落细胞粘取器DNA检验的影响

目的:探讨折叠粘膜对粘膜DNA检验、解胶剂对折叠状粘膜的DNA检验的影响。方法:使用常规Chelex100法,分别提取伸展状、折叠状粘膜、加入解胶剂的折叠状粘膜。结果:组间两两比较,伸展组与折叠组、H解胶剂组与折叠组、D解胶剂组之间有显著差异;而从组间的平均峰面积看,H解胶剂组伸展组折叠组。结论:过分折叠对粘取器粘膜的DNA检验不利,溶解效果较强的解胶剂能更充分地释放被粘附的脱落细胞,Chelex100法结合滤膜离心套管,能有效避免无机提取溶液消化粘胶乳化的影响。     

Minifiler基因座对陈旧骨检测效果及在南阳回族人群中的多态性分布

目的:探讨Minifiler 9个基因座对陈旧骨骼中的检测与分型效果,并调查此9个基因座在南阳回族人群中的多态性分布。方法:用改良酚-氯仿法提取陈旧骨DNA 10份,Chelex-100法提取南阳回族无关个体DNA 440份,Minifiler试剂盒基因座复合扩增,检测,计算样本基因型分型和基因多态性参数。结果:9个基因座在陈旧骨中的检出率为90%~100%。基因座在南阳回族人群分布范围H值在0.7342~0.8844之间,Pm值在0.0425~0.0953之间,PIC值在0.7100~0.8582之间,DP值在0.8973~0.9736之间,PE值在0.4688~0.7282之间。结论:Minifiler试剂盒9个基因座可作为陈旧骨微量DNA的参考检测基因位点,该基因座尤以FGA、D2S1338、D21S11在南阳回族人群中的基因多态性较好,个体识别率高,在法医实践中具有应用价值。     

激光捕获显微切割结合低体积扩增技术研究

目的:研究激光捕获显微切割技术联合应用低体积扩增技术,建立一套微量混合样本DNA的检验方法。方法:使用PALM系统切割捕获目标细胞,弹射到低体积扩增玻片的反应位点上,消化细胞,提取DNA,使用Identifiler?试剂盒在1.5μL体系中进行PCR扩增。结果:分别捕获10个口腔上皮细胞、20个精子细胞,成功获得16个完整的STR基因座分型谱带。结论:激光捕获显微切割技术联合应用低体积扩增技术适用于法医学中微量混合样本DNA检验。     

用Chelex-100法大规模快速提取牦牛肌肉中基因组DNA

旨在建立快速、大规模提取牦牛(Bos grunniens)肌肉中基因组DNA的方法.试验样品为冰冻保存的九龙牦牛背最长肌(n=10).采用两种取样方法(镊子取样和枪头取样)采集冰冻的肌肉样品,用Chelex-100方法提取其中的基因组DNA,并进行PCR扩增.结果显示,镊子取样和枪头取样提取的基因组DNA,均可用于两个核基因和一个线粒体基因的PCR扩增,但枪头取样简便易行,提取的DNA用PCR扩增细胞色素b,扩增35个循环数的PCR产物可直接测序.表明Chelex-100法可用于快速提取牦牛肌肉中基因组DNA,操作简单,成本低廉,适用于大规模提取组织中的DNA.     

纸张上汗潜指纹粉末显现后粉的量和种类对DNA提取的影响

目的研究金粉、银粉、磁粉显现纸张汗潜指纹后对DNA提取的影响,以及纸张汗潜指纹磁粉显现后粉量对DNA提取的影响,探索对纸张汗潜指纹DNA提取影响最小的粉的种类和粉的量,应用于法庭个体识别和亲权鉴定。方法采用5％ehelex-100提纯纸张上汗潜指纹DNA,Gene Ampsystem9700（ABI公司）进行STR分型复合扩增,3130Genetic Analyzer（ABI公司）进行荧光电泳检验。结果粉末的种类和粉量的多少会影响纸张汗潜指纹STR分型的峰高。结论纸张上汗潜指纹粉末显现后粉的量和种类对DNA提取有影响,对纸张上汗潜指纹STR分型的影响大小不同。     

用克隆技术制备STR等位基因分型标准物的研究

用克隆技术制备D2S1338基因座等位基因分型标准物,首先在人群中筛选出D2S1338基因座的13个等位基因,经聚丙烯酰胺凝胶分离纯化;然后进行PCR扩增,并将纯化后的扩增产物与pGM-T质粒载体连接,转化到DH5α感受态大肠杆菌中;第三,鉴定阳性克隆产物并对重组质粒进行测序,按国际标准对插入的等位基因命名;第四,经扩大培养、提取质粒DNA,以后者为模板制备出等位基因分型标准物。结果表明克隆技术制备方法,能长期、大量、稳定地保存等位基因,同时解决了STR分型标准化的问题。     

中国江苏地区汉人群五个高多态性短串联重复序列(STR)基因座基因频率分布调查

为选择有较好基因频率分布的短串联重复序列遗传标记,对中国江苏地区随机汉族人群的D5S818、D19S253、D12S391、D2S1338和D22S684 5个微卫星基因座进行了基因频率分布调查,并评估它们作为法医遗传标记在中国江苏地区汉族群体中的效能.采用Chelex-100法从中国江苏地区无血缘关系汉族个体的血样本105份中提取DNA,特异引物聚合酶链反应,产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染检测.这5个STR基因座在中国江苏地区汉人群均显具有高度遗传多态性并符合Hardy-Weinberg定律,它们的个人识别率(DP)范围从D5S818的0.892 8到D2S1338的0.952 7,非父排除率(PE)范围从D5S818的0.538 5到D2S1338的0.690 7不等.5个基因座的联合DP值和联合PE分别为0.999 997和0.991 8.在D22S684基因座,首次在汉人群报道的等位基因频率分布与英国Caucasian,Afro-Caribbean和Asian from the Indian 3个人群相比较,卡方检验有显著差异(P《0.005).为常规应用这8个STR遗传标记在中国江苏地区汉人群中进行亲子鉴定和个人识别提供了概率计算依据和群体遗传学数据.     

液基细胞学检查与DNA定量分析进行宫颈癌普查的临床研究

本研究探索用液基细胞学检查、DNA定量分析对南疆宫颈癌高发区维吾尔族妇女进行普查,以提高宫颈癌普查的准确性,同时达到宫颈癌预防和早诊早治的目的。采取南疆喀什地区2572名维吾尔族妇女宫颈脱落细胞进行液基薄层制片,分别进行巴氏染色和DNA染色,对巴氏染色片进行细胞学TBS分级、对DNA染色片进行全自动扫描诊断。对TBS分级ASC-H以上、DNA定量分析可见或可见大量DNA倍体异常细胞,建议进一步做宫颈活检。对C INⅡ及以上病变的敏感性和特异性：液基细胞学检查为64.52%和97.30%;DNA定量分析为90.32%和93.24%;液基细胞学结合DNA定量分析为96.15%和94.91%。在有条件的情况下,DNA定量分析能够明显提高对宫颈癌普查的检出率,且筛查方法的联合运用优于单独方法的使用。     

辽南地区汉族人群Penta E和Penta D基因座的多态性分析

对辽南地区汉族群体的两个短串联重复(Short tandem repeats STR)基因座等位基因频率进行研究，得到辽南地区汉族群体Penta E和Penta D基因座的群体遗传学数据．EDTA抗凝血采自172名无血缘关系的汉族个体，采用Celex-100法抽提DNA，荧光标记PCR扩增，310型全自动测序仪电泳检测．得到了Penta E和Penta D基因座的等位基因频率，Penta E和Penta D基因座等位基因的杂合度分别为0．8846和0．8078；个人识别率分别为0．9782和0．9326．两个STR基因座具有较高的杂合度和个人识别能力，等位基因分布符合Hardy-Weinberg平衡，是理想的遗传标记，可用于法医学个体识别和亲权鉴定。     

淋系白血病中人类疱疹病毒6型的感染情况

目的 :了解淋巴系统白血病患者人类疱疹病毒 - 6型 (HHV - 6)的感染情况。方法 :患者 38例 ,包括急性淋巴细胞白血病 (ALL) 31例、慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 4例、淋巴瘤白血病 (LL) 3例 ,正常对照 38例。取抗凝外周血 ,分离单个核细胞 ,提取DNA ,用巢式PCR方法检测目标DNA。结果 :HHV - 6DNA阳性检出率在全部患者中为 63% ,其中在ALL患者中为 68% ,均明显低于正常对照的阳性检出率 92 % (P <0 .0 5 ) ,另外 ,4例CLL患者有 1例阳性 ,3例LL患者中 2例阳性。结论 :在淋巴系统恶性疾病中HHV - 6的感染率低于正常人群 ,其临床意义有待进一步研究。     

细胞DNA定量分析技术联合TCT在宫颈癌筛查中的应用

目的:探讨细胞DNA定量分析技术和TCT在宫颈癌筛查中的效率及其两者之间的关系。方法:回顾分析2014年5月至2015年6月间用上述两种技术进行宫颈癌筛查的病理资料989例。结果:细胞DNA定量分析技术检测阳性40例(4.0%),疑似病例66例(6.7%);TCT检查阳性10例(1.0%),疑似病例42例(4.2%);两种方法的结果互有交叉。结论:细胞DNA定量分析技术的检出率高于液基细胞学技术的检出率(P<0.05),两者联合应用能够提高宫颈癌的检出率。     

米索前列醇联合宫内节育器推杆在绝经后取器困难中应用的效果

探讨米索前列醇联合宫内节育器推杆在绝经后取器困难中应用的效果。选取2014年2月至2015年4月甘南州卓尼县计划生育服务中心收治的绝经后取器困难患者90例,随机分为对照组和研究组,每组各45例,对照组采用米索前列醇治疗,研究组采用米索前列醇联合宫内节育器推杆治疗,观察对比两组临床应用效果。研究组取器成功率(95.56%)明显优于对照组(75.56%)(P0.05);两组治疗前VAS疼痛评分比较无显著差异(P0.05),治疗后VAS疼痛评分较治疗前有所下降(P0.05),治疗后研究组VAS疼痛评分明显优于对照组(P0.05)。米索前列醇联合宫内节育器推杆在绝经后取器困难中的应用效果显著,可有效缓解其疼痛,有助于节育器的顺利取出,具有良好的临床应用价值。     

毛白杨成熟叶片基因组DNA提取方法的比较研究

比较了4种毛白杨成熟叶片DNA的提取方法,结果表明,SDS法的提取效果优于CTAB法.其中,SDS-II法步骤较少,操作简便,不易造成实验误差,OD260/280值为1.87,提取的DNA片段长度在20kb左右,提取得率为42μg/g,为4种方法中最高.ISSR-PCR实验的效果表明,SDS-II法提取的DNA可以做为ISSR分子标记的模板DNA.     

微量苔藓样品DNA提取实验方案改良

苔藓植物个体微小，为得到一种适于苔藓微量样品使用的DNA提取方案，首先对前人提取植物DNA的方法进行了筛选；其次对所选择的3种适于提取苔藓样品DNA的方法——CTAB法、尿素法和磁珠法进行了改良；最后通过使用上述3种改良方法对牛角藓Cratoneuron filicinum植物样品总DNA进行提取，并比较了提取效果、提取时间和费用.结果显示：3种改良方法均可从2 mg干燥牛角藓材料中提取总DNA并得到阳性PCR结果.其中，改良磁珠法提取的DNA浓度较高，提取过程时间短，但成本高于其他2种方法.改良CTAB法提取的DNA浓度低于磁珠法，且实验耗时长，但DNA纯度较高，且实验成本仅为磁珠法的5%.PCR实验显示改良磁珠法与改良CTAB法的扩增成功率均为100%,而改良尿素法的扩增成功率仅为75%.认为改良磁珠法与改良CTAB法均可作为微量苔藓样品DNA提取的优选方案.     

岩陀DNA提取方法研究

以岩陀植物嫩叶为材料,用不同方法对岩陀叶片DNA进行提取,比较提取的质量差异,寻找适合岩陀叶片总DNA的提取方法,以满足多基原民族药岩陀DNA条形码识别系统构建的研究需要。采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、改良的CTAB法、十二烷基硫酸钠(SDS)法及碱裂解法提取岩陀叶片总DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法及PCR扩增效果检查DNA提取的质量。结果显示四种方法均能从岩陀植物叶片中提取到基因组DNA,改良CTAB法提取的DNA纯度和完整性明显好于其他方法,且采用此法进行PCR扩增获得的目标条带明亮单一,扩增效率达到100%。改良的CTAB法是岩陀叶片总DNA的提取中最为合适的提取方法,能够满足后续DNA条形码的研究需要。     

淋系白血病人类疱疹病毒6型的感染情况

目的：了解淋巴系统白血病患者人类疱疹病毒－6型（HHV－6）的感染情况。方法：患者38例,包括急性淋巴细胞白血病（ALL）31例、慢性淋巴细胞白血（CLL）4例、淋巴瘤白血病（LL）3例,正常对照38例。取抗凝外周血,分离单个核细胞,提取DNA,用巢式PCR方法检测目标DNA。结果：HHV－6DNA阳性检出率在全部患者中为63％,其中在ALL患者中为68％,均明显低于正常对照的阳性检出率92％（P＜0．05）。另外,4例CLL患者有1例阳性,3例LL患者中2例阳性。结论：在淋巴系统恶性疾病中HHV－6的感染率低于正常人群,其临床意义有待进一步研究。