产β-葡萄糖苷酶芽孢杆菌的筛选及水解大豆异黄酮糖苷研究

为获得能高效水解大豆异黄酮糖苷的芽孢杆菌,利用七叶苷平板分离法从动物的新鲜粪便中筛选产β-葡萄糖苷酶的芽孢杆菌菌株,然后对酶活最高的菌株进行种属鉴定和水解大豆异黄酮糖苷的研究.结果显示:筛选到1株酶活力较高的芽孢杆菌R2-2,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);该菌株有较高的糖苷水解能力,黄豆苷水解率最高达到53.65%,染料木苷为48.80%.     

解淀粉芽孢杆菌次生代谢产物的研究进展

解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens在自然界分布广泛,其自身在生长过程中产生多种多样的代谢产物,且具有很好的抑制真菌与细菌的能力。随着人类生活水平的提高,对于天然产物或生物来代替传统的化学制剂的需求也越来越大。因此,目前对解淀粉芽孢杆菌的研究与探索越来越多,本文对解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定、次生代谢产物的类别及活性成分进行了总结,为解淀粉芽孢杆菌的进一步研究提供参考。     

一株抗烟草赤星病解淀粉芽孢杆菌的筛选及鉴定

从土壤中分离出82株细菌,通过平板对峙法初筛和双层平板法复筛,筛选出对烟草赤星病菌有较强拮抗作用的细菌B11菌株,其无菌发酵液对烟草赤星病菌(Alternaria alternata)的抑菌带达到26.55mm.对B11菌株进行生理生化和分子鉴定,结果表明B11菌株生理生化特征与Bacillus amyloliquefaciens最为接近;16SrRNA基因序列分析结果表明该菌株与B.amyloliquefaciens(NR-116022)聚类呈一支,同源性为99%,因此把该菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens).进一步研究表明B11菌株对几种植物病原真菌的生长均有抑制作用.     

解淀粉芽孢杆菌BI_2产抑菌物质的新型种衣剂的研制

将解淀粉芽孢杆菌BI2发酵所产抑菌物质作为新型种衣剂的有效成分与研制的复合型成膜剂溶液混合,制成可抑制黄曲霉孢子萌发的花生种子包衣.结果表明,选用4%,聚乙烯醇(PVA)与1.5%,羧甲基纤维素钠(CMC-Na)以体积比5∶1混合作为种子包衣最佳成膜剂配方,经过包衣后对花生种子的发芽势和发芽率没有显著影响.含有抑菌物质的发酵液冻干粉的p H稳定性和热稳定性均较好.发酵液冻干粉抑制黄曲霉孢子萌发的最小质量浓度为1.92,mg/m L.在与花生种子混合时,发酵液冻干粉在成膜剂中的含量达到4,mg/m L时,黄曲霉完全被抑制.     

2种芽孢杆菌属细菌对洋葱根系遭受铜胁迫的缓解作用

为了探究芽孢杆菌属细菌对洋葱遭受重金属铜胁迫的缓解作用,分别测试解淀粉芽孢杆菌HM618、枯草芽孢杆菌77、解淀粉芽孢杆菌HM618+枯草芽孢杆菌77这3种发酵液作用下,遭受铜胁迫的洋葱根系生长、生理活性以及根尖细胞有丝分裂情况.结果表明,铜胁迫下,洋葱的根长大幅度下降,根系相对电导率和丙二醛含量急剧增加,根尖细胞有丝分裂指数显著降低,畸变率增加.单独添加解淀粉芽孢杆菌发酵液或枯草芽孢杆菌发酵液时,铜胁迫下的洋葱根长增加,相对电导率和丙二醛含量下降,有丝分裂指数升高,畸变率下降,但2种细菌发酵液联合使用时却丝毫不能缓解洋葱遭受的铜胁迫. 2种细菌中,枯草芽孢杆菌对洋葱铜胁迫的缓解效果显著优于解淀粉芽孢杆菌.     

解淀粉芽孢杆菌IMAUB1034抗真菌活性物质的初步研究

对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)IMAUB1034活性物质的理化性质和盆栽实验中对甜瓜疫霉菌引起的病害的防治效果进行研究.结果显示,解淀粉芽孢杆菌发酵液对由甜瓜疫霉菌引起的病害具有一定防病效果,病情指数为40.22,生防效果达到35.9%.另外,其发酵液还能抑制甜瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、灰葡萄孢霉菌(Botrytis cinerea)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜疫霉菌(Phytophthora drechsleri Tucker)、苹果炭疽病菌(Glomerella cingulate)的生长.无菌上清液中的活性物质能耐高温、耐酸碱,在pH,2～10仍然能检测到很高的抑菌活性.但经过酶处理后抑菌活性降低程度不同.     

一株碱性果胶酶高产菌株的筛选与鉴定

对天津盐碱地土壤样品中分离筛选的碱性果胶酶高产菌株进行生理生化及分子生物学鉴定,确定其生物学分类地位.以果胶为底物从土壤中筛选碱性果胶酶生产菌株,对复筛获得的菌株L520进行16SrDNA基因测序和分析,结合Biolog微生物鉴定系统完成L520的菌种鉴定;常规的生理生化反应鉴定进一步阐明该菌株的生理生化特性.菌株L520在LB培养基上培养10 h左右产中生芽孢,能利用葡萄糖、甘露醇、木糖为碳源进行生长,降解淀粉,水解酪蛋白但不水解酪氨酸;16SrDNA(NCBI登陆号FJ906822)结果显示该菌株与枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等有99%的相似性,Biolog鉴定系统中菌株L520培养16～24 h与Bacillus subtis A相关数据为PROB 99%,SIM 0.853,DIST 2.06.该碱性果胶酶高产菌株分类学上属于芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis L520,碱性果胶酶发酵活性达到45 U/mL.     

解淀粉芽孢杆菌ptsGHI基因的敲除及缺陷株生长特性

在解淀粉芽孢杆菌磷酸转移酶系统中,葡萄糖主要是由ptsGHI操纵子编码的酶EI、HPr、EIIGlc转运入细胞.文中运用PCR技术,扩增出ptsG和ptsHI基因上下游的DNA片段,共约1kbp,用融合PCR连接上下游片段后,再连接到温敏型质粒pKS2上,然后电转化到解淀粉芽孢杆菌XH7中,最终构建了ptsG和ptsHI基因缺陷株.实验结果显示:在LB培养基中,tsG及ptsHI基因缺陷株的生长状况与野生型菌株无明显差异;在含葡萄糖的LB培养基中,ptsG基因缺陷株的最高菌密度比野生型菌株提高了28％,且平稳期比野生型菌株要长,而ptsHI基因缺陷株的最高菌密度比野生型菌株降低了约32％,与其在LB中的生长状况基本一致;ptsG和ptsHI缺陷株及野生型菌株经鸟苷发酵实验后,ptsG基因缺陷株的鸟苷产量比野生型菌株提高了约24％,ptsHI基因缺陷株的鸟苷产量则比野生型菌株降低了约82％.以上结果表明:解淀粉芽孢杆菌ptsG基因缺陷株具有良好的生长能力和产物合成能力.     

一株海洋芽孢杆菌调节黄曲霉aflR和aflJ表达研究

从中国东部黄海中分离出一株对黄曲霉的生长及黄曲霉毒素合成具有显著抑制效果的海洋芽孢杆菌.采用滤纸片法研究其抑制黄曲霉菌丝延长的情况,用Beacon试剂盒检测抑制毒素合成实验中毒素含量,用实时定量反转录聚合酶链式反应技术(real-time qRT-PCR)重点对aflR、aflJ两个基因的转录产物进行定量测定.实验结果表明该株海洋芽孢杆菌对抑制黄曲霉生长及毒素合成和aflR、aflJ的转录有较显著的效果.     

松材线虫拮抗细菌的筛选和鉴定

为了筛选对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)具有较高杀线活性的拮抗细菌,从马尾松林中分离获得了230株细菌,并从中筛选出8株对松材线虫具有较高杀线活性的细菌,其中JK-JS3菌株对松材线虫的杀线活性最高.将该细菌培养滤液分别稀释2倍、4倍、10倍处理松材线虫,72h后线虫的死亡率均达到100%;线虫死亡后虫体消解,消解率分别为100%、97.8%、96.4%.测定了该细菌培养滤液对香蕉穿孔线虫(Radopholus similis)和水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)等植物线虫的杀线活性,结果表明对不同种的线虫杀线活性有差异.该菌株培养滤液对松材线虫和小杆线虫(Rhabditis sp.)的杀线活性最高,其余杀线活性从高到低依次为拟松材线虫(Bursaphelenchus mucronatus)、腐生线虫(Panagrellus redivivus)、香蕉穿孔线虫和水稻干尖线虫.形态特征和革兰氏染色观察,该细菌为革兰氏阳性菌、产芽孢、具有周生鞭毛;经Biolog细菌鉴定仪进一步鉴定该细菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).